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钙敏感受体在人参皂苷Rg1防治心肌细胞损伤中的作用
目的 探讨钙敏感受体(CaSR)在人参皂苷Rg1防治心肌损伤中的作用.方法 选择大鼠新生乳鼠心脏组织H9C2心肌细胞于培养基中培养,实验分为对照组、异丙肾上腺素(ISO)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组及普萘洛尔组.对照组未加任何试剂培养,ISO组加入ISO 10 μmol/L作用48 h,低、中、高剂量组及普萘洛尔组,分别加入人参皂苷Rg1 20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L、普萘洛尔2μmol/L预孵育30 min,再加入ISO 10 μmol/L,作用48 h.测定细胞体积及心肌细胞蛋白含量,观察各组心肌细胞线粒体膜电位变化、细胞内Ca2+的瞬间变化、CaSR表达及凋亡因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)蛋白表达.结果 与对照组比较,ISO组心肌细胞蛋白含量明显增加[(28.8±2.8)μg vs (17.8±2.3)μg,P＜0.05];与ISO组比较,中、高剂量组及普萘洛尔组心肌细胞蛋白含量明显降低,差异有统计学意义[(21.7±2.9)μgvs (28.8±2.8)μg,P＜0.05;(19.6±1.8)μg vs (28.8±2.8)μg,P＜0.01;(19.2±2.3)μg vs (28.8±2.8)μg,P＜0.01)].与对照组比较,ISO组心肌细胞肥大,线粒体膜电位降低,细胞内Ca2+浓度、CaSR表达及caspase-3蛋白表达增加.与ISO组比较,中、高剂量组心肌细胞蛋白含量明显降低,线粒体膜电位绿色荧光明显减弱,细胞内Ca2+浓度、CaSR及caspase-3表达明显降低.结论 人参皂苷Rg1通过CaSR可以减轻ISO诱导的肥大心肌细胞凋亡.
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钙敏感受体介导的人脐静脉内皮细胞钙内流及一氧化氮生成过程中TRPC1与STIM1的相互作用
目的 探讨经典瞬时受体电位通道1 (TRPC1)与基质相互作用分子1(STIM1)在钙敏感受体(CaR)介导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙离子(Ca2+)内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用.方法 取华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科健康孕产妇剖宫产新生儿的新鲜脐带,原代培养HUVEC并传代.将所得HUVEC分别与CaR激动剂精胺[激活钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)]、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231(阻断SOC阻、激活ROC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(激活SOC、阻断ROC)共孵育.采用免疫荧光技术检测HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达,免疫共沉淀法检测TRPC1与STIM1之间的相互作用.取2～3代HUVEC进行分组,将构建的TRPC1、STIM1干扰质粒(shTRPC1、shSTIM1)联合转染HUVEC即shTRPC1+ shSTIM1组(实验组)、vehicle-shTRPC1+ vehicle-shSTIM1组(空质粒组)和对照组,将3组细胞分别加入上述4种不同的药物进行干预.采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVEC细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化,NO荧光探针DAF-FM负载方法同步检测HUVEC中NO生成的变化.结果 (1) HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达:激光共聚焦显微镜下观察,正常对照组HUVEC中TRPC1和STIM1蛋白的表达呈阳性,二者共定位于胞浆.Calhex231+TPA+精胺+Ca2+组、Ro31-8220+精胺+Ca2+组和Go6976+精胺+Ca2+组HUVEC中定位于胞浆中的TRPC1、STIM1均减少,二者结合也减少.(2) HUVEC中TRPC1与STIM1的相互作用:Calhex231+ TPA+精胺+Ca2+组、Ro31-8220+精胺+Ca2+组和Go6976+精胺+Ca2+组STIM1/TRPC1和TRPC1/STIM1的相对比值的百分数分别为(25.98 ±2.17)％和(44.10 ±4.01)％、(20.85±1.01)％和(46.31±3.47)％、(23.88±2.05)％和(39.65±2.91)％,均明显低于对照组的(100.00±4.66)％和(100.00±6.40)％以及精胺+ Ca2+组的(106.04±2.45)％和(107.78±2.66)％(P均＜0.05).(3)联合转染TRPC1与STIM1对4种不同药物诱导的HUVEC中[Ca2+]i和NO生成的影响:联合转染TRPC1与STIM1对4种不同药物诱导的HUVEC中[Ca2+]i两激发光荧光强度比的变化值(△ratio)和NO净荧光强度值的影响趋势是一致的,均为实验组[Ca2+]iΔratio值和NO净荧光强度值均明显低于对照组和空质粒组(P均＜0.05),而空质粒组与对照组比较二者差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 TRPC1与STIM1以二元复合物的形式共同调节CaR介导HUVEC Ca2+内流及NO生成.
