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结构型与诱生型一氧化氮合酶在大鼠胃溃疡模型中的表达和活性变化
目的研究结构和诱生型一氧化氮合酶(iNOS和eNOS)在大鼠胃溃疡模型中的表达和活性变化,以探讨它们在溃疡病理中的表达规律及所起的作用.方法采用乙酸胃腔内注射方法制备大鼠胃溃疡模型,采集溃疡诱导后1 h～15 d的溃疡基底、边缘和正常胃组织标本,采用RT-PCR方法和Westernblot方法测定组织中iNOS和eNOS的nRNA表达及蛋白水平,采用测定组织匀浆液转化L[3H]-精氨酸成L-[3H]一瓜氨酸的能力的方法检测标本的总NOS和iNOS活性.结果乙酸诱导的大鼠胃溃疡模型溃疡基底在1 d～3 d出现自限性的iNOS的高表达和活性,这一时间与炎症高峰出现时间相一致,正常胃组织检测不到iNOS的表达,溃疡愈合期的iNOS表达和活性较低.eNOS的表达和活性水平在整个过程中相对稳定.结论机体在损伤后能够自限性诱导和调节iNOS的表达,而主要来源于iNOS活性的NO在胃溃疡的损伤和炎症到愈合的病理过程中起到重要作用.
关键词： 胃溃疡/病理学 一氧化氮合酶/生物合成 一氧化氮合酶/代谢 疾病模型 动物 -
诱导型一氧化氮合酶与乳腺癌临床病理的关系及意义
目的:研究诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS )在乳腺癌中的表达及与乳腺癌临床病理因素的关系及意义.方法:应用免疫组化的方法,研究69例石蜡包埋的乳腺癌原发灶标本,切片后行iNOS染色.结果:iNOS显色位于胞质.乳癌细胞内iNOS的表达与患者年龄、月经状况、组织学分级、脉管侵袭、ER、PR无关.肿瘤大小<5 cm iNOS阳性率58.7%(27/46),≥5 cm iNOS阳性率69.6%(16/23),但两者无统计学意义.乳癌细胞内iNOS的表达与c-erbB-2蛋白、TNM分期相关,且与乳腺癌远处转移、淋巴结转移有关.iNOS阳性患者5年内生存率(51.22%)较阴性者(65.38%)低.结论:iNOS与某些临床病理指标有关.并在乳腺癌转移和预后中起重要作用.
关键词： 乳腺肿瘤/病理学 免疫组织化学 淋巴转移 一氧化氮合酶/生物合成 预后 -
一氧化氮合酶与浸润性乳腺癌血管形成的关系及临床意义
目的:探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)与浸润性乳腺癌新生血管形成的关系及其临床意义.方法:采用分光光度法检测30例浸润性乳腺癌及其相应癌旁乳腺组织和30例良性乳腺病变组织的NOS活性,应用免疫组织化学SP法,以抗第8因子相关抗原(ⅧRAg)抗体标记血管内皮细胞,根据ⅧRAg阳性的血管内皮细胞计数来测定微血管密度(microvessel density, MVD).结果:1)浸润性乳腺癌NOS活性(2.22±1.39)显著高于相应癌旁乳腺组织(1.29±0.48)及良性乳腺病变组织(0.50±0.14),P=0.004,P=0.000;相应癌旁乳腺组织NOS活性高于良性乳腺病变组织,P=0.000. 2)乳腺癌MVD计数(40.53±8.29)明显高于相应癌旁乳腺组织(18.07±4.90),P=0.000.3)有腋淋巴结转移者NOS活性(2.60±1.66)高于无淋巴结转移者(1.72±0.41),P=0.048,且明显形成更多的微血管,P=0.000.4)乳腺肿瘤组织NOS活性和MVD与肿瘤大小、分化程度和ER、PR表达状况无关.5)浸润性乳腺癌NOS活性与肿瘤MVD呈正相关,r=0.494,P=0.014.结论:1)浸润性乳腺癌NOS活性、MVD与其淋巴结转移密切相关,一氧化氮(nitric oxide, NO)生成可促肿瘤新生血管形成,并促其生长、发展和侵袭转移.2)肿瘤微环境中NO合成增加可能促肿瘤生长.3)NOS活性增加可作为与新生血管形成有关的肿瘤进展一项新的生物学指标.
