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体外冲击波促进兔ACL重建后腱骨愈合的实验研究
[目的]观察采用体外冲击波(extracorporeal shock waves,ESW)治疗对ACL重建后腱骨愈合的影响.[方法]采用趾长伸肌肌腱建立兔ACL重建动物模型,2～3个月龄雌雄不限健康新西兰大白兔18只随机分为2组,ESW组ACL重建术后24 h给予冲击波治疗,对照组ACL重建术后不给予冲击波处理,术后2、4、8周处死动物取标本做HE和Masson三色染色观察组织愈合病理学改变,血管墨汁灌注观察愈合组织新生血管含量.[结果]ESW组术后4周腱骨界面成纤维细胞和成软骨细胞增生活跃,胶原纤维合成明显增多、排列规则.术后8周腱骨界面由致密结缔组织连接,胶原纤维大量合成,呈垂直纵向规则排列,部分区域出现胶原纤维-纤维软骨组织-骨组织的移行带改变,形成类似韧带直接止点样结构.腱骨界面组织愈合较对照组迅速.术后4周和8周腱骨界面新生血管的含量ESW组显著高于对照组(P=0.028,P=0.008).[结论]体外冲击波治疗可显著促进兔ACL重建后早期腱骨愈合.
关键词： 体外冲击波(ESW) 腱骨界面 腱骨愈合 血管墨汁灌注 -
PRP明胶海绵复合物在前交叉韧带重建术后腱骨愈合的作用
[目的]观察复合有富血小板血浆(platlet rich plasma,PRP)明胶海绵复合物的自体肌腱移植物对前交叉韧带重建术后骨隧道与肌腱间愈合过程的影响,探讨其在腱与骨愈合中发挥的效果.[方法]新西兰大白兔36只,无菌条件下获取自体PRP,制备PRP明胶海绵复合物,左下肢行自体跟腱移植前交叉韧带重建术.A组(实验组)使用PRP明胶海绵复合物;B组(对照组1)使用PRP;C组(对照组2)仅为肌腱.植入2、4、8、12周后,制作标本,进行大体及HE、Masson染色和TGF-β1免疫组化观察.[结果]A组标本大体观察:前交叉韧带连续性及张力良好,术后2周骨隧道口见少量瘢痕组织;4周骨道口见小部分骨样组织,8周骨道口较多瘢痕呈现,12周骨道口现较多骨样成分.组织学观察:HE染色显示,A组出现Sharpey样纤维和软骨细胞明显早于B组和C组;同样在Masson结果中,A组出现有规则的胶原纤维也明显多于B组和C组.TGF-β1免疫组织化学观察:2、4、8周,A组阳性率明显高于B、C组,差异具有统计学意义(P＜0.05).而在术后12周时,各组之间的表达无明显差异(P＞0.05).[结论] PRP明胶海绵复合物可促进前交叉韧带重建后腱骨的早期愈合.
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腺病毒介导TGFβ1基因转染半腱肌腱重建对兔ACL术后生物力学的影响
[目的]探讨腺病毒介导TGFp1基因转染半腱肌腱重建对兔ACL术后腱骨愈合的生物力学影响.[方法]新西兰兔48只,随机分为A、B、C三组,A组自体同侧转染AdTGFβ1的半腱肌腱;B组自体同侧转染AdGFP的半腱肌腱;C组自体同侧半腱肌腱DMEM处理,以兔双侧后肢单股半腱肌腱转染成功后重建ACL,术后第2周、4周、8周、12周处死取材,检测生物力学特性变化.[结果]A、B组半腱肌腱转染后,均可见绿色荧光表达;A组转染12h时半腱肌腱组织中TGF-β1蛋白表达量为(221.0±12.2) ng/ml;每组两两比较,术后第2周,A、B、C三组移植物分别出现7例、6例、7例骨隧道中拔出,1例、2例、1例撕裂,差异无统计学意义(P＞0.05);术后第4周,A、B、C三组肌腱移植物分别出现6例、6例、7例骨隧道中拔出,2例、2例、1例撕裂,差异无统计学意义(P＞0.05);术后第8周,A、B、C三组移植物分别出现1例、6例、6例骨隧道中拔出,7例、2例、2例撕裂,差异有统计学意义(P＜0.05);术后第12周,A、B、C三组移植物分别出现1例、2例、2例骨隧道中拔出,7例、6例、6例撕裂,差异无统计学意义(P＞0.05).术后第2周,每组大拉伸载荷差异无统计学意义(P＞0.05);术后第4周、8周、12周A组的大载荷较B、C组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05),对比之下,A组及B组差异无统计学意义(P＞0.05);随时间的推移,每组的刚度增加,但是组间差异均无统计学意义(P＞ 0.05).术后第2周,每组大拉伸载荷差异无统计学意义(P＞0.05);术后第4周、8周、12周A组的大载荷较B、C组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05),对比之下,A组及B组差异无统计学意义(P＞0.05);随时间的推移,每组的刚度增加,但是组间差异均无统计学意义(P＞0.05).[结论]腺病毒介导TGFβ1基因体外转染对自体半腱肌腱重建兔ACL术后早期可提供腱骨界面强大的抗拉强度,对膝关节早期康复有重要的意义.