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动脉粥样硬化对大鼠心肌钙敏感受体表达和细胞凋亡的影响
目的 观察高脂血症和动脉粥样硬化对大鼠心肌钙敏感受体(CaSR)表达和细胞凋亡的影响.方法 采用腹腔注射维生素(Vit)D3(6×105U/kg)+高脂饮食6周的方法,建立大鼠高脂血症和动脉粥样硬化模型.Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=12)和动脉粥样硬化组(n=12).采用RT-PCR和Western blot分别观察CaSR、Bax、Bcl-2、easpase-3的mRNA和蛋白表达.TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况.光镜观察腹主动脉和心肌形态学变化.电镜观察心脏超微结构变化.紫外分光法检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶、超氧化物岐化酶的活性和丙二醛的含量,电化学免疫发光法检测肌钙蛋白水平.结果 动脉粥样硬化组乳酸脱氢酶和肌酸激酶活性、丙二醛含量和肌钙蛋白水平、细胞凋亡指数以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均高于对照组,而超氧化物岐化酶活性则低于对照组,Bcl-2表达低于对照组,心肌细胞超微结构损伤严重.结论 高脂血症和动脉粥样硬化可引起大鼠心肌CaSR的表达增加和细胞凋亡,其机制与心肌缺血所致的氧化应激有关.
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钙敏感受体在创伤性颅脑损伤大鼠神经元凋亡中的作用
目的 探讨钙敏感受体(CaSR)在创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠神经元凋亡中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,按随机数字表方法随机分为对照组、TBI组、抑制剂组,每组18只,每组再分为损伤后6、24、72 h3个亚组,每个亚组6只大鼠.TBI组和抑制剂组采用改良自由落体硬脑膜撞击法建立TBI模型,抑制剂组在模型建立前连续2d尾静脉注射CaSR阻滞剂NPS2390(1次/d,每次10 μmol/kg),对照组只开骨窗不予打击.采用改良神经行为学评分(mNSS)评估各组大鼠的神经行为,实时定量PCR法检测损伤脑组织CaSR、Caspase-3 mRNA的表达,Westem blot法检测CaSR、Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测皮质神经元的凋亡.结果 建模后6、24、72 h,(1)神经行为学评分显示,TBI组与对照组和抑制剂组比较,各时间点mNSS评分均增高,差异均有统计学意义(均P＜0.01),而抑制剂组各时间点评分均高于对照组(均P＜0.01).(2)TBI组和抑制剂组不同时间点CaSR、Caspase-3的mRNA和其蛋白的表达,均为24 h达高峰(均P＜0.01).与对照组和抑制剂组比较,TBI组各时间点CaSR mRNA及其蛋白的表达均增高(均P＜0.01),Caspase-3的蛋白表达仅在24 h高于对照组和抑制剂组(P＜0.05).(3)TUNEL法检测结果显示,TBI模型制作后24 h凋亡细胞达到峰值.各时间点TBI组比对照组和抑制剂组神经元凋亡细胞指数均增高(均P＜0.01),而抑制剂组与对照组比较,各时间点凋亡细胞指数仍高(均P＜0.01).(4)CaSR、Caspase-3蛋白的表达均与细胞凋亡指数存在正相关(r =0.300,P ＜0.05;r =0.371,P＜0.01),CaSR蛋白的表达与Caspase-3蛋白的表达存在正相关(r=0.434,P＜0.01).结论 大鼠TBI后,CaSR在抑制神经元凋亡中起着重要的作用.
