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患儿分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因分析
目的 分析临床患儿分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性和耐药基因.方法 收集2015年6月-2018年6月医院的住院患儿分离非重复的CRKP 29株,对小抑菌浓度(MIC)进行检测,PCR扩增常见的碳青霉烯类耐药基因(blaKPC,blaSME,blaGES,blaVIM,blaIMP,blaNDM,blaOXA-48)、超广谱β-内酰胺酶耐药基因(blaSHV,blaTEM,blaCTX-M-1group,blaCTX-M-2group,blaCTX-M-8group,blaCTX-M-9group)、头孢菌素酶耐药基因(blaMOX,blaCIT,blaDHA,blaACC,blaEBC,blaFOX).结果 29株CRKP对美罗培南和亚胺培南完全耐药,对阿米卡星,米诺环素,左氧氟沙星,氨曲南的耐药率分别为3.45％,10.34％,17.24％,93.10％,对头孢类和酶抑制类药物均耐药,对多黏菌素和替加环素均敏感.29株CRKP均携带碳青霉烯类耐药基因,以blaNDM-5基因阳性率高为51.72％(15/29),blaNDM-1基因阳性率为31.03％(9/29),blaKPC-2基因阳性率为17.24％(5/29),1株既携带blaKPC-2又携带blaIMP-4.结论 本地区分离的患儿CRKP菌株均为多药耐药菌,患儿临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物耐药的机制主要是产N DM-5型碳青霉烯酶.
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产新德里金属-β-内酰胺酶耐药菌的相关文献计量分析
目的 从文献计量学角度对国内外产新德里金属-β-内酰胺酶(NDM-1)相关文献进行分析.方法 检索至今的Pubmed、Embase、CNKI、维普和万方数据库中NDM-1相关文献,对纳入研究的文献进行统计分析.结果 纳入研究的文献共57篇.目前有超过20个国家或地区有撰文报道该耐药菌,相关病例报告主要集中在印度和欧洲部分国家.结论 产NDM-1细菌全球流行趋势明显,国外已建立较为完善的监控体系并进行了初步研究.
关键词： 计量分析 新德里金属-β-内酰胺酶 -
新德里金属-β-内酰胺酶的原核表达及其多克隆抗体的制备
目的 原核表达新德里金属-β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase-1,NDM-1),并制备其多克隆抗体.方法 以临床分离的产NDM-1的臭鼻克雷伯杆菌为模板,PCR扩增NDM-1基因,克隆入pET-28a载体,构建重组原核表达质粒pET-28a-NDM-1,转化E.coli BL21 (DE3) pLyss,IPTG诱导表达重组蛋白.表达的重组蛋白经硫酸铵沉淀、离子交换层析、Ni亲和层析及分子筛层析纯化后,免疫日本大耳白兔,制备NDM-1多克隆抗体.抗体经硫酸铵沉淀和SPA-Sepharose亲和层析纯化后,Western blot鉴定其特异性.结果 重组表达质粒pET-28a-NDM-1经PCR及测序鉴定构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为28000,诱导表达的重组菌破菌上清存在较强的β-内酰胺酶活性,表明NDM-1蛋白为可溶性形式表达；终纯化获得的NDM-1蛋白纯度高于95％；制备的NDM-1多克隆抗体能与诱导表达的重组菌胞外蛋白特异性结合.结论 成功原核表达了NDM-1,并制备了其多克隆抗体,为NDM-1的快速检测提供了新的思路.
关键词： 新德里金属-β-内酰胺酶 原核细胞 基因表达 多克隆抗体 -
分离自住院患儿产NDM型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌分子流行病学调查
目的 了解产新德里金属-β-内酰胺酶(NDM)型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)分离株的分子流行病学特点.方法 收集2013年9月至2016年3月住院患儿的非重复CRKP;采用PCR方法扩增NDM型碳青霉烯酶基因,并对阳性产物进行DNA测序;对产NDM酶菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),并利用BioNumerics软件进行分型;比较不同型别菌株患儿的临床特征.结果 从93株CRKP中检出42株产NDM酶,其中23株产NDM-1酶,19株产NDM-5酶.产NDM酶CRKP分为14个PFGE型别(A型～N型),其中A型、M型和N型为优势型别,占菌株总数69％(29/42),其余11型为非优势型别,占菌株总数31％(13/42).A型菌株(24％,10/42)均产NDM-1酶,M型菌株(17％,7/42)以产NDM-5酶为主,N型菌株(29％,12/42)均产NDM-5酶,其余l1个型别菌株(31％,13/42)以产NDM-1酶为主.优势型别组菌株主要在儿科ICU流行,而非优势型别组菌株在儿科各病区散发分布.优势型别组患儿在入院48小时后发生感染率、留置引流管比例和ICU住院时间均高于非优势型别组患儿,差异有统计学意义(P＜0.05);两组患儿的年龄、性别、抗生素使用和预后等的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 住院患儿产NDM酶CRKP的碳青霉烯酶类型以NDM-1和NDM-5多见,A型、M型和N型为PFGE优势型别,优势型别在儿科ICU存在小范围播散.
关键词： 新德里金属-β-内酰胺酶 碳青霉烯酶 肺炎克雷伯菌 分子流行病学 -
毛细管PCR芯片电泳快速检测NDM-1耐药菌方法的建立
目的 建立一种毛细管聚合酶链反应(PCR)芯片电泳方法,实现快速、准确地检测新德里金属-β-内酰胺酶(NDM-1)耐药菌.方法 根据NDM-1基因设计1对特异引物,对临床微生物检测的80株耐药肠道杆菌和60株鲍曼不动杆菌的细菌培养液进行毛细管振荡流PCR扩增,芯片电泳快速检测PCR产物.将NDM-1阳性标本进行测序验证,同时对NDM-1阳性菌细菌悬液定量梯度稀释进行PCR,考察免核酸提取PCR的敏感度.结果 毛细管PCR芯片电泳方法检测出2例阳性标本,其产物经测序验证,确定携带NDM-1基因,阳性率为100％.该方法在40 min内实现产NDM-1耐药菌扩增产物的快速分离检测,细菌检测线为1.15×101 CFU/mL.结论 毛细管PCR芯片电泳方法检测NDM-1基因准确性高、特异性强,具有快速、廉价等特点,适合NDM-1阳性菌的早期快速现场诊断.
关键词： 新德里金属-β-内酰胺酶 芯片电泳 聚合酶链反应
