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细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌cppB基因稳定性的影响
细胞壁缺陷变异是细菌变异的一种特殊类型,细胞壁缺陷不但导致细菌的形态发生改变,也常常导致细菌代谢活性、致病性、遗传等多种特性发生改变.研究证实细胞壁缺陷可导致细菌丧失其R因子等质粒甚至造成细菌染色体基因碱基序列或活性发生改变,但关于细胞壁缺陷导致细菌隐蔽性质粒丢失或其碱基序列改变尚未见报道.为探讨细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌隐蔽性质粒的影响,本文对青霉素诱导形成的淋病奈瑟菌细胞壁缺陷型的cppB基因进行了检测与分析.
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异烟肼耐药结核分支杆菌katG基因分析
结核分支杆菌(M tuberculosis, TB)的katG基因是位于细菌染色体上的结构基因,全长2223bp,它的编码产物是过氧化氢-过氧化物酶,而后者在维系异烟肼(Isoniazid, INH)杀菌毒性中,发挥重要作用.因此,katG基因结构的正确性是编码产生功能正常的过氧化氢-过氧化物酶的先决条件,也是发挥INH特有的药理作用的重要基础.通过检测katG基因的分子结构,尤其是检测某些关键位点的碱基突变,可以快速发现TB对INH耐药的变异情况,对及时的指导临床用药,具有重要的意义.
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结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统的研究进展
毒素-抗毒素系统(toxin-antitoxin system, TAS)早是作为质粒的稳定系统而发现的,这一系统依赖不稳定的抗毒素阻止活性毒素从亲和性蛋白复合物中释放出来。在应激条件下,抗毒素被蛋白酶降解或者消耗,毒素释放后干扰或改变细胞的DNA复制、ATP和细胞壁合成,介导细胞死亡或耐药持久性的形成[1],毒素也可以作为一种抗防御蛋白进而中和细菌中质粒的抗性[2]。细菌染色体上的TAS与细胞持久化的形成、噬菌体防御、压力调节和程序性细胞增长阻滞相关[3]。根据毒素与抗毒素所形成的亲和性复合物之间的相互作用不同,将TAS分为5种类型,在Ⅰ型 TAS 中,抗毒素是一种小分子RNA,可以抑制毒素的 mRNA,进而抑制毒素的合成。在Ⅱ型TAS中,毒素和抗毒素通过形成蛋白复合物来抑制毒素的毒性。在Ⅲ型TAS中,抗毒素是一种包含RNA的假结体,该假结体可以直接和毒素蛋白结合[4]。在Ⅳ型TAS中,抗毒素蛋白通过与毒素的靶位结合来干扰毒素的毒性。而在Ⅴ型TAS中,抗毒素蛋白裂解编码毒素的mRNA[5]。
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Ⅱ型成簇恒间隔短回文序列及相关蛋白系统(CRISPR/Cas)研究近况
1987年在大肠杆菌K12的碱性磷酸酶( iap)基因的3′侧翼区首先发现了一类具有短回文特质的DNA重复序列[1]。2002年,这类结构被正式命名为成簇恒间隔短回文重复序列(CRISPR),CRISPR关联蛋白也同时得以命名[2]。2005年,3个研究课题组同时发现间隔序列可能源自于细菌染色体外的其他遗传物质,如噬菌体和接合质粒,并推论CRISPR/Cas系统可以抵制入侵的外源 DNA[3-5]。2007年,来源于侵染噬菌体的新的整合间隔序列得到实验验证;研究同时建立了新获得的间隔序列与细菌抵抗该噬菌体侵袭的直接关联关系,证明了CRISPR/Cas系统是抵抗噬菌体的获得性免疫系统[6]。 Marraffini和Sontheimer[7]证实CRISPR/Cas系统对于接合现象和质粒转化的干扰作用。近基于CRISPR/Cas作用机制的研究,发现了其在细菌毒力、致病性以及如何逃避宿主免疫系统等方面的相关作用[8]。
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耐热碱性磷酸酶在细菌染色体定量杂交方法中的应用
定量DNA杂交是细菌遗传学分类的重要方法,其结果受到杂交温度和对杂交体进行检测时环境温度的影响.本研究利用耐热碱性磷酸酶取代传统的不耐热酶于微量板定量杂交试验,获得了较为满意的结果.