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钙敏感受体在缺氧诱导气道黏液高分泌中的作用
目的 探讨钙敏感受体(CaSR)在缺氧诱导的气道黏液高分泌中的作用.方法 通过缺氧培养箱(94％ N2、1％ O2、5％ CO2、37℃)培养人气道上皮细胞HBE16的方法复制细胞缺氧模型.转染CaSR的小干扰RNA (siRNA)及预先给予CaSR特异性激动剂CaCl2、磷脂酶C信号通路不同的抑制剂:Gαq/11蛋白特异性抑制剂(YM-254890),磷脂酶C特异性抑制剂(U73122),三磷酸肌醇受体(IP3R)特异性抑制剂(2-APB)及细胞内Ca2+螯合剂(BAPTA-AM)后,各组细胞再施以缺氧处理.采用反转录-PCR检测黏蛋白(MUC)5AC mRNA的转录水平,Western印迹法检测CaSR蛋白的表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测MUC5AC蛋白的相对含量,共聚焦显微镜观察细胞内Ca2+浓度的变化.结果 缺氧组CaSR蛋白相对表达水平(0.423 ±0.028)显著高于对照组(0.185 ±0.036)(t=12.75,P＜0.001);细胞内Ca2+浓度、MUC5AC蛋白相对含量及MUC5AC mRNA相对表达水平[(154.2±11.4) nmol/L、(0.624±0.063) μg/L、0.736±0.045]也显著高于对照组[(67.5±2.8)nmol/L、(0.257 ±0.051)tμg/L、0.321±0.034](t=18.04、11.06、18.05,均JP＜0.001).CaCl2能上调缺氧引起的上述作用,转染CaSR siRNA能够下调缺氧引起的上述效应(均P＜0.001).预先给予YM-254890、U73122、2-APB、BAPTA-AM处理细胞,细胞内Ca2+浓度、MUC5AC蛋白相对含量及MUC5AC mRNA相对表达水平均显著低于单纯缺氧组(均P＜0.05).结论 CaSR可通过Gαq/11/磷脂酶C/三磷酸肌醇/细胞内Ca2+信号通路参与缺氧诱导的气道黏液高分泌.
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MEK1/ERK1,2通路在缺氧活化钙敏感受体介导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用
目的 探讨钙敏感受体在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PAMSCs)增殖中的信号转导途径及其作用.方法 Ⅱ型胶原酶消化法提取、培养大鼠PAMSCs.通过缺氧培养箱内(93％N2,2％02,5％ CO2)培养24 h的方法复制细胞缺氧模型.应用Western印迹技术分析不同处理情况下增殖细胞核抗原(PCNA)及磷酸化的细胞外调解蛋白激酶1,2(p-ERK1,2)蛋白在PAMSCs的相对表达量；采用流式细胞技术检测不同处理因素对细胞增殖周期及增殖指数的影响,应用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法分析不同处理因素对细胞DNA合成的影响.结果 缺氧引起PAMSCs的PCNA(0.528±0.028)及p-ERK1,2(1.12±0.05、0.91±0.06)表达水平上调,均显著高于对照组的0.243±0.025及0.47±0.03、0.40±0.03(均P＜0.05),BrdU掺入量(143.3±4.2)和细胞增殖指数(12.5±0.9)也显著高于对照组的(100.0±5.4和7.5±1.2)(均P＜0.05)；钙敏感受体激动剂GdCl3能够放大缺氧的上述作用(0.770±0.039,1.50±0.06,1.61 ±0.05,187.4 ±3.9,19.8±0.6)(与对缺氧组比较,均P ＜0.05),但此效应可以被ERK1,2通路阻断剂PD98059抑制(0.441±0.020,0.71±0.07,0.72±0.06,115.5±4.0,9.3±1.1)(与缺氧+GdCl3组比较,均P＜0.05).结论 CaSR通过ERK1,2信号通路参与缺氧诱导的大鼠PAMSCs增殖.
