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β1整合素反义胱氧寡核苷酸抑制精氨酸加压素诱导下心脏成纤维细胞的DNA合成
β1整合素介导细胞外基质(extracellular matrix,ECM)与细胞骨架相连,引发一系列信号转导通路,影响心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CF)的生长、分化、黏附和迁移等生物学功能,在心脏间质重构形成中具有重要的桥梁作用[1].设法抑制或降低CF表面β1整合素表达可能会控制增殖和神经体液因素刺激的心肌纤维化,故本研究运用硫代修饰的β1整合素反义胱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)导人体外培养的CF,观察它对CF及精氨加压素(ar-gipressin,arginine vasopressin,AVP)刺激下的CF DNA的影响.
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反义寡核苷酸对精氨酸升压素诱导心脏成纤维细胞β1整合素表达的抑制作用
目的探讨反义寡核苷酸对精氨酸升压素(AVP)诱导心脏成纤维细胞(CFs)β1整合素表达及细胞增殖的影响,为防治AVP诱导的心肌纤维化提供理论依据.方法设计合成反义、正义及错配β1整合素寡核苷酸片段,转入体外培养的CFs中,采用原位ELISA技术检测不同状态下β1整合素表达水平,应用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖.结果 (1)随着AVP浓度的增加,CFs表面β1整合素表达水平呈上升趋势,各实验组之间吸光度比较差异有显著意义(F=4.93;P<0.01).其中1×10-7mol/L AVP和1×10-6mol/L AVP组的CFsβ1整合素表达水平分别为(0.25±0.01) A值和(0.30±0.04) A值,均明显高于对照组的(0.21±0.02) A值,差异有非常显著意义(P<0.01);(2)反义链+AVP组的CFsβ1整合素表达水平为(0.19±0.02) A值,反义链与AVP共同作用组明显低于AVP组的(0.25±0.01) A值,并有非常显著性差异(P<0.01).正义链+AVP组和错配链+AVP组的CFsβ1整合素表达水平分别为(0.25±0.01)和(0.25±0.02)A值,均明显高于反义链与AVP共同作用组(P<0.01).(3) 空白对照组、AVP组、反义链+AVP组、正义链+AVP组和错配链+AVP组CFs MTT法分别为(0.36±0.01) OD值、(0.38±0.02) OD值、(0.35±0.03) OD值、(0.38±0.02) OD值和(0.38±0.01) OD值.其中反义链+AVP组细胞数目明显低于AVP组、正义链+AVP组和错配链+AVP组,并且均具有统计学意义(P<0.05),与空白对照组比较无显著差异 (P>0.05).结论反义寡核苷酸具有抑制AVP促CFs表面β1整合素表达及细胞增殖的作用,而正义及错配寡核苷酸均无此效应,这为防治高血压心脏间质重塑构提供理论依据.
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αvβ6整合素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响
目的探讨αvβ6整合素介导的细胞与细胞外基质的黏附,及其对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响.方法采用流式细胞仪测定卵巢癌细胞株SKOV3、AO、3AO细胞表面αvβ6整合素的表达,并利用酶联免疫吸附实验、吖啶橙-溴化乙锭双荧光染色法分析顺铂诱导的细胞凋亡及αvβ6整合素对细胞凋亡的影响.结果 SKOV3、AO、3AO细胞均表达αvβ6整合素,其相对荧光指数(FI)均为1.03±0.01.顺铂可以诱导SKOV3、AO、3AO细胞凋亡,经顺铂(10 μg/ml)作用48 h后,酶联免疫吸附实验结果显示,生长于αvβ6整合素配体--纤维粘连蛋白(FN)上的细胞的富集系数(EF)分别为2.11±0.04、2.15±0.06、2.11±0.04,明显低于生长于非整合素配体--多聚赖氨酸(polylisin)上的细胞(分别为3.51±0.03、3.55±0.04、3.66±0.04, P<0.01);吖啶橙-溴化乙锭双荧光染色法结果显示,生长于FN上的细胞凋亡率分别为(5.0±0.7)%、(5.0±0.7)%、(6.0±0.7)%,明显低于生长于polylisin上的细胞凋亡率[分别为(28.0±0.7)%、(28.0±0.7)%、(29.0±0.7)%,P<0.001],用αvβ6整合素的特异性阻断抗体封闭过的细胞再次生长于FN上时,细胞凋亡率[分别为(15.0±0.7)%、(16.0±0.7)%、(15.0±0.7)%]又明显提高(P<0.01).结论卵巢癌细胞株SKOV3、AO、3AO细胞出现与恶性表型相关的αvβ6整合素的表达,αvβ6整合素介导的细胞与FN的黏附对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有抑制作用,提示细胞黏附可能通过抑制细胞凋亡而促使细胞产生耐药性.
