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结核分枝杆菌γ－干扰素释放试验与人类白细胞分化抗原G联合检测肺结核的诊断效能评价
目的：探讨肺结核患者外周血特异性T细胞IFN－γ（ TB－IGRA）和人类白细胞分化抗原G（ HLA－G）的表达情况及其诊断肺结核的价值。方法采用回顾性研究设计方法，病例均来自2015年1月至12月绍兴市立医院呼吸科就诊的肺部疾病患者，根据临床和病理诊断分为肺结核组（34例）、肺癌组（25例）及非结核性肺炎组（25例），以及35名健康体检者入选为表观健康组，ELISA法检测结核特异性T细胞IFN－γ和sHLA－G的表达，流式细胞分析法检测mHLA－G的表达， Kruskal－Wallis检验比较组间差异，各项指标诊断肺结核的价值用ROC曲线分析。结果肺结核患者TB－IGRA、sHLA－G和 mHLA－G表达量的中位数分别为182．5 ng／L、99．44 U／ml 和13．63％，高于肺癌（117．0 ng／L、82．3 U／ml和9．12％）、肺炎（80．84 ng／L、34．2 U／ml和10．92％）和健康组（30．5 ng／L、31．28 U／ml和8．18％）（P值＜0．05）。 TB－IGRA、sHLA－G和mHLA－G诊断肺结核的ROC曲线下面积分别为0．842（95％CI：0．761～0．922）、0．746（95％ CI：0．652～0．840）和0．706（95％ CI：0．605～0．806）。当TB－IGRA、sHLA－G和mHLA－G的诊断界值分别为35 ng／L、60 U／ml和10％时，敏感性分别为88．24％、70．59％和67．65％，特异性分别为60％、72．94％和70．59％。3项指标联合检测的敏感性和特异性为88．24％和81．18％。结论肺结核患者结核特异性T细胞IFN－γ和HLA－G表达量均增加，虽然外周血中TB－IGRA检测具有较高的诊断价值，但与HLA－G联合检测显著提高诊断特异性，对肺结核的诊断具有一定临床应用价值。（中华检验医学杂志，2016，39：852－856）
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晚发型重度子痫前期患者胎盘中微小RNA-152及血清中可溶性人类白细胞抗原G蛋白的表达及其关系
目的 探讨胎盘中微小RNA(micro-ribonucleic acid,miRNA)-152及血清中可溶性人类白细胞抗原G(soluble human leukocyte antigen-G,sHLA-G)蛋白在重度子痫前期发病中的作用.方法 选择2010年7月至2012年3月在镇江市妇幼保健院妇产科产前检查并剖宫产分娩的20例妊娠36～40周的晚发型重度子痫前期患者,选择孕周匹配的20例剖宫产产妇作为正常对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测胎盘组织miRNA-152的表达:采用酶联免疫吸附试验检测血清sHLA-G蛋白含量.2组miRNA-152与sHLA-G差异比较采用两独立样本t检验,相关性采用Pearson相关分析. 结果 miRNA-152在重度子痫前期组胎盘中的表达为512.6±52.3,明显高于对照组(175.6±18.4),差异有统计学意义(t=7.06,P＜0.01).重度子痫前期组血清中sHLA-G的含量为(19.7±5.2) U/ml,明显低于正常对照组[(34.3±10.2) U/ml],差异有统计学意义(t=5.01,P＜0.05).重度子痫前期组和对照组胎盘组织miRNA-152与血清中sHLA-G表达均呈负相关(r=-0.52和-0.57,P＜0.05). 结论 miR-152在晚发型重度子痫前期患者胎盘组织中表达升高,使HLA-G mRNA的稳定性降低,产生基因沉默影响转录,导致血清sHLA-G表达减少,可能与晚发型重度子痫前期的发病有一定相关性.
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HLA-G蛋白及基因在子宫内膜异位症在位和异位内膜中的表达
目的探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)基因及蛋白在子宫内膜异位症(EM)在位和异位内膜组织中的表达及其生物学意义.方法应用免疫组化法和原位杂交法检测38例子宫腺肌症、30例卵巢子宫内膜异位症异位内膜及在位内膜、20例子宫肌瘤患者(对照组)在位子宫内膜中HLA-G蛋白和基因的表达.结果 HLA-G蛋白和基因在子宫内膜异位症患者异位和在位内膜组织中的表达均明显高于对照组(P＜0.01),但在异位内膜和在位内膜的表达无明显差异(P＞0.05).HLA-G蛋白在EM不同临床分期的表达无明显差异(P＞0.05),在增生期和分泌期子宫内膜的表达无差异(P＞0.05).结论 HLA-G的表达可能与子宫内膜异位症的发病有关.
