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钙周期素结合蛋白的细胞周期依赖性转位现象
目的 研究钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)在胃癌细胞SGC7901中亚细胞定位与细胞周期的关系.方法 利用双胸腺嘧啶脱氧核苷(胸苷)阻滞法将胃癌细胞SGC7901进行细胞周期同步化,流式细胞术检测细胞周期同步化效果.免疫荧光染色法观察CacyBP/SIP在不同时期的亚细胞定位.蛋白质印迹法检测CacyBP/SIP总蛋白及核蛋白在不同时期的表达水平.结果 采用双胸苷阻滞法使SGC7901细胞阻滞于G1/S期,撤药后培养4h,细胞进入S期.大多数细胞在8～12h时进入G2/M期,16h又重新进入G1期.免疫荧光染色发现,在G1和S期时,CacyBP/SIP主要分布在细胞浆中,而在以G2期为主的细胞中,CacyBP/SIP聚集在核周或进入胞核,说明CacyBP/SIP存在细胞周期依赖性的核转位.在细胞的各时相中CacyBP/SIP总蛋白无明显变化,但在G2期时CacyBP/SIP的核蛋白表达水平增高.结论 CacyBP/SIP存在细胞周期依赖的转位现象,可能参与了G2/M期的调控作用.
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CacyBP编码基因对胃癌细胞多药耐药性形成的影响
目的探讨CacyBP在胃癌多药耐药机制中的作用.方法构建CacyBP正义核酸真核表达载体pcDNA3.1 /hCacyBP+,以脂质体将其导入胃癌药敏细胞SGC7901.以RT-PCR检测hCacyBP mRNA水平的变化;以MTT检测SGC7901及转染细胞对ADR的药物敏感性;以流式细胞仪(FCM)检测SGC7901及转染细胞内ADR的蓄积浓度及细胞周期.结果转染pcDNA3.1/hCacyBP+的SGC7901,其hCacyBP mRNA表达水平显著高于空载体转染及未转染之SGC7901,且细胞生存率亦有所增高.未转染之SGC7901及分别转染空载体或pcDNA3.1 /hCacyBP+之SGC7901细胞,平均ADR蓄积浓度分别为5.64,5.49和5.17.与未转染之SGC7901相比,转染pcDNA3.1/hCacyBP+和空载体的SGC7901细胞G1期减少,G2期及S期增高.结论 CacyBP在胃癌MDR机制中可能有一定作用.
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人结肠癌细胞中CacyBP/SIP核转位差异表达基因的验证
目的：验证细胞周期聚合酶链反应（PCR）芯片筛选出来的差异表达基因。方法胃泌素刺激的SW480细胞作为实验组，无胃泌素刺激的SW480细胞作为对照组。用蛋白免疫印迹（Western blot）法对胃泌素刺激前后的钙周期素结合蛋白（CacyBP/SIP）表达定位进行检测；用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术对细胞周期PCR芯片筛选出的差异表达基因周期素依赖性蛋白激酶8（CDK8）和细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2（CKS2）进行验证。结果胃泌素刺激前CacyBP/SIP主要表达于细胞质，刺激后可同时表达于细胞质和细胞核；同细胞周期PCR芯片结果一致，基因CDK8和CKS2在实验组的表达量较对照组明显上调（P<0.05）。结论胃泌素刺激可使CacyBP/SIP发生核转位；基因芯片筛选出的差异基因大体可靠，对筛选出的差异基因可以进行进一步研究。
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乳腺癌组织中CacyBP/SIP的表达情况及临床病理意义
目的:探讨钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)在乳腺癌组织中的表达及临床病理意义.方法:应用免疫组织化学染色检测CacyBP/SIP在86例乳腺癌组织、20例癌旁相对正常乳腺组织及16例乳腺腺病组织中的表达情况并分析临床病理意义.结果:免疫组织化学结果显示,在86例乳腺癌组织、20例癌旁组织、16例乳腺腺病组织中CacyBP/SIP蛋白的阳性表达率分别为75.6％ (65/86)、30.0％ (6/20)和43.8％ (7/16),差异有统计学意义(P＜0.05);CacyBP/SIP蛋白在乳腺癌组织中的表达与组织学分级、淋巴结转移及TNM分期有统计学意义(P＜0 05);CacyBP/SIP蛋白表达与ER(r=0.275)、HER2(r=0.256)有相关性(P＜0.05).结论:CacyBP/SIP在乳腺癌组织中高表达,且与ER、HER2的表达呈正相关,可能作为癌基因参与乳腺癌的恶性表型.
