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SCN5A-△KPQ变异的长QT综合征的细胞电生理
目的:探讨长QT综合征3型(LQT3)的致病基因SCN5A及其相关的变异产生室性心律失常的细胞电生理机制.方法:从野生型小鼠和SCN5A+/△的小鼠心脏中分离心室肌细胞,采用电流嵌和全细胞膜片钳技术分析了携带SCN5A-△KPQ 变异的小鼠心肌细胞的电生理学表型.结果:与野生型细胞[(55.0±6.6)ms, n=7]相比, SCN5A+/△心肌细胞[(152±17.8)ms, n=6]动作电位明显延长(P<0.01);在 SCN5A+/△心肌细胞中观察到早期后除极,而野生型心肌细胞中则未出现; 全细胞记录表明SCN5A+/△心肌细胞有晚期持续钠电流,而在野生型细胞中未见.结论:晚期持续钠电流可能是与SCN5A-△KPQ突变相关的室性心律失常的主要机制.
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钠通道相关遗传性心律失常的SCN5A基因筛查
目的 研究编码钠通道的基因SCN5A基因变异在国人遗传性心律失常患者中的分布特征.方法 基于临床症状及心电图表现诊断为3型长QT综合征(LQTS)患者7例、房室传导阻滞(AVB)7例、病窦综合征(SSS)2例以及早期复极综合征(ERS)1例,共17例患者为研究对象,利用聚合酶链式反应和直接测序法对所有患者的DNA样本进行SCN5A基因筛查,对结果阳性者再进行家系中其他成员的筛查.结果 17例患者中,在1例LQT3表型的患者身上发现一个SCN5A基因突变c.4418 T＞C(p.Phe1473Ser),该突变位于SCN5A的第25个外显子上,父母血液标本DNA未见相应突变；在另外3例LQTS患者身上发现4个单核苷酸多肽性(SNPs),分别为c.1141-3C＞A、c.1339-24G＞A、c.1673A＞G(p.His 558 Arg)、c.3269 C＞T(p.Pro 1090Leu).在3例AVB表型患者身上发现3个SNPs,分别为c.1339-24G＞A、c.1673A＞G(p.His 558 Arg)、c.3578G＞A(p.Arg1193 Gln).在1例SSS患者身上发现一个SNP c.3269 C＞T(p.Pro 1090Leu).在1例ERS患者身上未发现任何变异.结论 在17例钠通道相关遗传性心律失常患者中发现了SCN5A基因上一个新发突变以及5个SNPs；该突变所在氨基酸位点Phe1473极有可能是一个容易发生新发突变的热点位置.
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遗传性长QT综合征SCN5A基因del D1790新突变
目的 研究中国人遗传性长QT综合征3型(LQT3)相关基因SCN5A突变情况.方法 以KCNQ1和KCNH2基因筛查无突变,心电图表现符合LQT3 的3例LQTS患者为研究对象,聚合酶链反应和双脱氧末端终止测序法对所有患者进行SCN5A基因扫描,对阳性结果者进行家系中其他成员的筛查.结果 在1个LQTS家系发现SCN5A基因突变.该家系先证者及其母亲SCN5A基因第28外显子上存在一个杂合突变,即在5368-5370位存在3碱基(GAC)缺失,导致1790位密码子天冬氨酸(Asp)缺失(del D1790).结论 在1个中国LQTS家系发现了一个LQT3相关的SCN5A基因新突变(del D1790).
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表达心脏SCN5A基因的人胚肾细胞钠电流特性及其对钠通道阻滞剂的反应性
目的 利用人胚肾293细胞表达心脏钠通道SCN5A基因并研究其钠电流特性和对钠通道阻滞剂的反应性.方法 野生型SCN5A基因和SCN1B基因共表达于人胚肾293细胞,应用全细胞膜片钳技术记录给药(氟卡尼与利多卡因)前后的钠电流.结果 SCN5A基因转染效率约为60%;测试电压为-40 mV时记录到钠电流峰值大小约为-8 nA;100 μmol/L的氟卡尼轻度抑制钠电流,使钠电流峰值减少(21.1±4.6)%[(-435.8±30.5) pA/pF vs.(-343.9±27.1) pA/pF,P＜0.01];氟卡尼使钠通道激活曲线和失活曲线均呈负向移动,改变的幅值分别是-6.08 mV[(-51.88±1.20) mV vs.(-57.96±0.79) mV,P＜0.05]和-9.08 mV[(-94.12±0.13) mV vs.(-103.20±0.11) mV,P＜0.05];1 Hz和10 Hz频率刺激时,氟卡尼使钠电流分别减少(64.5±10.7)%和(83.5±12.2)%(P＜0.01);30 μmol/L利多卡因使钠通道失活后快恢复时间常数和慢恢复时间常数分别延长2倍和3倍.结论 表达心脏钠通道SCN5A基因的人胚肾293细胞模型可用于基因特异性的钠通道阻滞剂安全性与药效学筛查.