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神经胶质瘤nNOS和cGMP表达水平与其病理级别相关关系的研究
目的:分析神经胶质瘤中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)和cGMP表达水平与病理级别的相关关系.方法:免疫组化法和Westernblot法测定标本中nNOS的表达水平;放射免疫法测定相同组织中cGMP的表达水平.结果:HE染色显示,36例神经胶质瘤中Ⅰ级为U例,Ⅱ级为14例,Ⅲ级为11例.免疫组化结果显示,在病理级别为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的神经胶质瘤中,nNOS的平均光密度值(OD)分别为0.171 7±0.013 6、0.274 4±0.015 0和0.368 4±0.015 0,Ⅰ、Ⅱ级比较及Ⅱ、Ⅲ级比较,差异均有统计学意义,P值均为0.000;神经胶质瘤中nNOS表达水平与其病理级别Ⅰ～Ⅲ级显著正相关,r=0.984,P=0.000,呈Ⅰ＜Ⅱ＜Ⅲ级.Western blot结果显示,在病理级别为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级的神经胶质瘤中,nNOS与β-actin的整合光密度值(IDV)之比分别为1.090 0±0.034 7、1.224 2±0.029 2和1.539 8±0.043 3,Ⅰ、Ⅱ级比较及Ⅱ、Ⅲ级比较,差异均有统计学意义,P值均为0.000;神经胶质瘤中nNOS表达水平与其病理级别Ⅰ～Ⅲ级显著正相关,r=0.953,P=0.000,呈Ⅰ＜Ⅱ＜Ⅲ级.放射免疫结果显示,在病理级别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的神经胶质瘤中,cGMP的浓度分别为(0.003 4±0.000 9)、(0.006 3±0.001 3)和(0.013 2±0.004 9)pmol/mg,Ⅰ、Ⅱ级比较及Ⅱ、Ⅲ级比较,组间差异均有统计学意义,P值分别为0.017和0.000;神经胶质瘤中cGMP表达水平与其病理级别Ⅰ～Ⅲ级显著正相关,r=0.796,P=0.000,呈Ⅰ＜Ⅱ＜Ⅲ级.结论:神经胶质瘤中nNOS和cGMP表达水平与其病理级别Ⅰ～Ⅲ级显著正相关,提示利用缓激肽(bradykinin,BK)及其类似物开放血肿瘤屏障的疗效差异可能与两者表达水平有关.
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大鼠小肠移植术后血清一氧化氮及小肠组织一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶活性的变化
目的:研究同种大鼠小肠移植后内源性一氧化氮、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的变化及一氧化氮与急性排斥反应的关系.方法:以大鼠小肠移植为研究对象,16只SD大鼠进行同系移植作为对照组,8只SD大鼠和8只Wistar大鼠进行同种移植作为实验组,两组移植后分别于第3,5,7天同时取血液及小肠组织,病理为常规苏木精-伊红染色观察,血清一氧化氮采用硝酸还原酶法测定,NOS和iNOS采用分光光度法测定.结果:在急性排斥反应发生的早期实验组血清一氧化氮水平与对照组比较显著升高(术后第3,5,7天t值分别为9.7900,9.0073,6.3159,P＜0.01),小肠组织NOS及iNOS活性亦显著高于对照组(NOS术后第3,5,7天t值分别为5.9318,9.1237,3.0457,iNOS术后第3,5,7天t值分别为3.2008,5.4930,4.8170,P＜0.01).结论:大鼠小肠移植后NOS及iNOS变化与排斥反应相关,血清一氧化氮水平的检测可作为干预移植措施始动的指标之一.
关键词： 小肠/移植 一氧化氮/血液 一氧化氮合酶/生物合成 -
一氧化氮阳性神经元在缺氧预适应中的变化
目的:探讨缺氧预适应形成机理.方法:采用组化法测定小鼠脑内一氧化氮合酶(NOS)神经元在缺氧(1次缺氧,4次缺氧)预适应中的变化.结果:1次缺氧组较正常对照组皮层的NOS阳性神经元的数目、强弱、细胞的形状、突起的数目及突起的长短未见明显变化,但1次缺氧组NOS神经元突起明显变粗,4次缺氧组与正常对照组比较无明显变化.正常对照组海马NOS阳性神经元数目较少,且呈弱阳性,1次缺氧组海马NOS阳性神经元数目增加,多呈强阳性,4次缺氧组海马NOS阳性神经元较1次缺氧组数目变少,颜色变浅.结论:脑内NOS神经元的变化参与了缺氧预适应的形成.