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钙敏感受体及紧密连接蛋白-14在草酸钙结石大鼠肾组织中的表达及意义
目的：初步探讨钙敏感受体（CaSR）和紧密连接蛋白（Claudin）-14在肾草酸钙结石大鼠肾组织中的表达及意义。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组和结石组各15只，采用1%乙二醇和2%氯化铵每日2 mL灌胃诱导制作大鼠肾草酸钙结石模型。免疫组织化学检测CaSR蛋白表达；RT-PCR检测Claudin-14 mRNA表达；West-ern-Blotting分别检测CaSR和Claudin-14蛋白表达；全自动生化分析仪检测2组大鼠肾功能、血及尿生化指标。结果光镜下结石组有大量结石结晶形成，血清肌肝（Cr）、尿素氮（BUN）、24 h尿钙及尿量较对照组升高（P＜0.01），2组间血钙、尿pH差异无统计学意义。结石组Claudin-14 mRNA及CaSR蛋白表达较对照组升高（P＜0.01），Claudin-14蛋白在结石组大鼠肾组织中呈特异性高表达，对照组未检测到Claudin-14蛋白表达；结石组大鼠肾组织中CaSR和Claudin-14蛋白表达呈正相关，同时，CaSR、Claudin-14蛋白表达与24 h尿钙排泄量也呈正相关。结论 CaSR和Claudin-14表达增高可通过增加尿钙排泄量，进而参与结石的形成。
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西那卡塞对终末期肾病患者继发性甲状旁腺功能亢进影响的Meta分析
目的：评价西那卡塞治疗终末期肾病患者继发性甲状旁腺功能亢进的有效性和安全性。方法纳入拟钙剂治疗终末期肾病患者继发性甲状旁腺功能亢进的随机对照研究。计算机检索MEDLINE（1966.1—2014.9）、OVID（1963.1—2014.9）、中文万方数据库（1996.1—2014.9）、CNKI（1979.1—2014.9）、Cochrane图书馆临床对照试验资料库。手工检索已发表或未发表的相关文献，包括会议摘要等。由2名评价员独立对纳入的文献进行质量评价和数据提取，用RevMan5.2软件进行Meta分析。结果共纳入19项随机对照试验，共7702例患者。Meta分析结果显示，西那卡塞与传统治疗方法相比，可以显著降低甲状旁腺素（WMD=-301.54μg/L，95%CI：-344.38～-258.7μg/L， P＜0.05），降低血钙（WMD=-8.3 mg/L，95%CI：-9.1～-7.4 mg/L，P＜0.05），降低血磷（WMD=-3.4 mg/L，95%CI：-4.6～-2.3 mg/L，P＜0.05）。两组总体不良反应发生率相近（RR=1.03，95%CI：0.98～1.09，P＞0.05）。西那卡塞组主要不良反应包括恶心（RR=2.05，95%CI：1.53～2.75，P＜0.05），呕吐（RR=2.00，95%CI：1.78～2.23，P＜0.05），腹泻（RR=1.15，95%CI：1.03～1.30，P＜0.05），以及无症状的低钙血症（RR=7.60，95%CI：5.61～10.30，P＜0.05），但均为短暂且不严重的不良反应。2组病死率相近（RR=0.97，95%CI：0.89～1.05，P＞0.05）。结论西那卡塞抑制透析患者继发性甲状旁腺功能亢进，降低血钙和血磷，不增加病死率，但增加恶心、呕吐、腹泻和低钙血症的风险。
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七氟醚对高位脊髓损伤大鼠心肌钙敏感受体表达的影响
目的 评价七氟醚对高位脊髓损伤大鼠心肌钙敏感受体(CaSR)表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠30只,体重250～ 300 g,采用随机数字表法分为3组:假手术组(S组,n=6)、高位脊髓损伤组(SCI组,n=12)和七氟醚组(Sev组,n=12).采用改良Allens法撞击脊髓制备高位脊髓损伤致大鼠心肌损伤模型.SCI组撞击后30 min持续吸入2 L/min纯氧30 min,Sev组吸入2％七氟醚30 min.于撞击后12和24 h(T12)时随机取6只大鼠,采集腹主动脉血样,测定血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度,随后处死大鼠,取心肌内壁组织,分别以实时荧光定量PCR法和Western blot法检测心肌CaSR及其mRNA的表达水平,透射电镜下观察心肌细胞超微结构.结果 与S组比较,SCI组和Sev组T12时血清cTnI浓度和心肌CaSR及其mRNA表达水平升高(P＜0.05);与SCI组比较,Sev组T12时血清cTnI浓度和心肌CaSR及其mRNA表达水平降低(P＜0.05).Sev组心肌细胞损伤程度较SCI组明显减轻.结论 七氟醚通过抑制CaSR表达减轻脊髓高位损伤大鼠心肌损伤.
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心肌钙敏感受体在高位脊髓损伤大鼠心肌损伤中的作用
目的 探讨心肌钙敏感受体(CasR)在高位脊髓损伤大鼠心肌损伤中的作用.方法 健康雄性SD大鼠18只,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为2组:假手术组(S组,n＝6)和高位脊髓损伤组(SCI组,n＝12).采用砝码(10 g)从5 cm高处沿中空玻璃管垂直自由落下撞击C7脊髓的方法制备高位脊髓损伤模型.SCI组于高位脊髓损伤后12和24h(T1,2)时,S组于T1时取血样,测定血清肌酸激酶(CK)和CK-MB活性,取心肌组织,在透射电镜下观察心肌超微结构,分别采用荧光定量PCR法和Western blot法检测心肌CaSR mRNA及其蛋白的表达水平.结果 与S组比较,SCI组血清CK和CK-MB活性升高,心肌CaSR mRNA及其蛋白表达上调(P<0.05)；与T1时比较,SCI组T2时血清CK活性升高,CK-MB活性降低,心肌CaSR mRNA表达上调(P<0.05),CaSR蛋白表达差异则无统计学意义(P＞0.05).SCI组T1,2时心肌超微结构呈现不同程度的损伤改变.结论 大鼠高位脊髓损伤后心肌CaSR表达上调,该变化可能是高位脊髓损伤后心肌损伤的机制之一.