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自然及促排卵周期子宫内膜整合素α4β1的表达
目的了解氯米芬(CC)、绝经期促性腺激素(hMG)对黄体中期子宫内膜整合素α4β1表达的影响。方法应用单克隆抗体，采用免疫组织化学技术检测48例正常妇女自然周期以及48例正常妇女、30例多囊卵巢综合征患者应用CC/绒毛膜促性腺激素(hCG)及CC/hMG/hCG方案促排卵治疗后黄体中期子宫内膜整合素α4β1的表达。结果子宫内膜整合素α4β1在正常妇女自然周期着床窗口期呈现强阳性表达，而CC、hMG抑制整合素α4β1的表达，两者比较，差异有极显著性（P<0.01）；妊娠者较未妊娠者整合素α4β1表达强度高。结论促排卵周期黄体中期整合素α4β1表达下降或缺失，子宫内膜容受性下降，妊娠率降低。
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整合素与肿瘤侵袭及转移的关系
肿瘤细胞与细胞外基质间的相互作用影响肿瘤的发生、增殖、存活和转移到其他组织的能力.许多是由分布广泛的整合素介导的.整合素是细胞黏附、细胞迁移、细胞周期和程序化死亡(凋亡)所必须的,它和其他信号途径一起调节肿瘤的发生、侵袭及转移.就整合素的结构、功能及其与肿瘤临床资料的关系予以综述.
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硫酸右旋糖苷降低人胃癌MKN1细胞的黏附及整合素β1的表达
目的:探讨硫酸右旋糖苷(DS)对人胃癌MKN1细胞株的黏附抑制的机制.方法:用荧光免疫细胞染色法和共聚焦显微镜观察固定细胞和活细胞在培养盘上的附着过程及形态变化.用Western blotting法对整合素β1蛋白的表达进行分析.结果:MKN1细胞通过变形,形成伪足黏附到培养盘,并与其他细胞接触形成单细胞层.免疫染色可见整合素β1在细胞膜上有强表达,并且形成整合素集落.DS抑制了MKN1细胞的黏附,培养48 h后仍有部分细胞处于游离状态.DS抑制整合素β1的表达并减少已经形成的整合素集落区域.使用DS后,黏附细胞整合素β1蛋白的表达分别减少到非治疗细胞的64%(130 ku)和57%(110 ku),游离细胞整合素β1蛋白的表达分别减少到非治疗细胞的51%(130 ku)和15%(110 ku).MKN1细胞同时还表现出维持圆形形状的倾向.结论:DS阻止人胃癌细胞株MKN1的黏附过程与抑制整合素β1的表达有关.
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E-钙粘素、β1整合素与胃癌腹膜种植转移
胃癌的转移复发是其发生和演进过程中危险阶段.随着人们对胃癌转移规律的深入了解,并由此开展胃癌扩大性淋巴结清扫术、联合脏器切除术以来,术后淋巴结转移性复发和局部复发率有了较大程度的降低.但与此同时,胃癌术后因腹膜遭癌细胞种植而复发的严重性却日渐突出,并成为治疗中大障碍之一.文献报道在胃癌术后复发的诸类型中,腹膜种植性复发约占 50 % 之多,且系多数复发患者致死的直接因素[1].