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局部应用辛伐他汀促进前交叉韧带重建骨隧道腱骨愈合的效应
目的：探讨局部应用辛伐他汀促进腱骨愈合的效应。方法采用15只大白兔建立实验模型，取自体趾长屈肌腱进行前交叉韧带（ACL）重建，胫骨侧应用螺钉固定，股骨侧采用悬吊固定。左侧作为实验侧，在股骨隧道远关节侧填塞入辛伐他汀明胶海绵复合物；右侧为对照侧，填塞入明胶海绵。术后2、4、8周各处死3只做组织学检查，术后8周处死6只做生物力学检查，观察腱骨愈合情况，通过对比判断辛伐他汀促进腱骨愈合的效应。结果实验侧术后2周腱骨界面见大量新生血管，结合紧密；4周可见大量sharpey纤维形成；8周腱骨界面模糊，可见分层软骨。对照侧术后4周未见sharpey纤维形成，8周见sharpey纤维形成。生物力学检测发现，术后8周实验侧股骨隧道拉脱负荷高于对照侧，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论局部应用辛伐他汀具有促进ACL重建骨隧道腱骨愈合的作用。
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前交叉韧带重建术后腱骨愈合困难的处理
前交叉韧带（ ACL）重建术为治疗ACL损伤有效的方法，术后腱骨愈合困难是临床亟需解决的难题。ACL重建手术中韧带残端和骨隧道处理技术的不断改进为腱骨愈合提供了保障，基因和细胞治疗、富血小板血浆、骨传导材料、骨膜移植包被技术等在重建手术中的应用也逐渐成为近年来研究的热点；术后个体化负重方案的选择、低强度脉冲超声波和体外冲击波等物理因素的应用等均为ACL重建术后促进腱骨愈合提供了新的思路。
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中西医疗法促进前交叉韧带重建后腱骨愈合的研究进展
运动相关的膝关节损伤导致前交叉韧带重建手术的数量日益增多,且重建术后腱骨愈合时间长或不愈合的情况时有发生,影响患者的功能恢复.文章主要对前交叉韧带重建后移植物的腱骨愈合的中、西医相关研究的进展,即组织工程技术、中医药的应用促进前交叉韧带重建后腱骨愈合方法的相关实验及临床探索等目前研究的热点进行综述.