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表皮生长因子对CacyBP/SIP过表达慢病毒载体转染的结肠癌细胞CacyBP/SIP核转位的影响
目的 观察和探讨表皮生长因子对钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)过表达慢病毒载体转染结肠癌细胞CacyBP/SIP核转位的影响.方法 构建含有CacyBP/SIP的慢病毒重组质粒并转染至结肠癌SW480细胞.采用激光共聚焦显微镜及Western blot法观察100 ng/mL表皮生长因子刺激前后CacyBP/SIP蛋白在胞质、胞核中的定位及表达变化.结果 激光共聚焦和Western blot检测结果发现,表皮生长因子刺激前CacyBP/SIP均主要定位和表达于细胞质,刺激1h后CacyBP/SIP定位和表达于细胞胞质和胞核.结论 表皮生长因子刺激过表达CacyBP/SIP慢病毒载体转染的结肠癌细胞可引起CacyBP/SIP由胞质转位至细胞核.
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反义人钙周期素结合蛋白编码基因转染对胃癌细胞多药耐药性的影响
目的研究hCacyBP编码基因在胃癌多药耐药机制中的作用.方法采用Northern杂交, 检测SGC7901细胞及SGC7901/ADR细胞中hCacyBP mRNA表达水平的差异.将hCacyBP cDNA克隆到pcDNA3.1中, 构建反义核酸真核表达载体pcDNA3.1/hCacyBP-, 并转染耐阿霉素人胃癌细胞, 用RT-PCR检测转染细胞中hCacyBP mRNA水平的变化. 用MTT比色法和FCM, 分别检测SGC7901/ADR细胞、pcDNA3.1/hCacyBP-和pcDNA3.1分别转染的SGC7901/ADR细胞, 对ADR的药物敏感性和胞内ADR的蓄积浓度.结果 Northern杂交证实, SGC7901/ADR细胞中hCacyBP mRNA表达的水平显著高于SGC7901细胞.成功地构建了pcDNA3.1/hCacyBP-.以pcDNA3.1/hCacyBP-转染的SGC7901/ADR细胞中hCacyBP mRNA的表达水平, 显著低于空载体转染及未转染的SGC7901/ADR细胞.MTT检测表明, 转染pcDNA3.1/hCacyBP-的细胞, 对ADR的药物敏性较空载体转染及未转染的SGC7901/ADR细胞有所增高, 生存率较后两者为低. FCM显示, 转染pcDNA3.1/hCacyBP-的 SGC7901/ADR细胞、转染pcDNA3.1及未转染的SGC7901/ADR细胞内ADR的蓄积浓度, 分别为6.72、5.62和5.54.结论 hCacyBP碥码基因对胃癌细胞的MDR有一定的影响, CacyBP可能是一种胃癌细胞MDR中的重要分子.
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CacyBP/SIP研究进展
1996年,Filipek等从艾氏腹水瘤细胞中发现了一种30kDa的蛋白质,它可与钙周期素(calcyclin,又名S100A6)结合,故此命名为钙周期素结合蛋白(calcylin binding protein, CacyBP)[1].2001年,Matsuzawa等[2]在研究肿瘤抑制基因p53诱导后β-连环蛋白(β-catenin)的泛素化降解通路时发现一种蛋白质,它可以与人RING指状蛋白sina的同源基因(seven in absentia homolog 1, Siah-1) 结合,命名为SIP(Siah-1 interacting protein).