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先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A定点突变及蛋白表达研究
目的 构建先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达.方法 采用一步法构建SCN5 A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体PEGFP-delQKP-hH1,用脂质体转染法将野生型和突变型质粒分别转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜观察钠通道蛋白在HEK293细胞的表达与定位,Western blot检测其蛋白表达.结果 经电泳及DNA测序显示突变型1507-1509位点成功缺失9个碱基,野生型与突变型均在HEK293细胞膜上表达,且表达量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建钠通道基因SCN5 A-delQKP 1507-1509突变型真核表达载体,并在HEK293细胞中表达,为进一步研究其功能奠定基础.
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青壮年猝死综合征家系及散发病例SCN5A基因突变的检测
目的 研究中国人青壮年猝死综合征(SUNDS)病例是否存在SCN5A基因突变.方法 应用直接测序技术对74例散发病例及两个家系病例的4个成员的血纱样本进行SCN5A基因突变的检测.结果 在散发病例发现突变位点R1512W、A1121A,其中A1121A为新发现的突变.结论 中国人SUNDS病例存在SCN5A基因突变,后者可能与部分SUNDS的发生相关.
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中国南方汉族人群SCN5A基因H558R、R1193Q、C5457T及3666+69G＞C多态性与青壮年猝死综合征的相关性研究
目的 研究中国南方汉族人群心脏钠离子通道α亚单位(SCN5A)基因的H558R、R1193Q、C5457T及3666+69G＞C单核苷酸多态性(SNPs)与青壮年猝死综合征(SUNDS)的关系.方法 应用多聚酶链反应(PCR)直接测序技术,检测SUNDS猝死者(SUNDS组)及中国南方汉族健康男性(健康对照组)SCN5A基因Exon12、Exon14、Exon18、Exon20、Exon26和Exon28的一部分.采用病例对照分析H558R、R1193Q、C5457T、3666+69G＞C与SUNDS的相关性,比较H558R基因型、少见等位基因频率分布在不同性别是否存在差异.结果 SUNDS组和健康对照组共检测到13个多态位点,3666+69G＞C、4437+361T＞C为本研究新发现的多态位点,其中SUNDS组和健康对照组D1819D、3666+69G＞C差异具有统计学意义(P均＜0.01).不同性别组中,H558R少见等位基因频率分布差异没有统计学意义.结论 SCN5A基因多态位点D1819D、3666+69G＞C可能是男性人群罹患SUNDS的易感因子,未发现多态位点H558R、R1193Q与SUNDS直接相关.
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Brugada综合征SCN5A基因G1712C突变的功能分析
目的 探讨Brugada综合征SCN5A基因G1712C新突变的电生理机制.方法 采用体外定点诱变法构建携带有基因突变G1712C的pRc/CMV-hH1的表达载体,lipo3000脂质转染法建立稳定表达pGFP-IRES-hβ1质粒的HEK293细胞系,并用G418进行筛选鉴定.分别做野生型的pRe/CMV-hHl (hHl)和携带有基因突变G1712C的pRc/CMV-hHl (mhHl)瞬时转染表达.进行全细胞膜片钳实验记录钠通道电流.实验结果由PatchMaster以及IGOR Pro 6.0软件分析.结果 G1712C位于Na+通道蛋白α亚单位的DⅣ区S5与S6之间的P-loop上.在瞬时转染野生型的hH1的细胞系中,指令电位从-60 mV逐渐上升时,钠电流也渐变大,在-20 mV时完全激活;激活电压在-60 mV到-50 mV,反转电位在50 mV左右.在瞬时转染突变型G1712C的细胞系中,没有发现钠电流.结论 野生型hH1所表达的钠通道蛋白与正常心肌细胞钠通道电生理特性相似.SCN5A基因G1712C突变导致Nav1.5通道失去功能,可能是该家系Brugada综合征的病因.
