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Leptin mRNA表达的组织分布及在大鼠急性肠道损伤中的变化
目的:探讨leptin在急性炎症反应中的作用.方法:采集正常大鼠下丘脑、肺、肝、脾、胃、十二指肠、肾、附睾脂肪垫、睾丸等重要脏器标本,以RT-PCR法检测leptin mRNA表达的组织分布:并建立大鼠盲肠结扎穿孔模型,设立假手术组(A)和脂肪乳组(B)、单纯损伤组(C)、雌二醇组(D)、胰岛素组(E)等实验组,采用RT-PCR检测脂肪、肝及肺内leptin mRNA表达的变化.结果:正常大鼠的上述9种重要脏器内均有leptin mRNA表达,肾脏内含量高而睾丸内含量低.大鼠盲肠结扎穿孔12 h后,与A组leptin mRNA表达水平相比,其在B组脂肪内表达显著增高而在肝、肺内表达显著降低,在c组肝内表达无显著差异而在脂肪、肺内表达显著降低,在D组肺内表达显著增高而在脂肪、肝内表达显著降低,在E组肺内表达无显著差异而在脂肪、肝内表达显著降低.脂肪乳对leptin mRNA表达的影响具有中枢分泌组织(脂肪)内诱导而外周脏器内抑制的双向模式.结论:Leptin mRNA表达水平在干预急性肠道损伤后能量代谢和神经-内分泌功能时发生敏感变化,提示leptin可能作为一种核心保护因子促进内环境的稳定.
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重症急性呼吸综合征病例尸解肺组织中新型冠状病毒部分聚合酶基因的序列测定
目的:从患者尸解肺组织中直接扩增冠状病毒部分聚合酶基因序列,为重症急性呼吸综合征(非典型肺炎)的病原确认提供依据.方法: 采用RT-PCR方法,从非典型肺炎病例标本中进行冠状病毒聚合酶基因的扩增与序列测定.采用Clustal X1.8软件进行系统发生树分析.结果与结论 :从非典型肺炎病例尸解肺组织、传代发病小鼠肺组织及分离物感染的细胞培养物中,可分别扩增出冠状病毒的DNA片段.测序结果显示其核苷酸序列与目前已知冠状病毒的同源性在6 0%左右,而与加拿大和美国近报道的新型冠状病毒的序列是一致的.
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X射线照射诱导鼻咽癌细胞mdrl和p53基因的表达及临床意义
目的:探讨X射线照射后鼻咽癌CNE-1细胞产生多药耐药的机制.方法:采用RT-PCR和Western blot方法,检测X射线照射后CNE-1细胞mdr 1和p53基因的表达.结果:照射后细胞mdrl mRNA和P-gp表达均增强,p53蛋白的表达也增强,并与P-gp表达呈正相关性(P＜0.05).结论:X射线照射可诱导CNE-1细胞mdr1和p53基因的表达,两者的相互协调作用可能是照射后肿瘤细胞产生多药耐药的重要机制之一.
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氯菊酯诱导脑源性神经生长因子的表达
目的为了进一步阐明氯菊酯(PM)的神经毒作用机制.方法用逆转录-PCR(RT-PCR)、斑点杂交、流式细胞仪及免疫组织化学技术检测了氯菊酯对大鼠脑组织中脑源性神经生长因子(BDNF)表达的影响.结果大鼠一次大剂量[PM1,400?mg/(kg*d),ip]或反复小剂量[PM2,200?mg/(kg*d),ip]给予氯菊酯后,明显诱导其大脑皮层和海马的BDNF mRNA水平:RT-PCR表明PM1和PM2组大鼠皮层和海马BDNF mRNA诱导率分别为67%,81%和53%和54%.斑点杂交亦显示,PM1和PM2组皮层和海马BDNF的水平分别高出对照组57%,78%和36%,50%,且均表现为对皮层的诱导强于海马.而BDNF蛋白表达结果表明,氯菊酯对蛋白水平的影响与BDNF mRNA并不一致:流式细胞分析表明PM1和PM2组大鼠皮层BDNF的蛋白表达均明显升高,尤其是PM2组,其BONF蛋白水平是对照组的237%,然而海马BDNF蛋白量无明显改变;免疫组化结果与流式细胞分析基本一致,仅PM1组海马CA1区蛋白表达较对照组高21%.结论氯菊酯诱导大脑皮层和海马BDNF的表达可能在其神经损伤修复中有重要意义.
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X射线照射对鼻咽癌细胞mdrl基因表达的影响及意义
目的探讨X射线照射后鼻咽癌CNE-1细胞产生多药耐药的机制.方法采用MTr法检测X射线照射后CNE-1细胞对顺铂(cD-DP)的耐药性;采用逆转录-PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)方法,检测照射后CNE-1细胞mdrl基因的表达.结果随照射后时间的延长,cDDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)值逐渐增大,第2～4周IC50值显著高于照射前(P＜0.01).照射后细胞mdrlmRNA和P-gp的表达较照射前均显著增强(P＜0.01).结论X射线照射可诱导CNE-1细胞mdd基因的表达,这可能是照射后肿瘤细胞产生多药耐药的重要机制之一.
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登革病毒NS3全基因的扩增与克隆
登革热(DF)、登革出血热及登革休克综合征(DHF/DSS)是由登革病毒所致的两种不同临床类型的急性传染病,广泛流行于全球热带及亚热带地区.DHF/DSS以高热、出血、休克、高病死率为主要特征,近年来其发病率有迅速增加的趋势,已成为严重影响人类健康的公共卫生问题.
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MyD88基因真核表达载体的构建及表达
目的:构建人髓样分化因子88(MyD88)基因编码区序列(cDNA)的真核表达载体,观察其在GES-1细胞中的表达. 方法:从健康人外周血单个核细胞中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增MyD88基因cDNA全长序列,经NheI和KpnI酶切位点,插入到pcDNA3.1/myc-His(-)A质粒中,构建成MyD88基因的真核表达载体;用脂质体Lipo-fectamine2000将其转染人人胃黏膜细胞株GES-1细胞中,Western Blot检测其在GES-1细胞中的表达. 结果:重组载体经酶切鉴定和测序证实目的基因正确无误;Western Blot结果显示MyD88基因在GES-1细胞具有良好的表达. 结论:成功构建了pcDNA3.1/mye-His(-)A-MyD88真核表达载体,并在GES-1细胞中进行了表达,为进一步研究MyD88的结构和功能奠定了基础.
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RT-PCR分析肉芽组织生长过程中VEGF及β3整合素mRNA的表达
目的 观察血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）及β3整合素mRNA在肉芽组织血管 生成中表达的动态变化. 方法 采用RT-PCR法定量分析人正常皮下组织 、 增殖期肉芽组织（伤后7～12 d）及成熟期肉芽组织（伤后30～35 d）VEGF及β3整合素mRNA的 水平. 结果 在正常皮下组织中，VEGF及β3整合素mRNA呈低表达，而在 增 殖期肉芽组织中表达升高，待肉芽组织完全成熟后二者的表达又有所降低. 结论 VEGF及β3整合素mRNA的水平与肉芽组织的血管生长过程呈动态相关，提示两种蛋 白质可能在肉芽组织血管生成中发挥调节作用.