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人脂肪源干细胞促进前交叉韧带重建后腱骨界面愈合的实验研究
目的：探讨人脂肪源干细胞（human adipose-derived stem cells, hASCs）能否促进前交叉韧带重建后腱骨界面的愈合。方法将30只体重2.0~2.5 kg的雌性新西兰大白兔随机分为实验组和对照组，每组各15只。取同侧半腱肌作为供体肌腱，建立单侧下肢前交叉韧带重建动物模型，实验组和对照分别在胫骨和股骨隧道中注射hASCs或等量的生理盐水。分别在术后2、4和8周取材，收集胫骨-移植韧带-股骨标本行大体观察和组织学观察。结果 HE染色示对照组术后2周腱骨界面主要以炎性细胞浸润为主，4周后炎性细胞减少，8周时腱骨界面可见Sharpey纤维，形成间接止点。实验组术后4周腱骨界面可见纤维软骨细胞及少许骨细胞形成，术后8周可见新骨形成,形成直接止点的结构。结论 hASCs能促进前交叉韧带重建后腱骨界面的骨化作用，形成直接止点结构，从而促进腱骨界面的愈合。
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rhBMP-2增强腱骨界面愈合的生物力学研究
目的:探讨rhBMP-2增强移植腱骨隧道界面愈合能力.方法:取成年新西兰兔同侧半腱肌肌腱作为自体移植材料,建立70只新西兰兔双侧前交叉韧带重建动物模型.实验组在移植腱一骨隧道界面注射填充以纤维蛋白胶作为载体的rhBMP-2,对照组仅填充纤维蛋白胶,完全空白对照组则不作任何填充.分别于术后第2、4和8周取材,进行生物力学检测.结果:实验组大载荷在2、4、8周较对照组分别增强13.53%、82.13%、93.23%.实验组刚度在4、8周较对照组分别增强71.91%、121.99%,差异在统计学上显著(P＜0.05).结论:rhBMP-2可以在术后早期提高腱骨界面的大载荷和刚度,增强了腱骨界面的结合力,促进腱骨界面愈合.
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腱骨愈合过程中生物因子及信号通路调控作用的研究进展
腱骨损伤和愈合的不同阶段均受到多种生物因子和信号通路的调控.本文对近年来国内外相关文献进行整理和分析,发现部分生长因子起到促进腱骨愈合作用,包括IGF、BMP、bFGF等;部分因子起到阻碍愈合作用,如MMPs、TNF-α等;部分因子同时包含促进及抑制的亚型,如IL-1、6、8等促炎因子,IL-4等抗炎因子;部分因子的作用还存在争议,如TGF-β、VEGF等.目前,信号通路以及非编码RNA在腱骨愈合过程中的调节作用及其相关机制也受到广泛关注.但各个生物因子的量效关系、作用时机、多种因子之间的相互作用、非编码RNA对下游各种细胞因子以及细胞因子对信号通路的调控等问题仍需进一步明确.
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腱骨愈合过程中富血小板血浆对细胞增殖与胞浆内钙离子浓度的影响
目的 研究富血小板血浆(PRP)在腱骨愈合过程中对肌腱细胞、成骨细胞的增殖情况及胞浆内钙离子浓度的影响.方法 用Transwell小室建立共培养模型,用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,用激光共聚焦显微镜检测经钙离子荧光探针fluo-3/AM染色的胞浆内钙离子浓度的变化.单独培养成骨细胞组、肌腱细胞组,单独培养成骨细胞组、肌腱细胞组并各自加入PRP(加入小室上层),分别以成骨细胞和肌腱细胞为待测细胞建立共培养体系但不加入PRP组,分别以成骨细胞和肌腱细胞为待测细胞建立共培养体系并且加入PRP组. 结果 2种细胞共培养且未加入PRP两组生长速度和荧光强度均为低,差异有统计学意义(P＜0.05),2种细胞单独培养且未加入PRP的2种细胞生长速度和荧光强度均为居中,差异有统计学意义(P＜0.05),加入PRP的各组生长速度和荧光强度均为高,且同种细胞间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PRP可以去除2种细胞共培养时彼此的抑制效应,并提高细胞的增殖能力至同样高的水平,且胞浆内钙离子浓度也随之升高.
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rhBMP-2增强前交叉韧带重建术后腱骨界面愈合能力的实验研究
目的 探讨改善前交叉韧带重建后早期移植腱隧道界面愈合方式.方法 取成年新西兰兔同侧半腱肌肌腱作为自体移植材料.建立30只新西兰兔双侧前交叉韧带重建动物模型.实验组在移植腱-骨隧道界面注射填充以纤维蛋白胶作为载体的rhBMP-2,对照组仅填充纤维蛋白胶,完全空白对照组则不作任何填充.分别于术后第2、4和8周取材,进行大体及光镜观察.结果 对照组术后2周界面组织主要为肉芽组织,术后4周界面可见成骨反应及大量成纤维细胞,术后8周界面部分区域可见Sharpey纤维,形成间接止点.实验组术后2周界面组织主要由软骨细胞和软骨基质构成,术后4周可见类似直接止点的四层结构,术后8周界面主要由直接止点构成.结论 rhBMP-2可以在术后早期诱导腱骨界面形成类似直接止点的特有结构,直接止点缓冲应力的力学性能上要优于间接止点,增强了腱骨界面的结合力.