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菌液直接进行聚合酶链反应快速检测葡萄球菌mecA基因的研究
耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)因其对β内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等药物的多重耐药而成为危害严重的医院感染病原菌之一,不适当的治疗常常造成病情的延误以及病原菌在病房内的流行,这就需要临床微生物室快速准确地检测出MRS.应用聚合酶链反应(PCR)直接检测mecA耐药基因,具有高度的特异性和灵敏度且报告时间较快[1].以往报道的PCR方法都要求先提取细菌染色体DNA做模板,我们在实验中发现不进行标本的预处理,直接以菌液进行PCR扩增,亦可得到满意结果.
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偏振荧光法定量测定细菌染色体的同源性
定量DNA-DNA杂交技术在细菌基因鉴定和分类方面发挥着重要作用,固相微孔板法,因其简便而被国内外微生物学工作者广泛应用[1-3].但因残留的多糖对DNA包板的影响,导致两种DNA杂交后同源性计算的误差,有碍细菌的鉴定和分类.液相杂交可避免这一不足.本研究应用一种新的荧光染料SYBR Green1特异性结合双股DNA的特性,并借助偏振荧光技术的敏感性,对10株临床分离菌进行了种间同源性测定,报告如下.
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喹诺酮类药与其他药物相互作用的探讨
喹诺酮类药物在临床被广泛应用于各种感染的治疗,此类药物分为4代,目前临床应用较多的为第3代,常见的药物包括诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、氟罗沙星等。喹诺酮类和其他抗菌药的作用位点不同,它们以细菌的DNA为标靶。细菌的双股DNA扭曲成为袢状或螺旋状(称为超螺旋),使DNA形成超螺旋的酶称为DNA回旋酶,喹诺酮类药物可妨碍此种酶,进一步造成细菌染色体的不可逆损害,而使细菌终止分裂[1]。此类药物对多种革兰阴性菌有杀菌作用,广泛用于泌尿生殖系统疾病、胃肠疾病、呼吸道疾病和皮肤组织的革兰阴性细菌感染[2]。多年来,该类药物在临床应用中与多种药物发生相互作用,应引起临床的足够重视。
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细菌的耐药性与超广谱β-内酰胺酶
细菌耐药性分为固有耐药(intrinsic resistance)与获得性耐药(acquired resistance).固有耐药是由细菌染色体决定,代代相传的耐药性.获得性耐药是指细菌在接触抗生素后,改变代谢途径,自身对抗生素或抗菌药物具有不被杀灭的抵抗力.这种获得性耐药大多由质粒介导,少数由染色体介导[1].
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细菌质粒DNA基因的研究进展
细菌质粒是细菌染色体外的遗传物质,以超螺旋状态存在于宿主细胞胞浆中.它具有自主复制和转录能力,质粒的复制和转录依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质.常用的质粒是大肠杆菌的质粒[1].现就细菌质粒DNA的种类、特性、复制的类型、常用的载体,以及细菌质粒DNA的制备、分离、提取、纯化、鉴定和保存方法综述如下.
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细菌的耐药性与超广谱β-内酰胺酶
细菌耐药性分为固有耐药(intrinsic resistance)与获得耐药(acquired resistance).固有耐药是由细菌染色体决定,代代相传的耐药性.获得性耐药是指细菌在接触抗生素后,改变代谢途径,自身对抗生素或抗菌药物具有不被杀灭的抵抗力.
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志贺菌属致病的研究进展
致病岛是指细菌染色体上具有典型结构特征的基因片段,主要编码细菌毒力及代谢相关产物.志贺菌属基因组中已发现了多个致病岛,并广泛存在于该菌属的各群细菌中,与致病性和耐药性等密切相关.对志贺菌属致病岛的研究为进一步深入理解其致病机制、开发防治细菌性痢疾的新策略提供了理论依据.
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革兰阴性杆菌基因盒-整合子系统与耐药性的研究进展
革兰阴性杆菌耐药机制十分复杂,既有天然耐药又有获得性耐药.其遗传物质基础在于细菌染色体、质粒、转座子及近年来发现的基因盒-整合子系统,后者是一种可以移动的基因元件系统,被认为是革兰阴性细菌多重耐药性迅速发展的主要原因.
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聚合酶链反应结合地高辛标记寡核苷酸杂交检测肠道致病菌的应用
16S rDNA是细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序列,既保守又相对,呈现出保守区和可变区交错排列的状态.根据这些特点,我们在16S rDNA保守区设计聚合酶链反应(PCR)引物,用一对通用引物在适宜的PCR反应条件下就可以将所有细菌的相应基因片段全部扩增出来,同时利用可变区设计地高辛标记的种特异性寡核苷酸探针与扩增产物进行斑点杂交而区分不同细菌.现报告如下.