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钙敏感受体基因Rs1801726位点单核苷酸多态性与氟骨症的关系
目的 探讨钙敏感受体(CaSR)基因Rs1801726位点单核苷酸多态性与氟骨症的关系.方法 2012-2013年,在青海省果洛藏族自治州藏族,内蒙古自治区呼伦贝尔市蒙古族、俄罗斯族,新疆维吾尔自治区阿勒泰地区哈萨克族居住地区选择典型饮茶型氟中毒病区,每个地区选取2个县,并将每个县人口相对集中的3～4个饮茶型氟中毒病区乡确定为调查点.选取经现场X线诊断为氟骨症患者的347人为氟骨症组,非氟骨症患者1 067人为非氟骨症组.藏族、哈萨克族、蒙古族、汉族、俄罗斯族分别为308、290、261、425、130人.对调查对象进行问卷调查,内容包括一般情况、日均砖茶水摄入量;采集5ml静脉血,采用质谱法检测CaSR基因Rs1801726位点单核苷酸多态性;采集砖茶水、尿样进行氟含量测定,砖茶氟和尿氟的测定采用离子选择电极法(WS/T 89-2006);使用便携式数字化X光机(DR)对调查对象的前臂、腰椎及盆骨进行X线拍片,X线氟骨症诊断依据《地方性氟骨症诊断标准》(WS/T 192-2007),并结合流行病学特征及临床表现.结果 经Hardy-Weinberg平衡检验,CaSR基因Rs1801726位点基因型在氟骨症、非氟骨症组及不同民族中均具有代表性(P均＞ 0.05).氟骨症和非氟骨症组CaSR基因Rs1801726位点基因型(CC、CG)经二元Logistic回归分析,差异无统计学意义[粗比值比(OR)值为0.919(0.509～ 1.658)、调整OR值为0.979(0.521～1.840)].不同民族氟骨症和非氟骨症组CaSR基因Rs1801726位点基因型(CC、CG)经二元Logistic回归分析,差异无统计学意义[藏族:粗OR值为1.512(0.210～10.882)、调整OR值为1.700(0.224～12.908);哈萨克族:粗OR值为1.517(0.616～3.734)、调整OR值为1.444(0.568～3.671);蒙古族:粗OR值为1.000(0.202～4.949)、调整OR值为1.036(0.189～ 5.671);汉族:粗OR值为0.369(0.048～2.825)、调整OR值为0.301(0.036～2.551);俄罗斯族:粗OR值为0.892 (0.105～7.582)、调整OR值为0.555(0.060～ 5.098)].结论 本研究未发现CaSR基因Rs1801726位点单核苷酸多态性在饮茶型氟中毒地区不同民族居民中存在差异.
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钙敏感受体对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌细胞肥大的作用
目的 观察钙敏感受体(CaSR)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导心肌细胞肥大中的作用和可能机制.方法 用Ang Ⅱ处理原代新生大鼠心室肌细胞复制心肌肥大细胞模型；用CaSR激动剂氯化钆(GdCl3),GdCl3+蛋白激酶C(PKC)通路阻断剂(Ro318220)处理AngⅡ诱导的肥大心肌细胞分别作为GdCl3、Ro318220组.通过苏木素-伊红染色(HE)法测定细胞直径,考马斯亮蓝蛋白试剂盒测定蛋白含量来评价细胞肥大的情况；利用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i；Western blot法检测CaSR和PKC通路的蛋白表达.结果 ①与对照组(0.1263±0.0443)比较,Ang Ⅱ组(0.1963±0.0375)和GdCl3组(0.2778±0.0564)CaSR蛋白表达明显增加(P均＜ 0.05),且GdCl3组明显高于AngⅡ组(P＜0.05).②与对照组(222.70±22.09)比较,Ang Ⅱ组(392.16±36.85)和GdCl3组(502.60±44.21)心肌细胞内[Ca2+]i显著增加(P均＜0.05)；与Ang Ⅱ组比较,GdCl3组[Ca2+]i显著增加(P＜0.05).③与对照组比较,Ang Ⅱ可诱导心肌细胞肥大,GdCl3可促进Ang Ⅱ的诱导作用,而Ro318220可抑制GdCl3的作用；④与对照组(0.27±0.07、0.69±0.06、0.87±0.04)比较,Ang Ⅱ组PKCα、PKCε和PKCδ蛋白表达明显增加(0.60±0.16、1.02±0.13、1.20±0.18,P均＜0.05),GdCl3组PKCα、PKCε蛋白表达明显增加(0.82±0.16、1.34±0.12,P均＜0.05)；与Ang Ⅱ组比较,GdCl3组PKCα、PKCε蛋白表达明显增加(P均＜ 0.05)；与GdCl3组比较,Ro318220组PKCα、PKCε蛋白表达(0.41±0.10、0.85±0.14)明显减少(P均＜ 0.05).结论 PKC通路参与CaSR激活促进心肌细胞肥大的信号转导.
