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经输血传播疾病的实验室检测及其进展
目前，已知的输血传播疾病有十几种，其中主要有乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病（AIDS）、梅毒、人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ/Ⅱ型（HTLV-Ⅰ/Ⅱ）感染和巨细胞病毒感染（CMV）等。目前，大多数国家已规定必须对献血者及血液筛查这6种病原体。现就目前这几种主要输血传播疾病的实验室检测及其新进展情况作一概述。 一、血清免疫学检测 1.乙型肝炎病毒(HBV)感染检测［1］: 对献血者HBV感染的检测，大多数国家通常只检测HBV表面抗原(HBsAg)。检测HBsAg方法有间接免疫凝集试验，如间接血凝试验（IHO）、乳胶凝集试验等，敏感性为10～100 μg/L，不适合对献血者的筛查。随着敏感性可达0.1～1.0 μg/L的酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫试验（RIA）的建立，尤其是ELISA具备试剂稳定、无危险无污染、可自动化等优点，现已经成为各国规定的用于献血者检测的标准方法。由于单克隆抗体技术的发明、基因工程表达抗原、人工合成多肽和新的标记技术的应用，以及自动化检测设备的发展，ELISA检测的敏感性和特异性得到极大提高。
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非小细胞肺癌相关多肽IgY抗体的制备及其ELISA检测研究
目的 制备抗非小细胞肺癌(NSCLC)相关多肽的IgY抗体,并进行NSCLC酶联免疫吸附分析(ELISA)实验研究. 方法用人工自动合成仪合成2条肽段(长度分别为64 AA和36 AA),并分别偶联钥孔血蓝蛋白(KLH)作为抗原免疫鸡产生IgY抗体,水稀释-辛酸法结合硫酸铵沉淀法分离提取IgY,亲和层析进一步纯化特异性IgY,间接非竞争ELISA检测抗体效价,棋盘滴定法选择ELISA的适工作条件.将抗64 AA肽IgY抗体(Ab1)和抗36 AA肽IgY抗体(Ab2)联合,用ELISA检测96例NSCLC患者和102例正常人的血清. 结果成功制备了NSCLC相关多肽IgY抗体,效价Ab1为1 ∶ 104,Ab2为1 ∶ 105.用Ab1和Ab2组合作联合检测,以临界值0.241为阳性判断标准,96例肺癌患者血清中,阳性58例,敏感度为60.4 %;102例正常人血清中,阳性19例,特异度81.4 %.结论 运用IgY技术可以高效、大量制备多肽抗体,NSCLC相关多肽IgY抗体的ELISA检测实验表明IgY技术可在肺癌诊断中有较好的应用前景.
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1050名献血员的庚型肝炎病毒感染状况调查
庚型肝炎病毒(GBV-C／HGV)是近年来新发现的一种新型肝炎病毒，其基因组为单股正链的RNA病毒，主要经血传播，可致急、慢性肝炎和无症状病毒携带状态[1]。GBV-C／HGV感染呈全球分布，我国GBV-C／HGV感染分布较广，流行较为严重[2]。为了解合肥地区献血员中GBV-C／HGV感染情况，我们对合肥市某医院输血科献血员进行调查。1 材料与方法1.1 血清来源合肥市某医院输血科1998年3月～7月的所有献血员，共1110名，取血清1050份；所有血清检测抗-GBV-C／HGV后，剩余部分-40℃冻存备检GBV-C／HGVRNA。1.2 抗-GBV-C／HGV检测包被抗原为人工合成多肽，分别选自非结构区NS3、NS5，进行混合包被，部分序列参见文献[3]，EIA法检查血清中抗-GBV-C／HGV。1:20倍稀释血清，临界值=阴性对照平均OD值+0.25，≥临界值为阳性，否则为阴性，连续两次检测阳性者，判为阳性。
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人工合成多肽P12体外杀菌作用的研究
目的 对人工设计并合成的P12多肽进行体外杀菌活性的研究.方法 从NCBI网站中找到具有代表性的抗菌多肽作为合成P12多肽的模板,利用琼脂铺板法将不同浓度的P12与6种细菌作用后,计算P12对6种细菌杀菌率.结果 P12对革兰阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、炭疽杆菌)具有较强杀菌活性,其LD99在20～400 μg/ml.对革兰阴性菌(大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌)杀菌活性较弱,其LD99约为1 200 μg/ml.结论 人工设计合成的P12对革兰阳性细菌具有较强的杀菌活性,对革兰氏阴性细菌也具有杀菌活性.