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质粒介导喹诺酮耐药基因研究进展
以往的观点认为,喹诺酮类药物耐药主要由于细菌染色体上的药物靶蛋白突变造成,但1998年发现了一种质粒介导的喹诺酮耐药基因(quinolone resistance,qnr),后命名为qnrA1,它可以通过质粒在细菌水平传播转移,Qnr蛋白能够保护DNA螺旋酶不受喹诺酮类药物的影响[1].随后另外两种质粒介导的喹诺酮耐药基因,氨基糖苷类乙酰转移酶新亚型[ aac(6′)- Ib-cr]和喹诺酮外排蛋白基因(quinolone efflux protein A,qepA)也相继发现[ 2-4].
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118株淋球菌耐药检测结果
由于抗生素的广泛使用,细菌染色体的突变及耐药基因的转移等原因,淋球菌对抗生素的耐药率正逐年上升,给淋病的防治带来很大困难.我们对本地区118株淋球菌进行了抗生素的体外敏感性检测,现报告如下.
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A/E大肠杆菌LEE致病岛
致病岛(pathogenecity island)是细菌染色体上编码毒力相关基因的特殊区域,是在细菌学领域对致病性细菌致病机理的研究中出现的一个新概念,是某些致病性细菌在进化过程中适应环境的变化而获得的毒力基因.人们发现在许多病原性细菌中都存在着致病岛,致病岛通常具有以下特点[1]:(1)致病岛是一组编码细菌毒力因子的基因簇,是染色体上一个分子量较大的片段;(2)致病岛两端通常具有重复序列(RS)或插入元件(IS);(3)G+C含量与宿主菌染色体G+C含量有明显差异;(4)不稳定,含有潜在的可移动元件;(5)通常位于细菌染色体tRNA位点上.致病岛的发现与研究为我们了解细菌的致病性及毒力因子提供了新的途径.
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致病性大肠杆菌毒力岛插入位点的特征性研究
毒力岛是细菌染色体上具有特殊结构特征并与细菌致病性具有相关性的分子量较大的DNA片段,目前已在致病菌里发现有33个功能明确的毒力岛,其中致病性大肠杆菌中就有12个.已有资料发现许多毒力岛往往在染色体上的tRNA位点处插入,而tRNA因其特殊的空间结构和保守的二级结构为外源性DNA的插入提供了有利条件.那么tRNA位点到底与毒力岛的存在与获得,是否有规律可寻.为此,我们以大肠杆菌K-12的染色体全序列为参照,在包括其所有tRNA位点在内的区域设计引物,对6类致泻性大肠杆菌和Shigella f2a进行了染色体上tRNA位点的完整性分析,并用杂交加以证实.
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大肠杆菌O157噬菌体中vt2基因A、B亚单位的克隆与序列分析
1982年美国亚特兰大疾病控制与预防中心首次报道了由一种罕见的大肠杆菌血清型即O157:H7引起的出血性肠炎,此后的20多年中由O157所致的疾病在全世界范围内都有散发和暴发,尤其以1996年在日本的暴发流行为大家熟知,我国也有从患者、畜禽及肉制品中分离到该菌的报道.已知Vero毒素(Verotoxin,VTs)为该菌的主要毒力因子之一,包括两类生物学特性相似而理化特性及免疫学特性有很大差异的VT1和VT2.流行病调查结果显示,绝大多数临床分离的高毒力O157:H7菌株都单独或联合表达VT2毒素,因此对大肠杆菌O157的vt2毒力基因的研究是尤为重要.据报道编码VT2毒素的基因可能位于温和噬菌体上(编码VT的噬菌体称为VT噬菌体),这些噬菌体具有毒力传递能力,感染宿主菌后能将噬菌体基因整合到细菌染色体上,使宿主菌获得产生相应毒素的能力.国外已有不少有关携带毒力基因噬菌体的研究,但目前国内对大肠杆菌O157的vt研究均集中在检测为主,而未涉及VT噬菌体.因此本文开展了大肠杆菌O157菌株诱导释放的噬菌体中vt基因的研究.
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大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶菌株的分布及耐药分析
大肠埃希菌(ECO)和肺炎克雷伯菌(KPN)是引起临床感染常见的革兰阴性杆菌,其对抗菌药物的耐药性日趋严重.细菌耐药性问题正日益成为全球医药界关注的焦点,随着第三、四代头孢菌素的广泛应用,导致细菌对新一代β-内酰胺类药物耐药,其主要原因是细菌染色体或质粒介质的ESBLs的产生.为了解我院产ESBLs菌株的发生率和耐药特性,制定有效对策控制其传播和流行,我们对近2年从临床标本中分离的367株ECO和KPN进行了ESBLs检测及药敏分析,现报道如下.