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PRL-3对肺癌细胞迁移侵袭及 RhoA活性调控的研究
目的探讨肝再生磷酸酶-3（ PRL-3）对人肺癌细胞侵袭能力的影响及相关机制。方法采用RT-PCR和Western blot检测高低转移能力不同的4种肺癌细胞及HBE细胞PRL-3 mRNA及蛋白的表达。免疫荧光检测A549细胞、 HBE细胞中PRL-3的定位。 PRL-3特异性小干扰RNA（ siRNA）转染高转移肺癌细胞株A549后，采用RT-PCR和Western blot检测肺癌细胞PRL-3和mDia1 mRNA及蛋白表达，MTT、迁移试验和Transwell检测肺癌细胞系增殖及迁移侵袭能力， G-LISA 方法检测RhoA 活性。结果肺癌细胞系（ A549，CI-H661） PRL-3 mRNA及蛋白表达高于HBE细胞。 A549细胞系中PRL-3定位于细胞质，而HBE细胞系中PRL-3则定位于细胞核周围。 PRL-3 siRNA能够显著下调A549细胞PRL-3 mRNA和蛋白表达水平，引起RhoA活性降低及其下游作用物 mDia1的表达降低， A549细胞的迁移侵袭能力降低（ P ＜0.01）。结论 PRL-3的表达与肺癌细胞系的迁移侵袭能力有关，PRL-3可能通过调控RhoA活性及mDia1表达促进肺癌细胞迁移侵袭。
关键词： RNA干扰 rho相关激酶类 细胞运动 促肝细胞再生磷酸酶-3 -
miR495、miR551a靶向干扰PRL-3表达抑制胃癌腹膜转移
目的:研究miR495、miR551a干扰质粒对SGC7901胃癌细胞中促肝细胞再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver-3,PRL-3)表达的影响,探讨基因干扰在胃癌治疗中的价值.方法:分别体外培养稳定转染后的SGC7901细胞系及未经处理的SGC7901细胞系,取对数生长期瘤细胞,0.5 mL(1×107/mL)细胞悬液接种于Balb/ca(nu/nu)裸鼠腹腔内,在SPF条件下饲养1 mo后处死,观察裸鼠成瘤率、瘤体生长情况及腹膜转移等情况,并行组织病理学检查.取各组部分移植瘤行荧光定量PCR检测,对比各组miR495、miR551a及PRL-3mRNA的相对表达水平.结果:各组裸鼠成瘤率均100％,其中两实验组裸鼠一般情况及生存期均好于对照组.取各组移植瘤行荧光定量PCR检测显示,两实验组裸鼠miRNA表达量显著高于对照组,PRL-3mRNA表达量低于对照组.转染质粒组胃癌迁移能力明显减弱.结论:转染靶向干扰PRL-3表达的miR495、mi551a真核质粒可以明显抑制胃癌细胞体内转移侵袭能力.
关键词： miR495 miR551a 促肝细胞再生磷酸酶-3 胃癌 动物模型 -
短发夹RNA沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因表达对乳腺癌MCF-7细胞生长和侵袭能力的影响
目的 构建以促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)为靶基因的短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,并探讨PRL-3-shRNA表达载体对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响.方法 构建PRL-3基因特异性shRNA表达载体,使用脂质体法将PRI-3-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞,采用Real-time PCR和Western blot分别检测转染后MCF-7细胞中PRL-3基因mRNA和蛋白的表达;运用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测转染后MCF-7 细胞的增殖水平,用流式细胞仪检测细胞凋亡的情况;采用Transwell小室法检测细胞侵袭力变化.计量资料采用单因素方差分析或重复测量方差分析.结果 酶切鉴定和测序分析证实PRL-3-shRNA表达载体成功构建.转染成功后,shRNA-1～3组PRL-3基因mRNA表达分别为(0.31±0.27)、(0.15±0.14)和(0.31±0.03),与空白组和阴性组(1.00±0.00、0.98±0.18)相比,差异有统计学意义(P<0.05).PRL-3shRNA-2组PRL-3蛋白的表达量明显低于阴性组和空白组(0.50±0.02比0.91±0.03和0.89±0.02,P<0.05);PRL-3-shRNA-2转染入MCF-7细胞后能明显降低其增殖水平(P<0.05);PRL-3-shRNA-2组凋亡率明显高于空白组和阴性组[(8.37±1.85)%比(1.60±1.58)%和(0.16±0.05)%,P<0.05];Trarmwell小室侵袭实验显示,PRL-3-shRNA-2组穿膜细胞数明显低于阴性组和空白组(P<0.05).结论 沉默PRL-3基因表达可抑制MCF-7细胞的增殖,促进凋亡,抑制其侵袭能力.
关键词： 乳腺肿瘤 促肝细胞再生磷酸酶-3 短发夹状小干扰RNA 基因治疗 -
促肝细胞再生磷酸酶-3基因对大肠癌细胞侵袭和失巢凋亡的调控
目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶(phosphatase of regenerating liver cell-3,PRL-3)基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制.方法 应用PRL-3基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人大肠癌HCT116细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测PRL-3 mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡情况.结果 转染组癌细胞PRL-3 mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关.与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈时间和浓度依赖性.琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,转染组细胞出现明显的凋亡现象:凋亡指数增加,出现明显的DNA条带.结论 PRL-3基因siRNA转染可明显抑制大肠癌细胞的锚着不依赖性增殖和恶性侵袭,其机制可能与诱导失巢凋亡有关.
