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NADPH氧化酶与Rho/Rho-激酶激活在外膜介导的血管重塑中的作用
目的探讨NADPH 氧化酶与Rho/Rho-激酶在外膜介导的血管重塑中的作用.方法在体去除兔颈动脉外膜,于术后即刻、1周及2周取出颈动脉.用图像分析系统测定内膜及中层面积;应用多道生理仪测血管反应性;原位杂交及RT-PCR检测mRNA表达.结果 (1)血管外膜去除后内膜增生,2周时内膜增生较1周时更为明显.对照侧无内膜增生.(2)与对照侧比较,去外膜侧血管在术后即刻、1周对去甲肾上腺素的收缩反应减弱(P<0.05).(3)与对照侧比较,去外膜侧NADPH 氧化酶P22Phox mRNA表达在1周时增高(P<0.05).(4)与对照侧比较,去外膜侧Rho-激酶 mRNA 表达在2周时增高(P<0.05).结论外膜去除后血管内膜增生,血管舒缩功能改变,其发生机制与NADPH 氧化酶及Rho-激酶激活有关.
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夹竹桃麻素预处理对急性脑梗死脑组织损伤影响的初步研究
目的：初步研究夹竹桃麻素预处理对急性脑梗死脑组织的损伤影响。方法45只健康雄性小鼠作为研究对象,随机分成正常组、对照组、研究 A 组、研究 B 组、研究 C 组五组,每组9只。分别予以不同处理,比较各组脑梗死面积百分比,并进行免疫印迹分析。结果研究 A、B、C 组的脑梗死面积百分比分别为14.01%、19.79%、10.18%,对照组的脑梗死面积百分比为19.80%,与对照组的脑梗死面积百分比比较,研究 A、C 组的脑梗死面积百分比下降显著,差异有统计学意义(P<0.05)；免疫印迹分析中正常组小鼠大脑中动脉栓塞后,于0.5、1.5 h 时, gp91phox, p67phox, p47phox 蛋白表达上调、4 h 时蛋白表达下调。经夹竹桃麻素预处理后,仅研究 C 组的 p67phox 蛋白表达显著下调。结论夹竹桃麻素主要是通过抗氧化应激以抑制缺血区及再灌注区氧化自由基释放,并稳定血脑屏障,从而缩小脑梗死面积,延缓脑梗死损伤发展。
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抑制NADPH氧化酶对脑缺血/再灌注损伤的保护作用
目的：研究抑制 NADPH 氧化酶对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法利用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞( middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,于缺血前15 min尾静脉注射apocynin 2．5 mg ·kg-1,脑缺血2 h恢复血液再灌注24 h后,对大鼠进行神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织病理形态学以及Cx36、PKC、Bax、Bcl-2蛋白表达变化的检测。结果使用NADPH氧化酶抑制剂apocynin,能明显降低局灶性脑缺血/再灌注损伤大鼠神经行为学评分和脑梗死体积百分率,减轻脑组织病理形态学损伤,增加大鼠Cx36、PKC蛋白的表达,降低Bax与Bcl-2的比值。在使用apocynin的基础上加用PKC激酶抑制剂,与单用 apocynin组相比,其上述保护作用则减弱。结论抑制NADPH氧化酶能够减轻脑缺血/再灌注损伤,并且能增高Cx36、PKC的蛋白表达,降低Bax与Bcl-2的比值。
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二烯丙基二硫活化NADPH氧化酶诱导人白血病K562细胞凋亡