关键词： Brugada综合征 SCN5A基因 G1712C 钠电流 -
青壮年不明原因夜间睡眠中猝死SCN5A基因型研究
[目的]研究中国汉族人群青壮年不明原因夜间睡眠中猝死(SMDS)病例的SCN5A基因型特征.[方法]选取120例中国汉族人群散发SMDS病例,提取其基因组DNA,对PCR产物(包含编码区及外显子-内含子拼接区)进行直接测序.鉴定基因内的遗传变异,以相同人群健康组作对照.[结果]120例SMDS散发病例中共发现SCN5A的11个突变位点,其中,Y1434Y、L1566L为编码区同义突变,V95I、R121Q、R367H、R1512W为已报道的错义突变,R513H、D870H、V1202M、V1764D、S1937F为本研究新发现的错义突变.[结论]首次较全面地获得了中国人SMDS病例SCN5A基因型特征,丰富了SMDS的分子病理学数据库,同时,为进一步探索心脏钠离子通道功能异常与SMDS发病机制的相关性提供了新的信息.
关键词： 青壮年不明原因夜间睡眠中猝死 SCN5A基因 突变 -
Brugada综合征遗传学若干进展
Brugada综合征为一遗传性致心律失常性疾病，心电图显示右心室导联ST段抬高2 mV与T波倒置，而心脏结构正常，易罹心室颤动和心脏性猝死。 Brugada综合征为常染色体显性遗传伴发不完全性外显，SCN5A基因突变已被确认为Brugada综合征主要致病原因，占接近30％患者；其他16个基因突变也连结到Brugada综合征只占5％，剩下65％Brugada综合征患者无肯定遗传学背景。现综述Brugada综合征遗传学若干进展。
关键词： Brugada综合征 遗传学 SCN5A基因 基因突变 -
扩张型心肌病的离子通道发病机制研究进展
扩张型心肌病是一侧或双侧心腔扩大、心肌收缩功能障碍为主要特征的心肌疾病.其发病机制可能与病毒感染、免疫反应以及遗传因素有关.近年来研究发现心脏钠通道基因突变可导致扩张型心肌病.因此,现重点从心肌细胞离子通道的角度来论述扩张型心肌病的发病机制,探讨其治疗的新靶点.
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Brugada综合征患者SCN5A基因突变检测
目的 对体检中发现的两例无症状的Brugada综合征患者进行SCN5A基因突变检测.方法 收集两个家系所有成员的外周血样标本,提取基因组DNA后应用聚合酶链式反应(PCR)扩增心脏电压门控钠通道蛋白α亚单位基因SCN5A的所有编码区序列,并直接进行DNA序列测定,若有碱基变异,则与200个正常样本进行对照,并分析相应的氨基酸改变.结果 在一个患者的一条染色单体上发现SCN5A基因碱基变异:即第1712位密码子的第1个碱基的G→T改变,导致相应编码的甘氨酸(G)被半胱氨酸(C)所取代,而这一基因变异在200个正常人的对照中均未发现.家系调查发现患者的一个妹妹也具有相同的基因变异,但心电图无明显异常.结论 在一个体检发现的Brugada综合征患者的SCN5A基因上发现一个未报道过的碱基变异,该碱基变异可能是新的基因突变位点.
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SCN5A基因变异H558R携带者轻度心脏挫伤后死亡1例
1 案 例1.1 简要案情一非洲籍黑人男子,31岁,某日因纠纷与他人发生打斗,有拳、脚接触胸背部外伤,被送至某派出所.在派出所等待调查期间,该男子突然昏迷,经医护现场抢救无效死亡,受伤至死亡约6h.死后24d尸体检验.1.2 尸体检验尸表检查:发育良好,体格健壮,尸长177 cm,双手指甲床高度发绀.左前臂、右前臂、右腕部、右手背擦伤,右侧颧部、右小腿胫前区小片状擦挫伤.