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富含血小板血浆对前交叉韧带重建后腱骨愈合的影响
目的:探讨富含血小板血浆(PRP)对前交叉韧带(ACL)重建后腱骨愈合的影响.方法:选取2015年1月至2016年6月广西医科大学第八附属医院收治的ACL损伤患者50例,按随机数字表法将患者分为A组和B组,每组25例.两组患者均行ACL重建术,A组采用PRP处理自体腘绳肌腱及关节腔注射,B组采用等量生理盐水处理自体腘绳肌腱及关节腔注射.于术前、术后采用Lysholm评分、国际膝关节文献委员会(IKDC)评分对两组的膝关节功能进行评分,比较两组术后胫骨隧道缩小程度.结果:两组患者手术前、后的Lysholm评分比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).两组患者术后1年的Lysholm评分及IKDC评分优良率比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).A组术后3个月、6个月胫骨骨隧道缩小的程度较B组明显,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:关节镜下自体腘绳肌腱重建ACL的临床效果良好,但PRP不是影响ACL重建术后膝关节功能恢复的决定因素;PRP可促进ACL重建后腱骨愈合.
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富血小板血浆应用于前交叉韧带重建后腱骨愈合的研究进展
前交叉韧带(ACL)损伤是常见的运动损伤.前交叉韧带损伤后难自愈,往往引起相应并发症,如半月板损伤、关节退行性变等[1].关节镜下ACL重建术是目前ACL损伤的主要治疗方法,重建的移植物有自体移植物、异体移植物、人工韧带,其中自体腘绳肌腱是常用的移植物[2].重建术恢复了ACL的解剖结构,术后仍有0.7％～10.0％的患者出现膝关节松动等并发症.因此,ACL重建术后移植物与骨隧道愈合是手术获得良好疗效的关键[3].由于组织学的差异,移植肌腱与骨隧道两者愈合的能力较差,愈合时间长是ACL重建术后的关键问题[4].关于ACL重建术后腱骨愈合的研究很多,应用富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)促进ACL重建术后腱骨愈合是近年来研究的热点.本文就PRP对ACL重建术后腱骨愈合影响的相关研究作一综述.
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骨髓单个核细胞促进腱骨愈合的生物力学测试
目的 采用自体骨髓单个核细胞植于前交叉韧带重建术中的腱-骨界面,观察其增强腱-骨愈合强度的能力.方法 24只新西兰大白兔行双侧膝关节半腱肌肌腱前交叉韧带重建术,随机选取一侧膝关节作为实验侧,胫骨侧腱-骨界面植入自体骨髓单个核细胞,对侧不植入骨髓单个核细胞作为对照侧.于术后2、4、8、12周取材,测试移植肌腱的腱-骨界面抗拉伸强度,记录拉脱或断裂负荷及重建韧带的断裂部位.结果 在术后2、4、8周,重建韧带断裂部位均发生在胫骨骨道内.术后12周,对照侧有1例自肌腱部分断裂,5例从胫骨骨道拔出;实验侧有3例自肌腱部分断裂,3例从胫骨骨道拔出.术后2周,实验侧与对照侧相比,两侧断裂负荷数值比较差异无统计学意义(P>0.05);在术后4、8、12周,两侧断裂负荷数值比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 自体骨髓单个核细胞可以增强腱骨界面的抗拉伸强度,有利于腱-骨界的组织愈合.
