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杂交温度文献资料
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耐热碱性磷酸酶在细菌染色体定量杂交方法中的应用
定量DNA杂交是细菌遗传学分类的重要方法,其结果受到杂交温度和对杂交体进行检测时环境温度的影响.本研究利用耐热碱性磷酸酶取代传统的不耐热酶于微量板定量杂交试验,获得了较为满意的结果.
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胰腺癌石蜡包埋组织中微RNA原位杂交检测技术的优化
目的 对采用原位杂交检测10％ 中性甲醛溶液固定的石蜡包埋(FFPE)胰腺癌组织切片中微RNA(miR)的方法进行技术优化,以提高miR的阳性检出率.方法 将20例胰腺癌组织标本构建成组织芯片,使用锁核酸(LNA)标记的探针和显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达.杂交温度分别设为48℃、53℃、56℃,杂交后采用3种不同的洗涤条件(温度、时间和3种不同洗涤缓冲液)进行杂交条件优化.将126例胰腺癌组织标本制成组织芯片,采用优化的显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达.结果 miR-21探针佳杂交条件为杂交温度53℃ 下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ在65℃ 下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min;miR-34a探针佳杂交条件为杂交温度53℃ 下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ分别在4℃ 和65℃ 下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min.在126例胰腺癌组织中,84例(66.7％)miR-21表达阳性,77例(61.1％)miR-34a表达阳性.结论 在FFPE胰腺癌组织切片中,miR-21和miR-34a的佳杂交温度均为53℃,选择合适的杂交后洗涤温度和洗涤缓冲液有利于提高miR的阳性检出率.