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原发性甲状旁腺功能亢进症患者钙敏感受体基因多态性的分布及其与血钙水平的相关性
目的 研究原发性甲状旁腺功能亢进症患者中钙敏感受体(CASR)基因多态性的分布,及其与临床特征的相关性.方法 分别采用突变分离PCR(MS-PCR)和错配PCR-RFLP方法检测北京地区202名无亲缘关系的汉族健康妇女及45例原发性甲状旁腺功能亢进症(PHPT)患者CASR基因A986S、G990R基因型,测定血钙、游离钙、磷、甲状旁腺素(PTH)水平.结果 (1)北京地区年轻正常汉族妇女中存在CASR基因A986S、G990R多态性,A986S等位基因A和S的频率分别为0.975和0.025,G990R等位基因R和G的频率分别为0.468和0.532,符合Hardy-Weinberg平衡.(2)PHPT患者:①A986S等位基因A和S的频率分别为0.944和0.056,G990R等位基因R和G的频率分别为0.667和0.333[与健康妇女组比较G990R基因型分布和等位基因频率差异有统计学意义(P＜0.01)].②AA、AS基因型组的血钙分别为(3.03±0.50)、(2.84±0.12)mmol/L(P＜0.05),血游离钙分别为(1.56±0.32)、(1.42±0.07)mmol/L(P＜0.05),血磷分别为(0.71±0.18)、(0.69±0.07)mmol/L(P＞0.05),血PTH升高倍数分别为(13.13±11.26)、(9.25±7.78)倍(P＜0.05).(3)PHPT患者GG+GR与RR基因型组的血钙分别为(3.00±0.46)、(3.04±0.52) mmol/L(P＜0.05),血游离钙分别为(1.50±0.21)、(1.58±0.39) mmol/L(P＜0.05),血磷分别为(0.71±0.16)、(0.71±0.18) mmol/L(P＞0.05),血PTH升高倍数分别为(11.84±10.63)、(13.89±11.51)倍(P＞0.05).结论 PHPT患者中CASR基因G990R多态性的分布频率与健康人群不同,R等位基因频率较高;A986S、G990R多态性与血钙、游离钙水平相关,含S或G等位基因的个体血钙及游离钙水平较低;A986S多态性与血PTH水平相关,含S等位基因的基因型的PTH水平较低.
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钙敏感受体在血管内皮中作用的研究进展
钙敏感受体（ calcium-sensing receptor ， CaSR ）对细胞内Ca2＋浓度（ intracellular Ca 2＋concentration ，［ Ca2＋］ i ）有着重要的调节作用。近年来，CaSR在血管内皮中的作用越来越受到关注，笔者就CaSR的结构、功能、配体的分类、基因突变以及在血管内皮的表达作一综述。
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CaSR在肾结石形成中表达的动态研究
目的:本研究通过乙二醇灌胃构建肾结石模型,动态检测CaSR在结石形成过程中的表达情况,初步探讨CaSR在乙二醇形成结石中的作用.方法:60只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(生理盐水灌胃)和乙二醇组(大鼠1％ 乙二醇饮水和2％ 氯化铵AC 2 ml灌胃2周),每组30只.两组Wistar雄性大鼠灌胃后的1～10周每周处死3只.每周采用病理组织学方法评估每组3只Wistar雄性大鼠成石情况,并通过Western blot方法连续10周检测肾组织CaSR的表达.结果:病理切片显示,从第3周起,在乙二醇组中的肾小管内可见晶体状物质,且大部分存在于肾脏的近、远曲小管中,1～10周对照组Wistar雄性大鼠未见晶体状颗粒.Western blot检测显示CaSR在乙二醇组中持续表达,1～2周和对照组比较无统计学差异,但是3～10周其表达强度逐渐增强且表达强度明显高于对照组,1～10周,CaSR在对照组中虽然也持续表达,但其强度却无明显改变.结论:CaSR表达增强可能在乙二醇形成结石过程中起重要作用.