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医用几丁糖对兔腱骨愈合和肌腱粘连的影响
目的 探讨医用几丁糖在兔肩袖肌腱修复术后对兔腱骨愈合和肌腱及周围组织粘连的影响.方法挑选18只成年健康雄性新西兰大白兔,建立肩袖损伤动物模型,然后随机分为医用几丁糖组(A组)和生理盐水对照组(B组),每组9只.两组均于冈上肌切断后2周行腱-骨缝合,重建冈上肌止点,并按分组进行药物处理.术后6周应用大体解剖观察 、肌腱吻合处粘连程度等级评分和组织学检查等方法 ,系统评价医用几丁糖对腱骨愈合和肌腱及周围组织粘连的影响.结果 术后6周,A组肌腱及周围组织粘连程度轻于B组,差异有统计学意义(H=50.879,P<0.05);与B组相比,A组软骨细胞增生明显(t=12.408,P<0.05),肌腱处成纤维细胞数量明显减少(t=8.687,P<0.05).A组无明显脂肪浸润,而B组可见脂肪空泡.A组成纤维细胞排列紧密,排列方向与正常肌腱细胞方向大致相同,其内可见少量新生毛细血管,整体愈合与正常兔肩袖组织较为相似,愈合良好;B组的成纤维母细胞及成纤维细胞排列紊乱无序,无明显毛细血管增生,整体愈合较差.结论 医用几丁糖在促进腱骨愈合的同时,也减少了肌腱及周围组织粘连的发生.
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黄芩素通过WNT/β-catenin信号通路促进大鼠腱骨愈合
目的 探讨黄芩素对大鼠腱骨愈合的作用及相关分子机制.方法 取40只8周龄的雄性SD大鼠,随机分为对照组(n=20)和实验组(n=20).两组动物均行大鼠腱骨愈合模型造模.实验组大鼠灌胃黄芩素10 mg/(kg·d),对照组灌胃等量的生理盐水.术后3周、6周各处死10只大鼠并取材,通过生物力学、组织学观察各组腱骨愈合的程度.此外,体外培养原代大鼠肌腱干细胞,加入不同浓度(0、0.1、1、10 μmol/L)的黄芩素处理,14d后分别进行ALP、茜素红染色.Q-PCR、Western Blot检测Runx2、OSX、OCN、一型胶原以及β-catenin的变化.随后,在肌腱干细胞中加入10 μmol/L的黄芩素,并且加入WNT/β-catenin通路抑制剂DKK-1共培养,14d后收集蛋白行Western Blot检测,观察β-catenin、Runx2以及OCN蛋白表达的变化.结果 生物力学结果显示术后3周和术后6周时实验组的腱骨愈合程度明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).组织学结果显示实验组在术后3周和6周时腱骨界面细胞成熟程度更高,sharpey纤维生长密集度与间质钙化程度更高.ALP、茜素红染色、Q-PCR和Western Blot结果显示不同浓度黄芩素均能提高肌腱干细胞的ALP活性,增加矿化结节形成、提高Runx2、OSX、OCN、一型胶原和β-catenin的表达.而β-catenin抑制剂DKK-1后能显著降低黄芩素的这种促成骨作用.结论 黄芩素可以有效促进腱骨界面细胞成熟与腱骨界面的胶原分泌,加速腱骨愈合并提高腱骨愈合质量,这种促进作用呈现WNT/β-catenin信号依赖性.
关键词： 黄芩素 大鼠 腱骨愈合 肌腱干细胞 Wnt/β-catenin -
关节内环境对前交叉韧带重建后腱-骨愈合的影响
目的:探讨兔前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)重建术后早期关节腔内冲洗对腱-骨愈合过程中组织学和生物力学的影响.方法:取24只新西兰大白兔,建立双侧ACL重建模型,一侧膝作为实验组,并取对侧作为对照组.实验组术后5d内定期行关节腔内冲洗,对照组不做处理.在术后4、8、12周行生物力学测定和腱-骨愈合部位组织学观察,比较韧带断裂时所需拉力大小以及腱-骨界面处组织学变化.结果:发现实验组韧带强度及组织学转归明显优于对照组,差别有显著的统计学意义(P＜0.01).结论:早期关节腔冲洗对ACL重建后韧带强度和腱-骨愈合有着积极的作用,提示可以通过关节腔冲洗的方法来改善ACL重建后早期关节内环境以改善重建后手术效果.
