首页 > 文献资料
-
多重聚合酶链反应联合芯片电泳在人乳头瘤病毒基因分型检测中的应用
研究证实HPV感染是CIN和宫颈癌的主要病因,而且不同HPV亚型感染的致病性和后果也有差异~([1-2]).HPV分型检测对临床CIN和宫颈癌筛查和评估、病程的进展监测、治疗后的随访、以及人群的流行病学状态和病毒疫苗的研制都有重要意义.目前用于临床的HPV检测技术主要有杂交法与实时荧光定量PCR~([3]),但这2种方法存在操作复杂、检测时间较长等不足.例如,导流杂交基因芯片技术即凯普导流杂交．HPV DNA检测法虽然能同时对多种HPV基因型进行分型检测,但操作繁琐、杂交时间较长~([4-5]).芯片电泳(microchip electrophoresis)具有快速分离和低样品消耗量等优点~([6]),目前已广泛应用于多种类型基因分析研究~([7]).本研究建立一种基于芯片电泳的HPV快速分型方法,为临床筛查提供依据.
-
芯片电泳在免核酸提取PCR产物分析中的应用
目的：探讨两种免核酸提取试剂联合应用DNA 芯片电泳是否能快速、准确地用于新德里金属酰胺酶（NDM-1）阳性细菌的鉴定，了解该联合检测方法在流行病病原体快速鉴定中的应用价值，为流行性病原体的快速鉴定提供便捷手段。方法取1个（或0．1个）麦氏单位 NDM-1（＋）菌液加入免核酸提取试剂后直接进行PC R扩增，扩增产物用自制的芯片电泳进行产物分析，通过样品迁移时间与标准品比较精确计算出目的基因片段长度并大致推算产物的含量。结果两种免核酸提取试剂联合芯片电泳分析技术能快速、准确、高效地扩增出新德里金属酰胺酶NDM-1（＋）细菌的目的基因片段，尤其湖南某厂家的试剂灵敏度更高。结论该联合检测方法在流行病尤其是突发性病原体的快速鉴定、监测中具有潜在的临床应用价值。
关键词： 芯片电泳 新德里金属酰胺酶阳性细菌 免核酸提取试剂 -
基于纳米技术的芯片电泳快速检测脂蛋白及其亚型的研究
目的 建立芯片电泳分离血清脂蛋白及其亚型的方法并初步探讨其临床应用价值.方法 利用自制的微流控芯片,选择Tricine缓冲液作为电泳缓冲液,纳米金作为添加剂,分离经硝基苯并嗯二唑-C6-酰基鞘胺醇(NBD C6-ceramide)预染的脂蛋白,激光诱导荧光技术检测.探讨不同颗粒大小、不同浓度的纳米金对脂蛋白分离的影响,选择佳的电泳条件；确定芯片电泳分离血清脂蛋白的线性范围、检测限和重现性；采用芯片电泳分析35例冠心病(CHD)患者与30名健康体检者(对照组)的血清脂蛋白.结果 在缓冲液中添加20 nmol/L 5 nm纳米金,大而轻低密度脂蛋白(lLDL)、小而密低密度脂蛋白(sdLDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)在3 min内实现基线分离；在优化的分离条件下,lLDL、sdLDL、VLDL和HDL芯片电泳的线性范围[信噪比(S/N)=3]分别为0.01 ～0.8、0.04 ～1.0、0.04～1.0、0.02～0.8 mg/L;检出限分别为5、5、15和8μg/L.对健康体检者的血清样本连续测定5次,lLDL、sdLDL、VLDL和HDL的峰面积相对标准偏差(RSD)为分别3.5％、2.2％、4.5％、3.9％.CHD组sdLDL与VLDL水平增高,HDL水平降低,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01、P＜0.001).结论 基于纳米技术的芯片电泳可快速、简便地测定脂蛋白及其亚型,对评价CHD的危险因素,实现对CHD的早期检测、预防及有效制定CHD防治策略具有重大意义.