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子痫前期患者血清及胎盘组织中人类白细胞抗原G的表达研究
目的:检测正常晚期妊娠妇女及子痫前期患者胎盘组织HLA-G的表达及血清中sHLA-G的浓度,探讨HLA-G在子痫前期发病中的临床意义.方法:用丰定量逆转录-聚合酶链技术(RT-PCR)检测37例正常晚期妊娠妇女(正常妊娠组)及41例子痫前期患者(轻度20例,重度21例)胎盘组织中HLA-G mRNA的表达;并用ELISA检测血清sHLA-G浓度.结果:(1)子痫前期胎盘组织中HLA-G mRNA表达水平分别为:轻度0.402±0.104、重度0.329 ±0.09,明显低于正常妊娠组的0.628±0.117(P＜0.01),轻、重度差异亦有统计学意义(P＜0.05).(2)子痫前期血清sHLA-G浓度:轻度45.5 ±11.9u/ml,重度31.2±10.3u/ml,均明显低于正常妊娠组的105.7±12.5u/ml(P＜0.01),轻重度差异亦有统计学意义(P＜0.01).(3)子痈前期患者血清sHLA-G浓度与胎盘组织HLA-G mRNA表达水平呈正相关(r=0.702,P＜0.01).结论:子痫前期血清sHLA-G浓度及胎盘组织中HLA-G表达水平均明显降低,可能与子痫前期发病及病情轻重程度相关.
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NK细胞、HLA-G、和HLA-DRB1等位基因在子痫前期发病机制中的作用研究
目的:研究子痫前期患者发病机制中相关的免疫学变化及基因背景.方法:SAP法检测血液中NK细胞数量.MTT珐检测NK细胞增殖能力.51Cr释放法测定NK细胞杀伤活性.免疫组化法检测胎盘蜕膜浸润的NK细胞数量及HLA-G蛋白表达水平.RT-PCR和real time PCR法检测胎盘蜕膜组织HLA-G mR-NA.PCR-SSP法检测两组HLA-DRB1等位基因频率,并分析母/儿间所携带某些HLA-DRB1等位基因配伍的频率.结果:①子痫前期患者外周血及其新生儿脐血NK细胞数均显著高于正常晚孕者及其新生儿.②子痫前期患者外周血及其新生儿脐血NK细胞增殖活性及杀伤活性均明显高于正常晚孕组(P＜0.05).③轻度与重度子痫前期组胎盘蜕膜NK细胞均多于正常晚孕组,但仅重度子痫前期组蜕膜NK细胞数量增加有统计学意义(P＜0.05).④轻度子痫前期组、重度子痫前期组和正常晚孕组之间HLA-G mRNA水平两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).⑤轻度子痫前期组HLA-G蛋白表达水平与正常晚孕组无显著性差异,重度子痫前期组胎盘HLA-G蛋白表达水平较正常晚孕组显著降低(P＜0.05).⑥两组孕妇和新生儿均检出13个HLA-DRB1等位基因,各等位基因频率在两组间均无明显差异.子痫前期组母不携带HLA-DRBl*04基因/儿携带DRB1*04基因、均不携带HLA-DRBl*14基因的频率显著高于正常晚孕组(P＜0.05);母/儿均不携带HLA-DRBl*10基因、均携带HLA-DRBl*14的频率显著低于正常晚孕组(P＜0.05).结论:①先兆子痫患者外周血、脐血及蜕膜的NK细胞数量增多,活性增强,在妊娠过程中影响母胎免疫耐受.②母婴所携带的某些HLA-DRBl基因配伍与子痫前期易感性或抗性相关;父源性HLA-DRB1*04基因与子痫前期易感性相关.
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HLA-G在肾移植受者外周血外泌体中表达的初步研究
目的 研究人类白细胞抗原-G (HLA-G)在肾移植受者外周血外泌体中的表达情况.方法 以2012年1月至2014年6月在单中心进行同种异体肾移植术且术后无排斥反应的12例肾移植受者(肾移植组)以及健康志愿者(对照组)5例为研究对象.每个对象收集5ml外周血并采用总外泌体提取试剂盒提取总外泌体.通过透射电子显微镜观察外泌体的大小及形态;流式细胞术检测血浆外泌体表面CD63、CD73、CD81和CD106的表达;蛋白印迹方法分析HLA-G在外泌体的表达情况.结果 在肾移植组12例中9例以及对照组5例中2例的外周血血浆获得外泌体,可见大小不一、呈现类似圆形或椭圆形、直径为40～100 nm的膜性微囊泡结构,透射电子显微镜下观察,符合外泌体形态和结构.将其标志分子CD63抗体包被磁珠实现捕获,肾移植组CD81阳性率为(78.57±12.35)％,CD106为(45.39±11.23)％,CD73为(63.37±15.62)％;对照组CD81阳性率为(35.37±8.42)％,CD106为(12.44±2.31)％,CD73为(10.23±2.57)％.肾移植组9例受者血浆外泌体均表达HLA-G;对照组5例仅中1例呈低表达.结论 肾移植术后无排斥反应患者血浆外泌体高表达HLA-G,外泌体可能在移植后的免疫耐受中发挥着重要作用.
