首页 > 文献资料
-
细胞外信号调节蛋白激酶5/凋亡调节蛋白信号途径在低温诱导心肌细胞损伤及凋亡中的调控作用
目的：探讨低温刺激诱导心肌细胞损伤及凋亡，以及细胞外信号调节蛋白激酶5（ERK5）/凋亡调节蛋白Bim途径的调控作用。
方法：基于乳鼠原代心肌细胞，低温培养箱施加低温刺激；使用特异性小干扰RNA（siRNA）下调ERK5或Bim的表达；细胞凋亡使用流式细胞仪检测；各蛋白表达水平通过Western blot检测；细胞内钙离子、活性氧簇（ROS）水平、线粒体膜电位（ΔΨm）通过荧光标记及流式细胞仪检测。
结果：在低温刺激下的心肌细胞中，ERK5 siRNA可加剧Bim蛋白表达；Bim siRNA不影响ERK5，但减轻p-ERK5表达；ERK5 siRNA导致更高的细胞凋亡率，Bim siRNA则可减弱ERK5 siRNA的促凋亡作用；ERK5 siRNA加重了细胞内钙离子超载、ROS激活、线粒体膜电位破坏，Bim siRNA则可对抗上述损伤性作用。
结论：在低温干预下的心肌细胞中，下调ERK5可释放对Bim的表达抑制，加重凋亡、细胞内钙离子超载、ROS爆发，造成更严重的线粒体膜电位破坏，而下调Bim则产生反向的保护作用。结果显示ERK5/Bim途径在低温诱导心肌细胞损伤中的重要调控作用。关键词： 低温刺激 心肌细胞 细胞外信号调节蛋白激酶5 凋亡调节蛋白Bim -
大鼠脊髓小胶质细胞细胞外信号调节蛋白激酶5/核因子κB信号通路在神经病理性疼痛中的作用
目的 探讨脊髓细胞外信号调节蛋白激酶5 (ERK5)信号通路在炎性痛中的作用.方法 24只Sprague-Dawley大鼠随机分入两组,脊神经结扎(SNL)组大鼠行L5 SNL建立神经病理性疼痛模型,假手术(Sham)组大鼠仅暴露脊神经不结扎,观察两组大鼠脊髓磷酸化ERK5 (p-ERK5)的表达情况.另取大鼠随机分别鞘内注射ERK5反义寡核苷酸(AS组)、ERK5错义寡核苷酸(MM组)和0.9％氯化钠溶液(NS组),观察对SNL术后大鼠机械缩足反射阈值(PWMT)、热缩足反射潜伏期(PWTL)及核因子κB(NF-κB)的影响.结果 术后1、3d,SNL组的p-ERK5阳性细胞数量均显著高于术前(P值均＜0.05),Sham组的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).术前AS组、MM组、NS组间大鼠脊髓NF-κB含量、PWTL、PWMT的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).SNL术后1 dAS组大鼠脊髓NF-κB含量显著低于NS组、MM组(P值均＜0.05),但3组均显著高于同组术前(P值均＜0.05).SNL术后1、3d3组的PWTL和PWMT均显著低于同组术前(P值均＜0.05),AS组均显著高于MM组同时间点(P值均＜0.05).结论 脊髓小胶质细胞ERK5参与了神经病理性疼痛的信号转导过程,其部分作用是通过激活转录因子NF-κB实现的.
关键词： 细胞外信号调节蛋白激酶5 神经病理性疼痛 脊髓 -
拮抗触液核细胞外信号调节蛋白激酶5对吗啡依赖大鼠戒断行为的影响
目的 探讨触液核磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶5(ERK5)在吗啡依赖大鼠戒断行为中的作用.方法成年♂ SD大鼠48只,体质量230～270 g,采用随机数字法,将大鼠随机分为两组(n=24):吗啡-纳洛酮-DMSO组(A组)和吗啡-纳洛酮-BIX02188组(B组).采用剂量递增法皮下注射吗啡以建立大鼠吗啡依赖模型,d 6上午经腹腔注射纳洛酮,催促戒断症状出现,即建立吗啡戒断模型.采用行为药理学方法结合免疫荧光技术,侧脑室内注射ERK5特异性抑制剂BIX02188,观察其对吗啡依赖大鼠戒断行为、戒断所致痛觉过敏及触液核p-ERK5表达的影响.结果 与吗啡-纳洛酮-DMSO组相比,吗啡-纳洛酮-BIX02188组大鼠跳跃、咬牙、湿狗样抖动、腹泻及体重减轻等戒断症状明显缓解(P<0.05),而扭体、流涎无改善(P>0.05);戒断所致痛觉过敏明显减轻(P<0.05).与吗啡-纳洛酮-DMSO组相比,吗啡-纳洛酮-BIX02188组大鼠触液核p-ERK5阳性神经元数量明显减少(P<0.05).结论 拮抗触液核ERK5可减轻吗啡依赖大鼠戒断症状,提示触液核ERK5参与吗啡依赖大鼠戒断症状的表达.