-
基于芯片电泳技术的低密度脂蛋白检测及应用研究
目的 建立芯片电泳分离血清低密度脂蛋白并探讨其临床应用价值.方法 采用自制的微流控石英芯片,以pH9.8、50 mmol/L的Tricine作为芯片电泳缓冲体系,选择十二烷基硫酸钠(SDS)作为添加剂,分离血清脂蛋白.结果 低密度的2个亚型,即大而轻低密度脂蛋白(lLDL)、小而密低密度脂蛋白(sdLDL)在3min内得到有效分离.与健康体检者相比,冠心病患者体内含有更高浓度的sdLDL.结论 芯片电泳能快速、简便、有效地分离出冠心病患者血清中低密度脂蛋白亚型,表明此法有望成为检测sdLDL的常规分析方法.
-
用Cy5-ddNTP结合修饰引物延伸测定人类3种SNP
目的:建立一种简便快速的分析方法检测人类基因中的单核苷酸多态性(SNP).方法:在适当的dNTPs和Cy5荧光染色标记的ddNTPs存在的情况下,利用修饰引物从SNP位点进行特异性碱基延伸,延伸产物通过芯片电泳来检测.修饰引物的3'端第三个碱基处人为导入一个错配碱基来改善引物延伸反应的开关特性.结果:测定了人类p53、CK20、CK30基因上3种SNP的可能形态(野生型、突变型和杂合型),所有样本在芯片电泳中100 s左右被准确检测.结论:该方法简便易行,可用于快速检测已知的SNP.
-
用芯片电泳快速检测人p53基因外显子8上的突变点
目的:建立简单快速的分析方法检测基因突变.方法:利用修饰引物进行特异性单碱基延伸,采用Cy5荧光染色标记的ddNTP,并通过芯片电泳来检测.结果:实测了合成人p53基因外显子8上突变点的3种可能形态(野生型,突变型和杂合型),并测定了一系列不同比例突变率的混合样本,低至5%突变率.所有样本分别于芯片电泳中在100 s之内被检测出来.结论:该方法操作简单易行,可用于快速检测已知的基因突变.
关键词： 修饰引物 单碱基延伸 Cy5-ddNTP 芯片电泳 人p53基因外显子8 -
芯片电泳的发展及其在医药学中的应用
介绍近几年来兴起的芯片电泳技术,以及其在医药学方面的应用.芯片电泳是基于传统毛细管电泳发展起来的一种新型的微全分析系统,具有高速、高效、需样品量极小、低耗等特点,在药物、DNA、蛋白质等复杂样品的分离分析方面有巨大潜力.
-
芯片电泳快速检测高危型人类乳头状瘤病毒
目的 建立人类乳头状瘤病毒(human papillomavims,HPV)52和58基因型高危型的芯片电泳检测方法.方法 选取114例宫颈细胞检测患者,提取宫颈脱落细胞DNA.PCR扩增HPV高危型52和58基因型特异性DNA序列,应用优化的芯片电泳分析方法对扩增产物进行分离检测.根据细胞学诊断结果将研究对象分为4组:正常组、不典型鳞状细胞组、低度鳞状上皮内病变组和高度鳞状上皮内病变组,比较各组的HPV52、58基因型感染情况.结果 114份标本中.HPV52基因型检出率为8.8%(10/114),HPV58基因型检出率为33.3%(38/114).与正常对照组相比较,各病变组HPV52基因型检出率差异有统计学意义(P<0.05);而HPV58基因型检出率在病变组和正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 芯片电泳法检测快速、成本低,可用于HPV52、58基因型感染的筛查.