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异基因造血干细胞移植受者外周血中可溶性HLA-G与急性GVHD的相关性
目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)受者外周血中可溶性HLA-G(sHLA-G)的水平与急性移植物抗宿主病(aGVHD)间的相关性以及与CD4+CD25~(hlgh)调节性T淋巴细胞(Treg)水平的相关性.方法 选择27例allo-HSCT受者,将其中13例术后发生aGVHD者作为aGVHD组,14例未发生aGVHD者作为对照组.在移植预处理前、移植后第2、4、8、14周时,分别抽取两组受者清晨空腹肘静脉血2～4 ml,采用酶联免疫吸附试验双抗夹心法定量检测sHLA-G,采用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg.动态监测术后第2和14周受者sHLA-G水平的变化;动态监测和分析术后第8和14周两组受者间sHLA-G的差异.观察sHLA-G与发生aGVHD的相关性;检测术后第14周两组受者CD4+CD25+Treg的数量,观察sHLA-G水平与CD4+CD25+Treg的相关性.结果 预处理前,对照组和aGVHD组受者sHLA-G的水平分别为(75.4±13.1)/μg/L和(47.0±14.1)btg/L,两组间差异有统计学意义(P<0.05).术后第8周和第14周,对照组受者sHLA-G的水平明显高于相应时间点aGVHD组受者,两组间差异均有统计学意义(P<0.01).对照组受者术后第14周的sHLA-G水平与第2周相比,增长了1.2～3.4倍,两时间点的差异有统计学意义(P<0.05).术后第14周,通过Spearman等级相关检验显示受者sHLA_G水平与CD4+CD25+Treg比例具有统计学上的相关性(相关系数r=0.810,P<0.05),结论 allo-HSCT后受者体内sHIA-G对aGVHD的发生起负性调节作用;sHLA-G的水平与外周血CD4+CD25~(hlgh) T淋巴细胞的比例旱正相关,二者之间可能存在相互诱导和调节的信号途径,在诱导和维持移植免疫耐受中起着重要的协同作用.
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人类白细胞抗原-G在妊娠滋养细胞疾病中的表达
目的:探讨人类白细胞抗原-G(HLA-G)在妊娠滋养细胞疾病中的表达及意义.方法:运用实时荧光定量RT-PCR技术分别检测18例部分性葡萄胎、19例完全性葡萄胎、19例侵蚀性葡萄胎、20例绒毛膜癌和20例正常妊娠绒毛组织中HLA-G mRNA的表达,HLA-G mRNA的表达以PCR循环数阈值(Ct值)表示.Western blot印迹法检测组织中HLA-G蛋白质的表达,同时运用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组血浆中可溶性HLA-G(soluble HLA-G,sHLA-G)的表达水平.结果:各组组织中HLA-G mRNA、HLA-G蛋白质和血浆中sHLA-G的表达水平由弱至强依次为正常妊娠组、部分性葡萄胎组、完全性葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组、绒毛膜癌组.各组间HLA-G mRNA、HLA-G蛋白质和血浆中sHLA-G表达水平的差异均有显著性意义(P＜0.05).结论:在妊娠滋养细胞疾病的发生、发展过程中,滋养细胞通过上调HLA-G的表达水平实现免疫逃逸,有利于其异常增殖、浸润和转移.
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原因不明复发性流产患者绒毛组织中 HLA-G mRNA的表达
目的：探讨HLA‐G mRNA在原因不明复发性流产患者绒毛组织中的表达及意义。方法运用实时荧光定量RT‐PCR技术分别检测28例原因不明复发性流产患者和30例健康对照组绒毛组织中HLA‐G mRNA的表达，HLA‐G mRNA的表达以PCR循环数阈值（Ct值）表示。结果两组HLA‐G mRNA的表达水平由低到高依次为复发流产组、健康妊娠组。两组间HLA‐G mRNA表达水平的差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论 HLA‐G mRNA的表达水平与健康妊娠的维持具有相关性。
