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供体不成熟树突状细胞联合环孢素A调节肝移植免疫排斥
目的:探讨应用体外培养的不成熟树突状细胞调节肝脏移植免疫反应的方法及机制.方法:建立大鼠同种异体原位肝移植模型,LWE大鼠和SD大鼠随机分为3组:(1)对照组:术后不予免疫抑制剂;(2)CsA组:术后2 d起隔日腹腔内按10mg/Kg注射CsA,共:3次:(3)CsA+DC组:除术后按CsA组腹腔注射CsA外,8 d阴茎背静脉注射106个供体骨髓体外培养的DCim.术后观察各组的生存时限及5,10,15,25 d分别取标本行肝脏免疫病理、肝功能及腹腔淋巴结中IL-2 mRNA,IL-4mRNA含量的检测.结果:CsA+DC组的平均生存时限为27.0 d,较对照组及CsA组显著延长(P＜0.05):CsA+DC组受体腹腔淋巴结中的IL-2 mRNA含量较对照组及CsA组低(P＜0.05),而IL-4mRNA含量则较前两组升高(P＜0.05).结论:联合应用CsA和体外培养的供体特异不成熟树突状细胞可降低大鼠同种异体肝移植术后免疫排斥反应;通过调节受体内Th1/Th2淋巴细胞比例是其降低大鼠肝移植术后免疫排斥反应的机制之一.
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体外培养鼠供体树突状细胞与环孢素联合调节肝脏移植免疫排斥反应
本研究应用同种异体大鼠肝脏移植模型,依据T淋巴细胞激活的双信号理论对供体特异的树突状细胞(DC)前体细胞进行体外培养,上调主要组织相容性复合物(MHC)、下调协同刺激分子CD80与CD86等的表达,探讨体外培养的不成熟树突状细胞(DCim)调节肝脏移植免疫反应的作用及机制.
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肺腺癌组织中表皮生长因子表达与树突状细胞和调节性T细胞关系的研究
目的 探讨肺腺癌组织中表皮生长因子(VEGF)表达与树突状细胞(DC)及调节性T细胞(Treg)的关系.方法 选取2000年1月至2012年12月间行手术治疗的55例肺腺癌患者术后组织标本,以及其中16例患者的癌旁正常组织.采用免疫组化方法检测癌组织和癌旁组织中VEGF、CD1a(不成熟DC表达阳性)和CD4的表达情况,分析其与患者临床特征的关系.结果 16例肺腺癌组织中VEGF的表达明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05);癌组织中CD1aDC表达[(5.59±3.71)％]明显高于癌旁正常组织[(1.39±0.61)％],差异有统计学意义(P＜0.05).癌组织中CD4T细胞阳性比例[(6.62±4.27)％]显著高于癌旁正常组织[(0.43±0.46)％],差异有统计学意义(P＜0.05).55例肺腺癌患者癌组织中,VEGF阳性45例,阳性率为81.8％.VEGF阴性和阳性患者中CD1a+ DC表达差异无统计学意义(P＞0.05),VEGF阴性和阳性患者中CD4+细胞表达差异无统计学意义(P＞0.05).CD1a+ DC与CD4+细胞比例呈正相关(r=0.306,P=0.01).CD1a和CD4的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移情况无关.结论 肺腺癌组织中VEGF、不成熟DC和Treg在癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织.不成熟DC和Treg数量与VEGF表达无关,而不成熟DC数量与Treg数量呈正相关.
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小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建与鉴定
目的:构建含有小鼠趋化因子受体-7(CCR7)基因的重组腺病毒,为下一步转染不成熟树突状细胞(imDC)诱导免疫耐受研究奠定基础.方法:提取小鼠胸腺总RNA,应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,以自行设计的带有酶切位点的引物,扩增获得CCR7基因全部序列,经过T-A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上,在BJ5183菌内和pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆,酶切鉴定,线性化后脂质体法转染HEK293细胞进行包装、PCR鉴定及扩增,得到含有CCR7基因的重组腺病毒,根据报告基因GFP测定病毒滴度.结果:成功构建小鼠CCR7基因重组腺病毒,病毒滴度为1×109U/mL.结论:该重组腺病毒载体的成功构建,为进一步研究携带CCR7基因的imDC的趋化迁移性等研究提供了一定的工作基础.
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调节性T细胞核转录因子Foxp3和CD206在蕈样肉芽肿不同病程中的表达
目的:分析早期和进展期蕈样肉芽肿中调节性T 细胞和不成熟树突状细胞的浸润情况,探讨这2 种细胞在疾病发展中的作用及意义.方法:采用免疫组化EnVision 二步法,检测20 例早期(ⅠA～ⅡA)、13 例进展期(ⅡB～ⅣB)蕈样肉芽肿患者皮损活检标本中调节性T 细胞核转录因子Foxp3 和不成熟树突状细胞表面标志物CD206 的表达情况.结果:Foxp3 的表达在蕈样肉芽肿早期明显高于进展期(P ＜ 0.05),CD206 的表达在蕈样肉芽肿的进展期明显高于早期(P ＜ 0.05).结论:调节性T 细胞在蕈样肉芽肿的早期起主导作用,不成熟树突状细胞在进展期起主导作用,提示这两种细胞可能与疾病的进展有关.
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IκBα突变体对树突状细胞成熟及其信号通路的影响
不成熟树突状细胞(DC)低表达共刺激分子,通过T细胞凋亡、无能及调节性T细胞增多等多种机制诱导免疫耐受[1].如何有效抑制DC成熟从而诱导免疫耐受是移植免疫的重要课题.不成熟DC发育为成熟DC主要由NF-κB信号通路控制[2].我们利用IκBα突变体(IκBαM)阻断NF-κB活化,观察它对DC成熟的影响.
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四种细胞因子组合从小鼠骨髓细胞体外诱导优势不成熟CD8a+DC
[目的]探索从小鼠骨髓细胞体外诱导大量优势不成熟 CD8a+DC(DC2)的新方法.[方法]取小鼠骨髓细胞,采用GM-CSF 5 ng/mL,IL-4 20 ng/mL,Flt3L 25 ng/mL,SCF 100 ng/mL 4种细胞因子组合,37℃,5%CO2体外培养诱导.第3、7、16天流式细胞术4色荧光标记法分析细胞表型,细胞计数分析总细胞产量,采用电镜、免疫荧光及相差摄影观察细胞形态.[结果]小鼠骨髓细胞经GM-CSF+IL-4+Flt3L+SCF诱导第3天在CD11c+的DC细胞群中可产生97.09%的CD8a+优势DC2细胞(占总细胞的34.6%),其中CD8a+MHCⅡ-的不成熟DC占61.77%;随培养时间延长比例下降,但培养第16天时CD8a+的不成熟DC仍占优势.总细胞计数分析显示随培养时间延长,细胞总数下降.电镜、免疫荧光及相差摄影等形态学检查显示所诱导的DC呈现典型树突状形态特征.[结论]GM-CSF+IL-4+Flt3L+SCF可以体外快速诱导小鼠骨髓细胞产生大量优势不成熟CD8a+DC.是体外制备不成熟DC2的一种较好的新方法.