-
毛细管PCR芯片电泳快速检测NDM-1耐药菌方法的建立
目的 建立一种毛细管聚合酶链反应(PCR)芯片电泳方法,实现快速、准确地检测新德里金属-β-内酰胺酶(NDM-1)耐药菌.方法 根据NDM-1基因设计1对特异引物,对临床微生物检测的80株耐药肠道杆菌和60株鲍曼不动杆菌的细菌培养液进行毛细管振荡流PCR扩增,芯片电泳快速检测PCR产物.将NDM-1阳性标本进行测序验证,同时对NDM-1阳性菌细菌悬液定量梯度稀释进行PCR,考察免核酸提取PCR的敏感度.结果 毛细管PCR芯片电泳方法检测出2例阳性标本,其产物经测序验证,确定携带NDM-1基因,阳性率为100％.该方法在40 min内实现产NDM-1耐药菌扩增产物的快速分离检测,细菌检测线为1.15×101 CFU/mL.结论 毛细管PCR芯片电泳方法检测NDM-1基因准确性高、特异性强,具有快速、廉价等特点,适合NDM-1阳性菌的早期快速现场诊断.
关键词： 新德里金属-β-内酰胺酶 芯片电泳 聚合酶链反应 -
SNP测定结合芯片电泳法快速鉴别人参和西洋参
目的:建立快速、准确的单核苷酸多态性(SNP)测定法鉴别人参、西洋参及2种样本的混合物.方法:根据ITS和5.8s基因上人参、西洋参的SNP位点设计特异性引物进行PCR扩增,每对PCR引物中有1条引物的3'端正好位于SNP位点上,当互补时发生PCR扩增反应,否则无扩增产物;另1条引物决定着PCR产物的长度.用芯片电泳法检测PCR产物的长度,根据PCR的电泳条带大小进行鉴别.为了减少非特异性扩增,在引物3'端的第3个碱基处人为引入1个错配碱基.结果:当退火温度为55℃时,出现252 bp条带的为人参,430 bp条带的为西洋参.该答别反应特异性高、重现性好、操作简便,能在同一反应中准确鉴别人参、西洋参.一系列不同比例的混合样本测定结果表明,可以检出5%的掺杂成分.电泳分离时间小于100 s.结论:通过测定人参和西洋参基因组DNA中的SNP,可以进行品种鉴别和质量控制,可用于中药材的快速鉴定.
关键词： 人参 西洋参 单核苷酸多态性(SNP) ITS和5.8s基因 芯片电泳 -
盐酸氯丙嗪和盐酸异丙嗪制剂的芯片电泳柱后化学发光检测
目的:利用自制整体浇注式PDMS电泳芯片,实现药物复方制剂中盐酸氯丙嗪和盐酸异丙嗪的芯片电泳分离和检测.方法:通过柱后化学发光衍生过程.建立微流控芯片化学发光测试方法.结果:两者的分离度可达1.51,盐酸异丙嗪的检出限为2.51×10-1g.mL-1,盐酸氯丙嗪的检出限为5.00×10-8g·mL-1.结论:本方法具有简便快速、分离快速及检测灵敏等优点,显示了该集成微芯片分析系统在药物检测方法学中具有广泛的潜在应用前景.
-
用于毛细管电泳和芯片电泳DNA分离的筛分介质
毛细管电泳和微芯片电泳是用于核酸分子分离的强有力工具,其筛分介质的选择尤为重要,是目前研究的热点之一.本文是按照均聚物和共聚物的分类,综述了线性聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚环氧乙烷、聚N,N-二甲基聚丙烯酰胺、丙烯酰胺与聚N,N-二甲基聚丙烯酰胺的共聚物等各种筛分体系的性质,包括其优点以及缺点,并对各自在DNA等生物大分子分离方面的应用进展进行了评述.简要介绍了筛分机理以及添加剂的加入对提高聚合物的分离能力和稳定性的影响.
-
芯片电泳测定辣椒油、辣椒粉、火锅底料中罗丹明B染料
建立了辣椒油、辣椒面、火锅底料中罗丹明B染料的芯片电泳测定方法.罗丹明B在0.527-501μg/L质量浓度范围内线性关系良好,方法的检出限为0.182μg/L,方法的回收率为89.5-106.3％.该方法简单、灵敏度高、分析时间短,适用于辣椒粉、辣椒油和火锅底料中罗丹明B染料的测定.