关键词： 大肠肿瘤 促肝细胞再生磷酸酶-3 侵袭 失巢凋亡 -
小儿肾母细胞瘤中PRL-3的表达及其临床意义
目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)在小儿肾母细胞瘤、瘤旁组织中的表达,及其与肾母细胞瘤临床分期、病理类型、复发及化疗的关系.方法 用逆转录聚合酶链反应法、免疫组化S-P法从基因和蛋白水平检测39例肾母细胞瘤及30例瘤旁组织中PRL-3的表达,并对其与临床分期、病理类型、复发及化疗等进行相关性分析.结果 本组共检测肾母细胞瘤39例,其中30例为新鲜标本,9例为病理科存档石蜡标本；新鲜瘤旁组织30例.肿瘤复发者再次切除获得新鲜复发瘤标本3例.检测结果:PRL-3 mRNA在肾母细胞瘤组织中的表达明显高于瘤旁组织(f=5.16,P＜0.05),且随临床分期的增高其表达逐渐上升,经Spearman相关分析PRL-3 mRNA表达与临床分期呈正相关(r's=0.857,P＜0.05)；肿瘤组织恶性程度越高阳性表达率越高(P2tail=0.0049＜0.05)；复发的肿瘤组织及其原发瘤均为阳性表达；术前经过化疗的组织表达明显低于未经化疗者( P2tail=0.0348＜0.05)；在蛋白水平的检测也得到了与上述一致的结果.结论 PRL-3基因和蛋白在肾母细胞瘤中明显表达,且与肾母细胞瘤的临床分期、恶性程度及是否复发密切相关,提示PRL-3 mRNA和蛋白检测不但有助于对肾母细胞瘤临床分期、恶性程度的判断及复发可能性的预测,还可为术后治疗方案的制定提供有力的依据.
关键词： 促肝细胞再生磷酸酶-3 肾母细胞瘤 逆转录聚合酶链反应 免疫组织化学 -
鼻腔和鼻窦鳞状细胞癌细胞中PRL-3及VEGF表达的临床意义
目的:探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)和血管内皮生长因子(VEGF)在鼻腔、鼻窦鳞状细胞癌(SNSCC)中表达的临床意义.方法:采用免疫组织化学及RT-PCR方法检测62例SNSCC组织(SNSCC组)、30例鼻息肉组织(NP组)以及25例正常鼻腔黏膜(NM组)中PRL-3和VEGF的表达情况.结果:①SNSCC组中PRL-3和VEGF的表达明显高于NP组及NM组,差异有统计学意义(P＜0.05);②SNSCC组中PRL-3和VEGF的表达情况在不同性别、年龄患者中无明显差别(P＞0.05),而随着TNM分期的增高、分化程度的降低及伴淋巴结转移,PRL-3和VEGF的表达明显增高(P＜0.05);③在SNSCC组中PRL-3以及VEGF的表达呈正相关(r=0.468,P＜o.05).结论:PRL-3及VEGF在SNSCC的增殖与分化调控中可能起到了重要作用,PRL3和VEGF的高表达可反映SNSCC细胞的增殖活性,二者可能在肿瘤的侵袭转移过程中起到了协同促进作用.
关键词： 鳞状细胞癌 促肝细胞再生磷酸酶-3 血管内皮生长因子 -
RNA干扰沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因对结直肠癌细胞基质金属蛋白酶2和9表达的影响
目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)基因对结直肠癌细胞侵袭的影响和可能机制.方法 应用PRL-3基凶小干扰RNA(siRNA)转染处理结直肠癌细胞系HCT116后,分别采用实时定量PCR和Western印迹检测PRL-3基因和基质金属蛋白酶家族(MMP)-2、MMP-9的mRNA和蛋白水平;分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力;其次,将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察其在体内生长情况.结果 体外实验结果显示,PRL-3 siRNA可有效抑制结直肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P＜0.05,P＜0.01));转染组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白水平明显下调(P＜0.05).体内实验结果显示,对照组裸鼠组织癌细胞侵袭横纹肌和血管,而转染组未见这些现象.结论 采用PRL-3siRNA转染可抑制结直肠癌细胞侵袭,其机制可能与下调MMP表达有关.
关键词： 结直肠肿瘤 促肝细胞再生磷酸酶-3 肿瘤侵袭 基质金属蛋白酶 -
鼻腔鼻窦鳞状细胞癌细胞中PRL-3表达的临床意义
目的：探讨促肝细胞再生磷酸酶-3（PRL-3）在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌（SNSCC）中表达的临床意义。方法采用免疫组织化学及逆转录 PCR（RT-PCR）方法检测62例 SNSCC 组织（SNSCC 组）中 PRL-3蛋白的表达水平，并对30例鼻息肉患者（NP 组），以及25例正常鼻腔黏膜（对照组）做相同蛋白表达并进行对比。结果在蛋白水平和基因水平检测，均发现 SNSCC 组中 PRL-3的表达高于 NP 组及对照组，差异有统计学意义（P ＜0．05）。PRL-3的表达情况在不同的性别、年龄中差异无统计学意义（P ＞0．05），而随着 TNM 分期的增高，分化程度的降低及合并淋巴结转移，PRL-3的表达明显增高（P ＜0．05）。结论 PRL-3的表达可以对SNSCC 的增殖活性作很好的参照，表达强度可明显反映 SNSCC 细胞增殖活性，PRL-3可能是 SNSCC 的一个独立预后指标，提示预后不良。
关键词： 鼻腔 鼻窦 癌 鳞状细胞 促肝细胞再生磷酸酶-3
