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胰岛素样生长因子Ⅱ与胃癌细胞SGC7901 c-fos和c-jun表达的关系
目的:探讨胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)与胃癌细胞SGC7901 c-fos和c-jun表达的关系.方法:体外细胞培养,分别用MTT法和免疫组织化学以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测不同浓度IGF-Ⅱ(0,10,50,100 mg/L)作用胃癌细胞后细胞的增殖率和C-fos和c-jun蛋白7LmRNA的表达情况.结果:IGF-Ⅱ作用于细胞SGC7901的增殖效应呈浓度和时间依赖性;随着药物浓度的升高,c-fos和c-jun蛋白,mRNA表达均增加.在IGF-Ⅱ10,50,100 mg/L时,c-fos和c-jun蛋白分别为41.32±1.28 mg/L,50.43±0.57 mg/L,64.22±1.76 mg/L;52.00±0.67 mg/L.63.20±0.95mg/L,76.31±1.16 mg/L;c-fos,c-jun mRNA与GAPDH mRNA比值分别为0.316±0.021.0.392±0.0357,0.478±0.028;0.379±0.006,0.412±0.022,0.494±0.048,均与相应对照组(30.00±1.01 mg/L,41.14±2.02 mg/L,0.220±0.037,0.290±0.064)相比有统计学意义(P＜0.05.P＜0.01).结论:胰岛素样生长因子Ⅱ可能通过旁分泌上调c-fos和c-jun的表达而诱导胃癌细胞增殖.
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核因子-κB抑制剂逆转人胃癌细胞对长春新碱耐药性的研究
目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂MG-132逆转胃癌耐药的可能性.方法以胃腺癌细胞株SGC7901及其长春新碱(VCR)耐药株SGC7901/VCR为研究对象,通过凝胶电泳迁移率分析检测NF-κB DNA 结合活性,ELISA法检测细胞内IκB-α蛋白的表达,免疫细胞化学法观测细胞内p65核转位,MTT法检测癌细胞对药物的敏感性.结果 SGC7901/VCR耐药细胞中,NF-κB的基础活性及不同浓度VCR诱导的NF-κB活化程度均比敏感细胞高.NF-κB 抑制剂MG-132(2.5 μmol/L)预处理耐药细胞30 min,可明显抑制VCR 诱导的NF-κB活化、IκB-α降解和p65核转位.VCR对耐药细胞和敏感细胞的半数抑制浓度分别为40.03 mg/L和0.26 mg/L,MG-132可显著提高耐药细胞对VCR的敏感性,耐药倍数由154.0降至16.5,但对敏感细胞影响不大.结论 MG-132可通过抑制NF-κB的活化,在一定程度上逆转胃癌细胞对长春新碱的耐药性,提高化疗效率.
关键词： 核因子-κB 胃癌细胞SGC7901 长春新碱 耐药性 -
API-2抑制胃癌细胞株SGC7901生长及其机制探讨
;不同浓度 API-2 作用24 h 后,p-AKT 蛋白表达均减少.结论 API-2作用Akt信号转导通路的位点,减少p-AKT的表达.Akt信号转导通路与胃癌细胞株SGC7901的发生、发展有关.
关键词： Akt信号转导通路 胃癌细胞SGC7901 AKT -
熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究
目的探讨熊果酸(ursolic acid,UA)体外抑制胃癌细胞SGC7901生长的作用机制.方法体外培养人胃癌细胞株SGC7901,MTT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞生长的影响;不同浓度UA(0～40 μmol/L)处理SGC7901细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western Blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果20～40 μmol/L UA可抑制SGC7901的生长,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的IC50分别为(57.50±1.18)、(34.28±2.05)、(27.54±1.11)、(24.83±1.02)μmol/L.20～40 μmol/L UA作用24 h后,SGC7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时细胞被阻滞于G0/G1期并发生凋亡,随药物浓度升高,凋亡率增加,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减少,Bax无明显变化.结论熊果酸对SGC7901细胞具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与细胞毒作用、增殖抑制作用以及下调凋亡相关蛋白Bcl-2表达而促进凋亡有关.
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c-jun siRNA的构建及其对胃癌细胞株SGC7901中β3GnT8基因表达的影响
目的 构建c-jun干扰载体,有效沉默胃癌SGC7901细胞株中的c-jun基因表达,研究其对胃癌SGC7901细胞株中β3GnT8基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对c-jun基因的靶序列设计合成四条siRNA,将四条siRNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的c-jun siRNA载体质粒pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1949、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1050、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1111、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1276通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染SGC7901细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,通过RT-PCR法检测c-jun和β3GnT8基因mRNA的表达.结果 ①成功构建了四条正确的c-jun siRNA表达质粒;②成功筛选出一条对c-jun有明显抑制作用的siRNA干扰质粒,阻断c-jun表达后,糖基转移酶β3GnT8的表达受到明显抑制.结论 构建的c-jun siRNA表达质粒可以有效抑制胃癌SGC7901细胞株的c-jun基因表达,同时抑制糖基转移酶β3GnT8的表达,为研究胃癌的分子机制提供了一定的理论基础.
关键词： C-Jun siRNA 胃癌细胞SGC7901 β3GnT8 -
N-乙酰氨基半乳糖转移酶2对胃癌细胞SGC7901黏附迁移能力的影响
目的: 探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(Polypeptide:N-acetylgalactosaminytransferases 2,ppGalNAc-T2)对胃癌细胞SGC7901黏附迁移的影响.方法: 将ppGalNAc-T2正义载体(pEGFP-C1-T2)、空载体(pEGFP-C1)及干扰载体(pSilenCircle)转染SGC7901细胞,采用反转录PCR方法检测其在mRNA水平表达,分别通过细胞黏附实验和穿膜实验检测其黏附力和迁移力变化.结果: 转染正义ppGalNAc-T2的SGC7901细胞比转染干扰载体的SGC7901细胞对纤连蛋白、基质胶和透明质酸的黏附能力低,但其侵袭迁移能力没有变化.结论: ppGalNAc-T2低表达可能与肿瘤浸润转移具有相关性.
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内源性逆转录酶在熊果酸抑制人胃癌细胞SGC7901中的表达
目的探讨体外生长的人胃癌细胞中逆转录酶在熊果酸作用下的表达。方法将不同浓度的熊果酸分别与人胃癌SGC7901细胞共同培养24，48，72h后，用中性红染色法测定吸光度(A)，评定熊果酸对胃癌细胞株的增殖抑制作用；流式细胞术测定其对胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响；RT-PCR和Western blot方法测定各组细胞中逆转录酶的mRNA和蛋白的表达情况。结果不同浓度熊果酸对胃癌SGC7901细胞的增殖和凋亡都有明显作用(<0.05)，呈时间和剂量依赖关系；不同浓度熊果酸的作用下人胃癌SGC7901细胞中的逆转录酶的mRNA和蛋白的表达水平均有降低，且呈时间和剂量依赖关系。结论熊果酸对胃癌细胞株SGC7901增殖和凋亡都有明显的作用，其抗肿瘤作用机制可能与下调细胞逆转录酶的表达有关。
关键词： 熊果酸 胃癌细胞SGC7901 逆转录酶 RT-PCR Western blot