目的：研究DADS诱导人白血病K562细胞凋亡的分子机制。方法应用MTT法检测细胞的活性；流式细胞术检测细胞内的活性氧( reactive oxygen species, ROS)水平以及凋亡细胞百分率；Real-time PCR 检测NADPH氧化酶各亚基mRNA水平；免疫共沉淀检测蛋白 Rac2与蛋白 p67phox的结合；Westernblot检测Rac2蛋白的表达。结果 DADS能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性；6 mg ·L-1 DADS 作用人白血病K562细胞6 h后,NADPH氧化酶复合物的6个亚基mRNA水平都明显上调；5.0、10.0 mg ·L-1 DADS作用人白血病K562细胞24 h后蛋白 Rac2的表达水平明显上调；免疫共沉淀结果显示, DADS 诱导的K562细胞凋亡过程中有Rac2与p67phox结合；流式细胞术检测凋亡细胞百分率结果显示, PMA能明显提高DADS诱导K562细胞凋亡的作用,而DPI能抑制DADS诱导K562细胞凋亡。 PMA能提高DADS诱导K562细胞活性氧的水平,而DPI明显抑制了活性氧的产生。结论 NADPH氧化酶的活化是DADS诱导K562细胞凋亡过程中活性氧的主要来源,DADS通过活化NADPH氧化酶诱导K562细胞凋亡。
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染料木素拮抗对氧磷诱导的大鼠胸主动脉组织 p22phox 表达上调
目的：探讨染料木素是否通过下调 p22phox、Nox4的表达，抑制活性氧的生成而拮抗对氧磷损伤的血管内皮功能。方法取♂ SD 大鼠胸主动脉。①溶媒对照组：用0.1％的二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）处理大鼠胸主动脉30 min；②染料木素（genistein，GST）处理组：GST （100μmol · L －1）处理大鼠胸主动脉30 min；③对氧磷（paraoxon，PO）处理组：PO（40.5μmol·L －1）处理大鼠胸主动脉30 min；④ PO ＋GST 处理组：PO（40.5μmol·L －1）＋GST（100μmol·L －1）处理大鼠胸主动脉30 min。RT-PCR法检测各组 p22phox、Nox4 mRNA 表达的变化；Western blot观察 p22phox 和 Nox4蛋白表达的变化。结果较之溶媒对照组，PO 处理可使 p22phox、Nox4 mRNA 及蛋白表达明显增加；GST 处理则使 p22phox、Nox4 mRNA 及蛋白表达明显减少；PO ＋GST 共同处理组，Nox4 mRNA 及蛋白表达增加。与PO 单独处理组比较，PO ＋GST 共同处理组 p22phox mRNA及蛋白表达明显减少。结论对氧磷可通过上调血管组织p22phox、Nox4 mRNA 和蛋白的表达，导致血管内皮氧化损伤；染料木素可下调二者的表达，保护血管内皮。
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NADPH氧化酶/ROS信号通路在维生素E改善氧化性低密度脂蛋白致人脐静脉内皮细胞氧化损伤中的作用
目的：建立氧化性低密度脂蛋白（oxLDL）诱导损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤模型，研究维生素 E 对 oxLDL 诱导的 HUVEC 损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养 HUVEC，以不同浓度维生素 E （50~150μmol/ L）预孵育细胞24 h，再加入200μg/ ml 的 oxLDL 继续培养24 h；采用 CCK-8检测细胞生存率， DCFH-DA 检测细胞内活性氧（ROS）水平，RT-PCR 检测 NADPH 氧化酶亚基（p47phox、p67phox、NOX4）mRNA 表达水平。结果成功建立了 oxLDL 诱导 HUVEC 损伤模型；与正常组比较，oxLDL 组的细胞生存率显著降低，ROS 生成大量增加，差异有统计学意义（P ﹤0.01）；与 oxLDL 组比较，不同浓度维生素 E 组的细胞生存率显著升高，ROS生成大量减少，差异有统计学意义（P ﹤0.05）；oxLDL 组的 p47phox、p67phox、NOX4 mRNA 表达量分别是正常组的2.15±0.19、2.48±0.20、3.01±0.24倍（P ﹤0.01），而经不同浓度维生素 E 预孵育可剂量依赖性的显著降低oxLDL诱导的 p47phox、p67phox、NOX4 mRNA 表达上调，差异有统计学意义（P ﹤0.05）。结论 oxLDL 可引起 HUVEC 细胞生存率降低，NADPH 氧化酶亚基表达上调及 ROS 的大量产生；50~150μmol/ L 维生素 E 可剂量依赖性地改善oxLDL 对内皮细胞的损伤，通过抑制 NADPH 氧化酶/ ROS 信号通路的活化来减少 HUVEC 损伤，从而起到抗动脉粥样硬化的作用，为维生素 E 的抗动脉粥样硬化作用提供了实验依据。