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基质蛋白与整合素参与人骨髓间充质干细胞体外内皮的分化
目的:探讨基质蛋白与整合素在人骨髓间充质干细胞体外内皮分化过程中的作用,进一步明确其分化机制.方法:实验于2001-10/2003-03在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成.采用不同基质蛋白纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原,在诱导因子血管内皮细胞生长因子作用下对人骨髓间充质干细胞进行内皮诱导分化.通过免疫细胞化学和流式细胞分析检测分化标志和β1整合素.结果:纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原组细胞诱导后可引起内皮分化早期标志KDR和CD34增强,纤维连接蛋白效应较为明显;两种基质蛋白也引起分化细胞β1整合素表达增强.结论:细胞外基质-整合素受体和血管内皮生长因子相互作用调控人骨髓间充质干细胞分化;人骨髓间充质干细胞诱导后具备内皮分化趋势;β1整合素的改变参与人骨髓间充质干细胞的内皮分化.该研究为寻找组织修复再生、心肌梗死和缺血性疾病治疗,以及血管组织工程的新型种子细胞提供了新的思路和方法.
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小肠上皮细胞轮状病毒受体的研究进展
轮状病毒进入宿主细胞是一个复杂的过程,包括病毒表面蛋白的不同区域同细胞表面不同的分子发生相互作用,而这些分子作为吸附和进入的受体,包括N-乙酰神经氨酸、整合素和热休克蛋白等.细胞膜脂质层可能在病毒进入细胞过程中起着重要作用,为病毒颗粒与细胞受体发生相互作用提供了一个平台.
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硬皮病皮损成纤维细胞整合素表达的免疫电镜观察
目的:研究硬皮病皮损成纤维细胞整合素表达及细胞超微结构特征.方法:将培养的硬皮病皮损成纤维细胞置包被纤维粘连蛋白的培养瓶中作粘附培养,运用间接免疫胶体金技术在电镜下观察成纤维细胞表面整合素α5,β1亚基表达、分布特征及细胞超微结构变化.结果:硬皮病皮损成纤维细胞整合素α5,β1亚基表达均较正常成纤维细胞显著增加(P<0.01),并呈簇集分布的特征;细胞内骨架成分微丝密集成束.结论:整合素α5,β1介导的纤维粘连蛋白与成纤维细胞相互作用在硬皮病时增强.
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荷瘤裸鼠整合素αv β3受体显像的实验研究
目的探讨99Tcm标记精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)小分子多肽(GY11)作为肿瘤显像剂的可能性.方法利用SnCl2直接还原法进行GY11的99Tcm标记.建立荷人黑色素瘤A375、肺癌H460和宫颈癌HeLa BALB/c裸鼠肿瘤模型,分别进行体内分布和肿瘤显像研究.结果GY11的99Tcm标记率为80%.黑色素瘤A375荷瘤裸鼠体内分布显示,99Tcm-GY11主要经肾脏快速从血液中清除,注射后2 h肿瘤摄取量为3.13%ID/g,肿瘤/血和肿瘤/骨骼肌比值随时间的推移而增加,注射后1和6 h比值分别为3.0、4.3和8.1、15.1.对于黑色素瘤A375和肺癌H460荷瘤裸鼠,99Tcm-GY11静脉注射后2 h肿瘤均能清楚显示,24 h后显像更清晰;2 h后宫颈癌HeLa肿瘤能显影,但6 h后肿瘤放射性基本清除.结论99Tcm-GY11有望成为肿瘤αvβ3受体显像剂.