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钙敏感性受体抑制剂Calhex231对创伤失血性休克大鼠的保护作用
目的 探讨钙敏感性受体(CaSR)抑制剂Calhex231对创伤失血性休克大鼠的保护作用.方法144只大鼠按随机数字表法分为6组:正常组、休克组、乳酸林格液(LR)复苏组、 LR + Calhex231 0.1, 1, 5 复苏组,用于大鼠存活情况(每组16只)和血流动力学检测(每组8只).64只大鼠也按随机数字表法分为4组:正常组、休克组、LR复苏组、LR + Calhex231 1mg/kg复苏组,一半用于器官血流量和肠系膜上动脉血管反应性检测(每组8只),另一半用于检测肠系膜微动脉血管反应性(每组8只).建立创伤失血性休克大鼠模型后,休克组不复苏,LR复苏组输入2倍失血量的LR,LR + Calhex231各组先给予1倍失血量的LR输注,然后把Calhex231加入另外1倍失血量的LR中输注.从复苏开始观察24 h存活情况,输液结束后立即结扎缝合;于休克前、休克末、复苏后1,2 h检测血流动力学指标[平均动脉压(MAP)、左室收缩压(LVSP)、左室压力大上升/下降速度(±dp/dtmax)];复苏后2 h检测重要器官(肝、肾)血流量及血管反应性.结果休克组在模型完成后9 h内全部死亡,LR复苏组的存活情况与休克组比较稍有改善(P＞0.05), LR + Calhex231 1 mg/kg、5 mg/kg复苏组24 h存活率和存活时间明显高于LR复苏组(P ＜0.05).LR + Calhex231各复苏组的血流动力学指标均高于LR复苏组,其中LR + Calhex231 1 mg/kg复苏组的效果为明显(P ＜ 0.01), MAP、LVSP、± dp/dtmax分别恢复到正常水平的64.9％、82.4％ 、89.8％ 、77.8％;同时,LR + Calhex231 1 mg/kg复苏组器官(肝、肾)血流量明显增加(P ＜0.01),肝脏和肾脏的血流量分别从休克的57.2％、41.0％升高到108.7％、95.1％;LR + Calhex2311 mg/kg复苏组肠系膜上动脉及其微动脉血管的收缩反应性也明显提高(P＜0.01). 结论对于创伤失血性休克大鼠,钙敏感性受体抑制剂Calhex231可提高血管反应性,改善血流动力学和重要器官血流量,起到保护心血管功能、降低创伤失血性休克后死亡率的作用.
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高位脊髓损伤后磷酸肌酸钠对心肌的保护作用及对钙敏感受体表达的影响
目的 探讨磷酸肌酸钠对高位脊髓损伤后心肌损伤保护作用以及对心肌钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)表达的影响. 方法 健康雄性SD大鼠30只,体重250 ～300 g.按随机数字表法分为:假手术组、脊髓损伤12 h组(损伤Ⅰ组)、脊髓损伤24 h组(损伤Ⅱ组)、脊髓损伤12 h腹腔一次性注射磷酸肌酸钠(治疗Ⅰ组)、脊髓损伤24 h腹腔一次性注射磷酸肌酸钠(治疗Ⅱ组),每组6只.采用10 g砝码从5 cm高处沿中空玻璃管垂直自由落下撞击C7脊髓制备高位脊髓损伤模型.测定血清肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量;取大鼠心肌组织,透射电镜下观察心肌细胞超微结构;荧光定量PCR检测CaSR mRNA;Western blot检测心肌组织CaSR蛋白. 结果 损伤Ⅰ、Ⅱ组cTnⅠ含量分别为(0.031 ±0.002) U/L、(0.026±0.001)U/L,治疗Ⅰ、Ⅱ组分别为(0.023±0.002)U/L、(0.018±0.006) U/L,均高于假手术组(0.004±0.002) U/L(P ＜0.05);治疗组均低于相同时相点损伤组(P＜0.05).损伤Ⅰ、Ⅱ组CaSR mRNA表达分别为(0.991 ±0.146)×10-3、(1.245±0.204)×10-3,治疗Ⅰ、Ⅱ组分别为(0.880±0.096)×10-3、(0.782±0.138)×10-3,均高于假手术组(0.437±0.065) ×10-3(p＜0.05);治疗组均低于相同时相点损伤组(P＜0.05).损伤Ⅰ、Ⅱ组CaSR蛋白表达分别为(0.627 ±0.066)×10-3、(0.809 ±0.154)×10-3,治疗Ⅰ、Ⅱ组分别为(0.505±0.176)×10-3、(0.524±0.138)×10-3,均高于假手术组(0.331 ±0.102)×10-3 (P ＜0.05);治疗组均低于相同时相点损伤组(P＜0.05).电镜结果显示,假手术组心肌超微结构正常,损伤组和治疗组各时相点均出现心肌损伤的超微结构改变,但治疗组心肌细胞损伤明显比相同时相点损伤组轻. 结论 磷酸肌酸钠可明显抑制高位脊髓损伤血清cTnⅠ含量升高,减轻心肌组织超微结构的损伤性改变以及减少心肌细胞CaSR的表达.