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口腔癌中诱导型一氧化氮合酶表达与微血管密度的关系
目的:研究口腔癌组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达与口腔癌组织微血管密度(MVD)、淋巴结转移的关系.方法:采用免疫组化SP法检测41例口腔癌石蜡切片中iNOS的表达(以9例正常口腔粘膜作对照)和MVD (选用CD34标记).结果:口腔癌细胞iNOS阳性表达的病例26例,占63.41%,其中淋巴结阴性组iNOS阳性率为42.90%,阳性组iNOS阳性率为85.00%,差异有显著性(P<0.01),9例正常口腔粘膜iNOS表达均为阴性;口腔癌MVD和淋巴结转移呈正相关(rs=0.51, P<0.01);在iNOS表达(-)～(+++)各组中MVD值分别为29.667±6.945、34.833±4.579、46.357±6.687、54.167±5.565,组间差异有显著性(P<0.001).结论:口腔癌细胞存在iNOS高表达,其表达水平与区域淋巴转移有关;口腔癌组织MVD与区域淋巴转移密切相关;口腔癌细胞iNOS表达水平与肿瘤MVD有关.
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HCMV先天性感染胎鼠脑组织中iNOS基因的表达
目的研究人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染小鼠及在不同剂量诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂和促进剂的干预下脑组织中的iNOS基因表达情况.方法将6～8周龄BALB/c小鼠分为6组,每组6只,♀♂各半.A组腹腔注射HCMV 1.0 ml,B组、C组腹腔注射HCMV 1.0 ml后2 d,分别每天腹腔注射氨基胍(AG)200 mg/kg、20 mg/kg,D组、E组腹腔注射HCMV 1.0 ml后2 d,分别每天腹腔注射左旋精氨酸(L-Arg)300 mg/kg、30 mg/kg,F组为DMEM对照组,每天每只0.2 ml.持续17 d.以上各组在孕鼠受孕第19天,剖腹取胎鼠,观察各组胎鼠生长发育及体重,有无皮下出血、淤血等情况,同时取胎鼠脑组织,作以下检测:①硝酸还原酶法测定脑组织匀浆中NO代谢产物亚硝酸盐的含量.②RT-PCR测iNOS mRNA的转录.结果HCMV感染各组孕鼠在孕19 d,其体重明显低于对照组,有部分胎鼠发育迟缓并可见明显的出血现象.感染各组胎鼠脑组织匀浆NO代谢产物明显高于DMEM对照组(P＜0.001),以B组尤为明显,A、C、E组间无差异显著性.RT-PCR在感染各组均扩增出iNOS mRNA特异性条带表达,B组信号量高,D组信号弱.DMEM对照组未检测到iN-OS特异性条带.结论HCMV先天性感染可刺激胎鼠脑组织iNOS的表达,其表达产物NO可能参与了脑组织病理损伤过程,并受相应的iNOS抑制剂和促进剂的影响.
关键词： 巨细胞病毒感染/先天性 一氧化氮合酶/生物合成 聚合式酶链反应 小鼠 -
诱导型一氧化氮合酶在前列腺癌中的表达及与肿瘤血管生成的关系
[目的]通过测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在前列腺增生症(BPH)、前列腺癌(PC)中表达情况以及微血管密度(MVD)计数,探讨其与肿瘤血管生成的关系.[方法]采用链霉菌素抗生物蛋白-过氧化酶方法,分别用iNOS多克隆抗体和CD34单克隆抗体对30例BPH、50例PC行免疫组织化学染色,采用免疫组织化学染色评分方法对iNOS表达阳性切片行定性评分,采用Weinder方法对CD34标记的微血管进行MVD计数.[结果]iNOS在BPH低表达、PC高表达, 二者在统计学上差异具有显著性(P<0.05),但iNOS在PC不同病理分级、临床分期中的表达强度,统计学上差异无显著性(P>0.05);在BPH、PC二组中;PC高、中、低分化细胞病理学分级三组中及PC临床分期T1、T2、T3、T4期中MVD的计数,各组的差异均具有显著性(P<0.01).[结论]iNOS与前列腺癌的发生、发展有关,其作用机制可能促进肿瘤血管的生成.