-
脊髓水平NMDAR-ERK5信号通路在吗啡依赖大鼠戒断行为中的作用
目的 探讨脊髓水平N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)-细胞外信号调节蛋白激酶5(extracellular signal-regulated kinase 5,ERK5)信号通路在吗啡依赖大鼠戒断行为中的作用.方法 成年雄性SD大鼠96只,体质量200～ 250 g,采用随机数字法,将实验动物随机分为四组(n=24):对照组(A组)、戒断组(B组)、二甲基亚砜(DMSO)组(C组)、MK801组(D组).采用剂量递增法皮下注射吗啡以建立大鼠吗啡依赖模型,第6天上午经腹腔注射纳洛酮,催促戒断症状出现,即建立吗啡戒断模型.采用行为药理学方法结合western blot技术,鞘内注射NMDAR抑制剂MK801,观察其对吗啡依赖大鼠戒断行为、戒断所致痛觉过敏及脊髓p-ERK5表达的影响.结果 A组大鼠腹腔注射纳洛酮后并未出现戒断症状及痛觉过敏.与A组相比,B组大鼠戒断症状评分[(45.2±7.3)分]、痛觉过敏评分[(14.4±3.7)分],C组大鼠戒断症状评分[(44.7±6.2)分]、痛觉过敏评分[(13.2±2.7)分],D组大鼠戒断症状评分[(28.3±1.6)分]、痛觉过敏评分[(5.9±11)分]明显增加(P＜0.05);与C组相比,D组大鼠鞘内注射MK801后戒断症状评分[(28.3±1.6)分]、痛觉过敏评分[(5.9±1.1)分]明显降低(P＜0.05).与A组相比,B组大鼠脊髓水平p-ERK5(12 848±621)、C组大鼠脊髓水平p-ERK5(12 579±396)表达显著上调(P＜0.05);与C组大鼠脊髓水平p-ERK5(12 579±396)相比,D组大鼠鞘内注射MK801后脊髓水平p-ERK5(5123±546)表达显著下调(P＜0.05).结论 脊髓水平NMDAR-ERK5信号通路参与吗啡依赖大鼠戒断症状的表达.
关键词： 吗啡依赖 戒断症状 脊髓 N-甲基-D-天冬氨酸受体 细胞外信号调节蛋白激酶5 -
拮抗脊髓细胞外信号调节蛋白激酶5对吗啡依赖大鼠戒断行为的影响
目的 探讨脊髓水平细胞外信号调节蛋白激酶5(extra-cellular signa1-regulated protein kinase 5,ERK5)在大鼠吗啡戒断行为中的作用.方法 成年雄性SD大鼠96只,体质量200～ 250 g,采用随机数字法,将其分为4组(每组n=24):生理盐水-纳洛酮-DMSO组(A组)、生理盐水-纳洛酮-BIX02188组(B组)、吗啡-纳洛酮-DMSO组(C组)、吗啡-纳洛酮-BIX02188组(D组).采用剂量递增法皮下注射吗啡以建立大鼠吗啡依赖模型,第6天上午经腹腔注射纳洛酮,催促戒断症状出现,即建立吗啡戒断模型.结合药理学手段鞘内注射ERK5特异性抑制剂BIX02188,观察其对吗啡依赖大鼠戒断行为及戒断所致的痛觉过敏的影响.结果 A、B两组大鼠腹腔注射纳洛酮后并未出现戒断症状及痛觉过敏.与A组相比,C组大鼠戒断后咬牙(7.5±1.1)分、湿狗样抖动(4.6±0.7)分、戒断后跳跃(5.3±0.7)分、扭体(8.9±1.9)分、腹泻(7.1±1.6)分、流涎(2.8±0.6)分、体质量减轻(7.9±0.9)分、戒断症状总评分(44.8±5.9)分、痛觉过敏评分(14.6±2.4)分及D组大鼠戒断后咬牙(3.1±0.5)分、湿狗样抖动(1.5±0.4)分、戒断后跳跃(2.2±0.5)分、扭体(7.9±1.6)分、腹泻(1.8±0.5)分、流涎(2.8±0.9)分、体质量减轻(3.7±0.6)分、戒断症状总评分(23.1±1.3)分、痛觉过敏评分(3.5±1.1)分明显增加(P＜0.05);与C组相比,D组大鼠鞘内注射BIX02188后戒断症状如咬牙(3.1±0.5)分、湿狗样抖动(1.5±0.4)分、戒断后跳跃(2.2±0.5)分、腹泻(1.8±0.5)分、体质量减轻(3.7±0.6)分、戒断症状总评分(23.1±1.3)分、痛觉过敏评分(3.5±1.1)分明显得到缓解(P＜0.05);而扭体(7.9±1.6)分及流涎(2.8±0.9)分并未得到缓解,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 通过鞘内注射BIX02188拮抗脊髓ERK5可显著减轻吗啡依赖大鼠的戒断症状.
关键词： 吗啡依赖 戒断症状 脊髓 细胞外信号调节蛋白激酶5 BIX02188