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钙敏感受体对低氧诱导的持续性肺动脉高压小鼠肺动脉平滑肌细胞内钙离子浓度的影响
目的 探讨低氧诱导的持续性肺动脉高压(persistent pulmonary hypertension,PPH)新生小鼠经钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)干预处理后,肺动脉平滑肌细胞中钙离子浓度的变化.方法 选择新生C57 BL/6小鼠96只,随机分为对照组、PPH组、PPH+激动剂组、PPH+抑制剂组各24只.采用12％的氧诱导制备PPH模型,同时分别予以腹腔注射CaSR激动剂(GdCl3)和CaSR抑制剂(NPS2390)干预,造模14 d后,分别对4组小鼠行肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterysmooth muscle cells,PASMCs)培养,应用钙离子指示剂Fluo-3/AM负载细胞,激光共聚焦显微镜下连续检测4组小鼠PASMCs内钙离子荧光强度变化.结果 PPH组肺小血管壁厚度占血管外径百分比和右心室/左心室厚度比值均大于对照组[(27.0％±0.9％)比(21.1％±1.8％),(0.83±0.45)比(0.62±0.22)],差异有统计学意义(P＜0.05),说明PPH小鼠模型构建成功.对照组、PPH组、PPH+激动剂组、PPH+抑制剂组PASMCs内钙离子平均荧光强度分别为122.5±3.0、2 058.8 ±46.3、2 286.6±51.4、1 134.8±8.5,PPH组、PPH+激动剂组、PPH+抑制剂组高于对照组,PPH组高于PPH+抑制剂组,差异有统计学意义(P＜0.05),PPH组与PPH+激动剂组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CaSR可能通过影响PASMCs内钙离子浓度参与低氧诱导新生小鼠PPH的发生与发展.
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钙敏感受体及相关分子在新生大鼠持续肺动脉高压发病中的作用
目的 探讨钙敏感受体(CaSR)及相关分子在持续肺动脉高压(PPH)新生大鼠肺组织中的表达及在PPH发病机制中的作用.方法 选取6只Sprague-Dawley(SD)孕鼠,孕第19天时随机分为PPH组和对照组,每组3只.PPH组孕鼠置于12％氧浓度的缺氧箱中并腹腔内注射吲哚美辛0.5 mg/kg,2次/天,连续3天,建立胎鼠肺动脉高压模型;对照组孕鼠暴露在空气中并腹腔内注射等量生理盐水.两组孕鼠均于孕第22天行剖宫产,对照组、PPH组分别获取新生大鼠26、28只,两组各随机抽取15只仔鼠用于后续实验.采用RT-PCR技术检测新生大鼠肺组织CaSRmRNA及Ⅱ型11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD2) mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测新生大鼠肺组织CaSR蛋白和一氧化氮(NO)含量.结果 与对照组比较,PPH组新生大鼠肺组织中CaSRmRNA[(0.592±0.052)比(0.408±0.017)]及蛋白表达[(0.717±0.027)比(0.445±0.011)]升高,NO含量[(1.50±0.20) μmol/g比(0.37±0.16)μmol/g]升高,11β-HSD2 mRNA[(0.413±0.073)比(0.978±0.079)]表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CaSR及相关分子在新生大鼠PPH发病中可能发挥重要作用.