关键词： 前列腺肿瘤/病理学 一氧化氮合酶/生物合成 新生血管化 病理性 -
Pim-1抑制剂对实验性溃疡性结肠炎肠黏膜中iNOS、TNFα表达的影响及意义
[目的]探讨Pim-1抑制剂(PIM-Inh)对实验性小鼠溃疡性结肠炎肠黏膜中的iNOS、TNFα表达的影响及意义.[方法]BALB/C小鼠40只,采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导制作溃疡性结肠炎模型.将小鼠随机分为正常对照组、模型组(DSS组)、低PIM-Inh治疗组(低剂量治疗组)、高PIM-Inh治疗组(高剂量治疗组),分别用不同的方法处理7d,比较各组疾病活动指数(DAI)评分及病理组织学评分,并采用ELISA检测各组肠组织中iNOS、TNFα的表达并比较.[结果]正常对照组小鼠体重增加、无明显腹泻,无血便,DSS模型组小鼠出现不同程度的腹泻、血便、伴有体重下降,PIM-Inh治疗组小鼠腹泻、血便症状较轻,治疗组DAI评分下降,与DSS模型组比较,其差异均有统计学意义(P＜0.05),且呈剂量依赖性(P＜0.05).各组病理组织学评分比较:DSS模型组肠上皮黏膜明显损伤,伴有大量炎性细胞浸润,甚至黏膜下层可见较多炎症细胞,治疗组病理组织学评分明显下降,肠上皮损伤减轻,腺体隐窝排列比较规律,炎症细胞浸润减少,与DSS模型组比较,其差异均有统计学意义(P＜0.05),且呈剂量依赖性(P＜0.05).与正常对照组比较,DSS组肠组织中iNOS、TNFα表达明显上升(P＜0.05),与DSS模型组比较,PIM-Inh可抑制iNOS、TNFα的表达,且呈剂量依赖性,其差异具有统计学意义(P＜0.05).[结论]PIM-Inh对急性小鼠溃疡性结肠炎具有治疗作用,可减轻小鼠肠道炎症程度,且可抑制肠组织iNOS、TNFα表达,这可能与其抑制肠黏膜iN-OS、TNFα的表达有关.
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高脂饮食对载脂蛋白E缺乏鼠维生素D受体表达及一氧化氮合酶活性影响研究
目的 了解高脂饮食对载脂蛋白(apoE)缺乏鼠(apoE-/-)维生素D受体(VDR)表达及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性影响,探讨VDR在动脉粥样硬化(AS)形成的意义及可能机制.方法 apoE-/-小鼠与作为对照的C57BLP6J小鼠分别按数字表法分为正常食物组与高脂食物组,采用竞争蛋白结合放射免疫法检测小鼠血25-(OH)D水平,采用免疫荧光化学法及RT-PCR法检测小鼠主动脉VDR表达,应用硝酸还原酶法检测小鼠血一氧化氮(NO)含量和eNOS酶活力.结果 高脂饮食进一步加重apoE-/-小鼠AS病变、降低血25-(OH)D水平[血25-(OH)D:正常饲料C57BLP6J小鼠、高脂饲料C57BLP6J小鼠、正常饲料apoE-/-小鼠、高脂饲料apoE-/-小鼠分别为[(26.44±1.28)ng/mL、(22.68±2.07)ng/mL、(17.46±2.22)ng/mL、(15.88±0.97)ng/mL,P＜0.01].高脂饮食进一步上调apoE-/-小鼠主动脉VDR蛋白与mRNA表达水平[VDR蛋白分别为0.244±0.088、0.346±0.132、0.547±0.128、0.768±0.162,VDRmRNA分别为0.228±0.083、0.375±0.103、0.451±0.117、0.597±0.131,P均＜0.01].高脂饮食致apoE-/-小鼠血NO水平、eNOS酶活力明显增高[NO:(39.74±4.81)μmol/L、(48.1±5.24)μmol/L、(67.34±6.14)μmol/L、(86.74±8.05)μmol/L;eNOS:(8.6±0.77)U/L、(12.28±1.42)U/L、(15.96±0.92)U/L、(18.68±1.15)U/L,P均＜0.01].血25-(OH)D水平与血浆中NO含量、eNOS酶活力及VDR表达呈负相关(P＜0.01).结论 apoE-/-小鼠血25-(OH)D水平降低,VDR表达量明显上调,血NO含量、eNOS酶活力增高,高脂饮食可进一步降低血25-(OH)D、NO水平,上调主动脉VDR表达,增加eNOS酶活力.高脂饮食、维生素D、apoE相互作用,影响AS病变可能与NO、eNOS有关.
关键词： 膳食脂肪类 载脂蛋白E类/代谢 受体 骨化三醇/代谢 一氧化氮合酶/生物合成
