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采用基因芯片检出一例丙型肝炎病毒3b基因亚型的报告
研究表明,感染HCV的严重性与所感染的HCV基因型有一定的关系,并且不同的HCV基因型对干扰素治疗有不同的影响.HCV的基因分型目前缺乏统一的分类和命名方法.Chan等对5′NCR进行基因树分析,将HCV分为1、2、3三个主要的基因型[1],随后通过对C、NS3、NS5区段的分析指出,每种基因型均由两到三种基因亚型组成,并将其命名为1a、1b、2a等[2,3].Simmonds等[4]分离出HCV的基因型4,并发展了Chan的命名方法[5].同时Houghton等[6]将1a和1b分别命名为基因型Ⅰ和Ⅱ;Enomoto等[7]将2a和2b命名为基因型Ⅲ; Cha等[8]将3命名为基因型Ⅳ,并将以前在南非发现的一组HCV命名为基因型V.Okamoto等[9]和Mori等[10]将基因型2分为基因型Ⅲ和Ⅳ,基因型3分为基因型Ⅴ和Ⅵ.为了避免混淆,本文中采用Chan和Simmonds的命名方法.HCV的基因分型方法主要包括基因组或基因组的部分序列测序分析,型特异性引物PCR扩增(type-specific primers PCR)[9],限制性内切酶长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism,RFLP)[4],线性探针法(line probe assay,LiPA)[7,11],以及Livache等[12]和Bidan等[13]采用的吡咯阵列传感器芯片的HCV基因分型方法.
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丙型肝炎的病理生理学及抗病毒治疗
丙型肝炎病毒(HCV)属于黄病毒(Flaviviridae)家族中的嗜肝病毒(Hepcivirus).它是一种直径为55~65 nm的单股正链RNA病毒.HCV完整基因组或部分序列的系统发育分析证实,HCV主要存在6种基因型和50多种亚型.不同基因型的核苷酸序列异源性为33%~34%,氨基酸序列异源性约30%,而基因亚型不同区域的核苷酸序列异源性为20% ~ 23%.人类是HCV惟一的宿主,全球大约1.7亿即3%的人口受HCV感染.HCV从世界的一个区域向另一个区域传染流行.HCV主要经血液传输(医药和手术传输过程、静脉内注射毒品以及输血过程).在发达国家,由于高危途径如输血传播和医院感染已得到了有效的控制,60%~70%的新感染病例与静脉内注射毒品相关[1].
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螺杆菌感染与肝癌关系的研究
目的:已有研究发现几种螺杆菌与某些动物肝脏疾病相关,本研究目的旨在探讨螺杆菌感染是否与人类肝癌的发生相关.方法:选取经病理诊断的肝癌患者15例作为研究对象,非肝癌患者13例作对照.用聚合酶链反应(PCR)扩增肝组织螺杆菌16S rRNA来检测螺杆菌,扩增产物用Southem杂交证实,并进行测序及同源比较.结果:60%(9/15)肝癌患者肝组织中发现螺杆菌存在,而非肝癌组无1例阳性(P<0.01);所有PCR阳性产物用Southern杂交得到证实;4例测序及同源比较显示,肝癌组织中的螺杆菌与幽门螺杆菌有99%的同源性.结论:肝癌患者肝组织存在螺杆菌感染,他与肝癌的发生可能存在某种联系.其是肝癌的致病因素抑或伴发感染,需进一步的研究确定.由于是扩增16SrRNA的部分序列,故目前仍不能明确是哪一种螺杆菌.
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1050名献血员的庚型肝炎病毒感染状况调查
庚型肝炎病毒(GBV-C/HGV)是近年来新发现的一种新型肝炎病毒,其基因组为单股正链的RNA病毒,主要经血传播,可致急、慢性肝炎和无症状病毒携带状态[1]。GBV-C/HGV感染呈全球分布,我国GBV-C/HGV感染分布较广,流行较为严重[2]。为了解合肥地区献血员中GBV-C/HGV感染情况,我们对合肥市某医院输血科献血员进行调查。1 材料与方法1.1 血清来源合肥市某医院输血科1998年3月~7月的所有献血员,共1110名,取血清1050份;所有血清检测抗-GBV-C/HGV后,剩余部分-40℃冻存备检GBV-C/HGVRNA。1.2 抗-GBV-C/HGV检测包被抗原为人工合成多肽,分别选自非结构区NS3、NS5,进行混合包被,部分序列参见文献[3],EIA法检查血清中抗-GBV-C/HGV。1:20倍稀释血清,临界值=阴性对照平均OD值+0.25,≥临界值为阳性,否则为阴性,连续两次检测阳性者,判为阳性。
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SARS冠状病毒S蛋白部分序列2的克隆与表达
构建SARS冠状病毒棘突蛋白部分序列2(S2)的原核表达质粒,分析其在大肠杆菌中的表达状况.采用逆转录聚合酶链式反应技术从SARS冠状病毒基因组中扩增出编码S蛋白的第2170到2814位碱基的基因片段,克隆至pMD18-T载体,PCR筛选阳性克隆并测序.用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2,转化大肠杆菌JM109,PCR和双酶切鉴定转化菌落.将阳性菌落经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达.RT-PCR扩增出S2特异片段,经测序与GenBank比对存在1处碱基突变.S2基因片段亚克隆至表达载体pGEX-4T-2构建成重组表达质粒,并在JM109中表达了S2融合蛋白.成功构建了SARS冠状病毒S2的重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达了S2融合蛋白.
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SARS冠状病毒S蛋白部分序列1的纯化及免疫活性分析
表达和纯化SARS冠状病毒S蛋白部分序列1(S1),分析其诱导的免疫应答.大量诱导表达SARS冠状病毒S1蛋白,亲和层析予以纯化;用纯化蛋白免疫小鼠,分析S1蛋白诱导的免疫应答.亲和层析纯化获得能被SARS病人混合血清识别的S1蛋白,融合蛋白免疫小鼠三次后诱导产生了高滴度的抗体和Th1/Th2型的免疫应答.纯化的S1蛋白有良好的免疫学活性.