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整合素和胰腺癌侵袭转移
肿瘤侵袭转移是一个多因素共同作用的多阶段连续过程,其中肿瘤细胞与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的黏附是发生侵袭转移的首要步骤[1].近年来研究表明,整合素(integrins)黏附分子作为ECM的受体,通过介导细胞与细胞、细胞与ECM间的识别和结合,在肿瘤侵袭转移过程中起着极其重要的作用.
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乳腺癌组织中β1 integrin与MMP-2表达的临床病理意义
目的:探讨β1 integrin与MMP-2在乳腺癌组织中表达的临床病理意义及相互联系.方法:采用S-P法对乳腺癌组织进行β1 integrin和MMP-2单克隆抗体的免疫组化染色.结果:本组乳腺癌β1 integrin和MMP-2表达率分别为84.0%(80/94例)和94.8%(92/97例).β1 integrin的表达与浸润性导管癌的病理分级有关,Ⅰ、Ⅱ级组其中度以上表达高于Ⅲ级组(χ2=3.92,P<0.05).本组乳腺癌β1 integrin表达与MMP-2的表达之间有明显的相关性,在β1 integrin 2+强度以上表达者中,其MMP-2中强度以上表达率高于1+以下者(χ2=4.70 ,P<0.05).结论:结果显示β1 integrin的表达强度与乳腺癌细胞的粘附性有很大的关系, 并且β1 integrin与MMP之间的活动可能有内在的联系.
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整合素与肿瘤血管生成及抗血管生成作用
肿瘤血管生成不仅与肿瘤的生长和转移密切相关,而且在肿瘤病理分级、治疗和预后判断上具有重要的评估价值.研究表明,细胞粘附分子介导的细胞粘附行为异常在肿瘤的浸润和转移中有重要作用.近年,随着免疫和分子生物学的发展,肿瘤血管生成及抗血管生成逐渐成为肿瘤研究的重点和热点之一,细胞粘附分子与血管生成的关系也日益受到关注[1].现就其中整合素家族在肿瘤血管生成及抗血管生成中的作用作一简要综述.
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β1-整合素与纤维粘连蛋白联合促进卵巢癌细胞侵袭转移
目的:探讨β1-整合素及纤维粘连蛋白对卵巢癌细胞粘附侵袭能力的影响和作用机制.方法:流式细胞仪间接免疫荧光染色检测人卵巢癌SKOV3-S1细胞β1-整合素表达.用人工基底膜粘附实验和体外侵袭实验观察经β1-整合素抗体处理的SKOV3-S1细胞粘附侵袭能力的变化.逆转录PCR检测β1-整合素处理及与纤维粘连蛋白结合后SKOV3-S1细胞基质金属蛋白酶基因表达的变化,同时用酶谱法分析细胞上清MMPs活性变化.结果:SKOV3细胞高侵袭克隆SKOV3-S1均表达β1-整合素,β1-整合素抗体对其粘附及侵袭人工基底膜能力的抑制率分别为69.8%和65.7%.纤维粘连蛋白能诱导癌细胞MMP2基因表达并分泌蛋白酶,β1-整合素抗体能减弱这种诱导作用.结论:β1-整合素与纤粘维连蛋白结合能诱导卵巢癌细胞粘附并表达MMP2基因,分泌蛋白酶降解ECM,从而促进肿瘤侵袭转移.
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子宫内膜异位症中整合素表达的研究
目的:研究整合素a4、a5、β1亚单位及avβ3在子宫内膜异位症中的表达.方法:采用免疫组化法分析子宫内膜异位症27例的在位内膜和异位内膜整合素a4、a5、β1及avβ3的表达,并选择同期正常育龄13例子宫内膜进行对照.结果:整合素a4、a5、β1及avβ3在正常子宫内膜以及内异症患者的在位内膜和异位内膜腺上皮均有不同程度表达,a5在内异症中表达显著低于正常子宫内膜;而avβ3在血管内皮细胞中有极显著性的阳性表达,以增生期异位灶为甚.结论:推测内异症中整合素a5的低表达和血管内皮细胞中avβ3的高表达可能与内异症发病有关.
