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胃癌癌前病变相关基因的筛查及表达研究
目的:胃黏膜异型增生是一种公认的重要癌前病变,筛查癌前病变相关基因并研究这些基因在胃癌不同阶段的表达,探讨胃癌发生分子机制.方法:手工显微切割取胃异型增生和正常组织,应用cDNAPCR方法对少量组织全基因组扩增后进行双向抑制性消减杂交,消减后片段与载体连接、克隆、筛选、测序及同源性检索.应用斑点杂交检测基因在胃癌不同阶段的表达,并用半定量RT-PCR方法进一步验证检测结果.结果:正常和异型增生组织互为tester和driver成功构建了两个cDNA消减文库,测序的26个克隆中21个片段在胃癌不同阶段有表达异常,特别是其中4个基因(P125,cytochrome coxidase subunitI,meprin A,acidic calponin)在异型增生、早癌、进展期胃癌中皆有表达改变,可能是重要的胃癌癌前病变相关基因.结论:发现4个新的与胃癌发生相关基因,其具体机制有待进一步研究.
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乙肝病毒DNA与血清标志模式的关系
目前,用于乙型肝炎(HBV)诊断,判断疗效及传染性的指标是多项血清学标志物.鉴于乙肝病毒感染后的血清学模式较复杂,而HBV-DNA是目前公认的病毒存在的特异性指标,我们随机抽取了173份HBSAg阳性的标本进行了HBV-DNA斑点杂交检测,以了解两者间的关系,现报告如下.
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β-轻型地贫伴戈谢细胞增多症1例
患者男,1岁9个月,贫血貌.体查:脾脏肋下2 cm,肝脏肋下2 cm,无骨痛,心肺正常,神经精神征未引出.实验室检查:外周血WBC 15.6×109/L,RBC2.18×1012/L,Hb 61 g/L,PLT 282×109/L,MCV 75 fL,RDW 13.3%,分类大致正常.血红蛋白分析示HbA 76.03%,HbF 21.24%,HbA2 2.74%,反向斑点杂交检测该病人基因型为41-42/N,诊断为β-轻型地贫,曾多次进行红细胞输注及有关补血方面的治疗,但症状未有改善,行骨髓穿刺以明确诊断.
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A组轮状病毒结构蛋白基因在马铃薯细胞中的初步表达
目的在马铃薯细胞中表达轮状病毒结构蛋白.方法采用RT-PCR扩增截短VP4蛋白基因,克隆于植物表达载体pBI221,再双酶切pBI221,将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11,通过三亲杂交方法,制备农杆菌转化载体pSB111-VP4,并对pSB111-VP4作点杂交检测,筛选鉴定重组子,对马铃薯组织细胞进行转化.结果转化细胞经Western 印迹检测其免疫活性, 具有良好的抗原性.结论为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备.
关键词: 轮状病毒外壳蛋白 转化载体 点杂交检测 Western 印迹 -
轮状病毒抗原基因在马铃薯细胞中的表达和活性检测
目的轮状病毒引起的婴幼儿腹泻病,在发展中国家有较高的发病率和病死率,因此,研制安全有效的轮状病毒疫苗成为当务之急.方法本文采用RT-PCR扩增截短VP4蛋白基因,克隆于殖物表达载体pBI221,再双酶切pBI221,将带有CaMV35S启动子、外源基因及终止子的片段转入pSB11,通过三亲杂交方法,制备农杆菌转化载体pSB111-VP4,并对pSB111-VP4作点杂交检测,筛选鉴定重组子,并对马铃薯组织细胞进行转化.结果Westem印迹检测其免疫活性,且具有良好的抗原性.结论该转化系统的建立,为研制轮状病毒重组疫苗、亚单组疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备.