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钙周期素结合蛋白(CacyBP)在创伤性脑损伤中的意义和机制
创伤性脑损伤( traumatic brain injury,TBI)为神经外科严重疾患,其死亡率、致残率居各类创伤之首[1,2].TBI后神经细胞受损、缺失或死亡,造成神经功能严重受损从而导致偏瘫、失语、学习记忆障碍,或者昏迷,甚至死亡.随着全球交通、建筑和工矿等企业的高速发展,其发病率呈逐年上升趋势,危害严重,已经成为严重的社会问题.对TBI的细胞生物学机理,缺乏突破性认识,一直是困扰TBI临床诊治的瓶颈问题.研究发现Ca2+超载是TBI发生、发展的重要因素[3],Ca2+超载也是TBI后各种损害因素所致神经元损伤的共同通路,但Ca2+超载引发神经元损伤的机制尚不清楚.
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S100A6 siRNA的构建及鉴定
目的 利用小片段干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制S100A6蛋白的表达,为研究CacyBP/SIP核转位机制提供有利的工具.方法 设计S100A6的siRNA序列,用脂质体LipofectamineTM 2000将siRNA转染至人结肠癌SW480细胞中,在荧光显微镜下观察转染效率,用Real-time PCR及Western blot方法检测S100A6在人结肠癌SW480细胞内的mRNA和蛋白表达.结果 构建了3对S100A6-siRNA,荧光显微镜下检测转染人结肠癌SW480细胞成功;RT-PCR证明了在SW480细胞内S100A6的mRNA表达显著降低(P＜0.05);Western blot证明了SW480细胞内S100A6蛋白表达显著降低(P＜0.05);与S100A6 si-1、S100A6 si-3组相比,S100A6si-2组对S100A6的mRNA和蛋白抑制效果明显(P＜0.05).结论 成功构建了S100A6-siRNA,为CacyBP/SIP核转位机制研究提供了有利的工具.
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钙周期素结合蛋白在乳腺癌转移性腋淋巴结中表达的预后价值
目的 研究乳腺癌转移性腋淋巴结中钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)的表达与患者复发转移及预后的关系.方法 采用免疫组化SP法检测CacyBP/SIP在乳腺癌术后腋淋巴结中的表达,分析其表达与患者复发转移及预后的相关性.结果 CacyBP/SIP在转移性腋淋巴结中高表达(34.88％),腋淋巴结无转移者无表达.在转移性腋淋巴结中复发转移组CacyBP/SIP的阳性表达率46.67％,无复发转移组的阳性表达率7.70％.CacyBP/SIP在转移性腋淋巴结中的表达与患者的生存率呈负相关性,与累积复发转移风险呈正相关性.结论 CacyBP/SIP可能参与并促进乳腺癌的复发转移、影响患者生存.
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大鼠创伤性脑损伤后脑组织钙周期素结合蛋白的表达及意义
目的 探讨大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑组织中钙周期素结合蛋白(calcyclin binding protein,CacyBP)的表达规律及意义.方法 雄性SD大鼠60只,按随机数字表法分为正常对照组(10只)和TBI组(50只);采用头颅侧向旋转致伤方法制作TBI模型,并按伤后大鼠处死时间分为6,24,72 h、7,14 d共5个亚组,每组10只.采用免疫组化方法检测CacyBP在大鼠脑组织中的表达变化规律和分布情况.CacyBP阳性结果判断标准以细胞浆内出现棕黄染色颗粒为阳性,反之为阴性.结果 大鼠脑组织中CacyBP主要分布在海马、齿状回及皮层下神经元的胞浆中.与正常对照组的CacyBP高表达比较.TBI后6 h,其表达量明显减少,为低值(P<0.01),随后表达量逐渐递增,至损伤后14 d其表达量恢复高值,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 在TBI后,CacyBP出现一个表达低峰,提示在不同机制影响下其可能对脑损伤的发生、发展发挥重要作用.