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整合素CD11b/CD18在喉癌患者淋巴细胞上的表达及临床意义
目的:评价CD11b、CD18在喉癌诊断、病情进展及治疗监测中的作用.方法:采用流式细胞免疫学方法测定正常人31例、喉咽部良性肿瘤9例及喉癌32例的外周血淋巴细胞上CD11b、CD18的含量.结果:喉癌患者外周血淋巴细胞上CD11b、CD18的含量明显低于正常人及咽喉部良性肿瘤患者(P＜0.05).结论:CD11b、CD18在喉癌的演变过程中有抑制肿瘤侵袭转移的作用,测定淋巴细胞上CD11b、CD18的变异表达可作为预测喉癌患者病情及估计预后的辅助指标之一.
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整合素αvβ3单克隆抗体对人胆管癌肿瘤血管生成的抑制作用
目的研究整合素αvβ3单克隆抗体抗人胆管癌血管生成的作用.方法将人胆管癌细胞系QBC939细胞接种于鸡胚尿囊膜(CAM)无血管区,给予整和素αvβ3单克隆抗体,观察其对人胆管癌血管生成及肿瘤生长的影响.结果整合素αvβ3单克隆抗体组血管数目在给予抗体后第2～8天均显著低于磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(P<0.05),光镜下瘤细胞分布稀疏,瘤组织新生血管腔减少.结论整合素αvβ3单克隆抗体能够抑制胆管癌新生血管的生成,具有显著的抗肿瘤作用.
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五味子对急性四氯化碳中毒大鼠肝整合素α1的影响
[目的]检测急性四氯化碳(CCl4)中毒大鼠肝细胞中整合素α1(Integrin α1)的表达,探讨五味子在治疗急性肝损伤时对于Integrin αl表达的影响及意义.[方法]将Wistar大鼠随机分为对照组、中毒组和治疗组.中毒组和治疗组大鼠经腹腔一次性注射20%的CCl4(按0.2 mL/100 g剂量)致毒.治疗组以五味子提取液每天(0.5 mL/100 g)灌胃,中毒组则用生理盐水每天(0.5 mL/100 g)灌胃.不同时间处死大鼠,用RT-PCR和免疫组化方法检测各组大鼠肝组织中Integrin αl的表达.[结果]RT-PCR和免疫组化结果显示,治疗组大鼠肝中Integrin α1 mRNA及蛋白的表达均高于中毒组,两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05).[结论]五味子应用于CCl4中毒大鼠急性肝损伤的治疗,可以促进肝细胞Integrin α1 mRNA及蛋白的表达,提示五味子对大鼠肝脏的保护作用可能与调节Integrin α1的代谢具有相关关系.
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整合素β1与β3在非小细胞性肺癌及其淋巴结中的表达
[目的]了解整合素β1与β3在非小细胞性肺癌(NSCLC)及其淋巴结组织中的表达,分析其与临床病例特征之间的关系.[方法]随机抽取42例术前未接受任何辅助治疗NSCLC及其淋巴结和10例癌旁正常肺组织,采用免疫组织化学SABC(链霉素-生物素-酶复合物)法检测的石蜡切片标本中的整合素β1与β3的表达并进行比较.[结果]①整合素β1与β3在NSCLC组织组中阳性率高于癌旁正常肺组织组;在转移性淋巴结组中阳性率表达高于非转移性淋巴结组.②整合素β1及β3在原发病灶的阳性表达率与NSCLC分化程度、淋巴结转移情况及其病理分级等临床病例因素不同而有显著差异.[结论]整合素β1与β3在NSCLC和转移淋巴结中的表达明显强于癌旁正常肺组织和非转移性淋巴结;整合素β1与β3在NSCLC中的表达与NSCLC的组织分化程度和恶性程度有关,并可能参与了NSCLC的发生,发展及淋巴结转移过程.
