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缺血再灌注对小鼠肝细胞自噬与干扰素调节因子1表达的影响
目的 探讨缺血再灌注对小鼠肝细胞自噬与干扰素调节因子1(IRF-1)表达的影响,阐述其潜在的分子机制.方法 建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型,检测再灌注2、6、12和24 h后各组与假手术组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的变化,同时在光镜下观察肝组织病理学改变,透射电镜下观察肝细胞内自噬体变化.分别利用免疫荧光及TUNEL法检测肝细胞LC3表达及细胞凋亡情况,RT-PCR检测肝组织IRF-1 mRNA表达,蛋白印迹检测IRF-1、Beclin1和LC3蛋白水平.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组在各时间点ALT和AST水平均有所增高,于再灌注12 h均达到高峰;病理学检查可见肝细胞肿胀、肝窦变窄、嗜中性粒细胞浸润和灶状坏死等变化.再灌注12h时肝细胞内自噬体明显增多,同时凋亡细胞显著增加;肝组织中IRF-1、Beclin1和LC3的表达增加.结论 小鼠肝缺血再灌注可激活自噬导致肝细胞损伤,其可能与促进IRF-1表达有关.
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呼吸道合胞病毒感染大鼠肺干扰素调节因子1表达与Th1/Th2失衡的相关性研究
目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染时干扰素调节因子1(IRF-1)对辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)类细胞因子分泌的调控作用.方法 随机将16只SD大鼠分为对照组、RSV感染组(RSV滴鼻法建立RSV感染模型),每组8只.在第8周测定气道反应性;取肺组织苏木素伊红(HE)染色观察病理改变;通过免疫组织化学染色和蛋白质印迹(Western-blot)法检测IRF-1在肺组织中的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织匀浆白细胞介素4(IL-4)和干扰素Ⅱ型(IFN-γ)水平.结果 RSV感染组大鼠肺部病理学切片呈现典型的过敏性炎症表现,而且RSV感染组气道阻力增高程度明显高于对照组大鼠.免疫组织化学染色RSV感染组灰度值较对照组灰度值20 838±9 931 vs 14 514±6 553,较对照组显著减低(P<0.01).蛋白质印迹法检测肺组织中IRF-1的表达RSV感染组积分先密度值也较对照组积分光密度值0.428±0.02 vs 0.756±0.04显著减低(P<0.01).RSV感染组IL-4蛋白水平较对照组明显增强(P<0.01),而IFN-γ蛋白水平明显减低(P<0.01).肺IRF-1水平与IFN-γ水平呈正相关(P<0.01),与IL-4水平呈负相关(P<0.01),与IFN-/IL-4比值呈正相关(P<0.01).结论 RSV感染可以下调IRF-1在肺组织中表达,并可能与Th1/Th2的免疫失衡有关.
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神经生长因子诱导PC12细胞一氧化氮合酶和P物质表达及干扰素调节因子1的作用
目的:通过研究神经生长因子(NGF)诱导后的PCI2细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和P物质(SP)的表达及干扰素(IFN)调节因子1(IRF-1)的调控作用,阐明呼吸道神经源性炎症的机制.方法:采用慢病毒绿色荧光蛋白GFP-IRF-1-vshRNA转染PC12细胞,然后给予NGF刺激,采用实时荧光定量PCR法检测经不同处理后各组(空白对照组、NGF刺激组、NGF+IFN-γ刺激组、阴性对照rshRNA干扰+NGF刺激组、IRF-1-mhRNA干扰+NGF刺激组)细胞内SP mRNA表达的水平:蛋白质印迹(Western blot)方法观察iNOS在不同处理组细胞中的表达情况.结果:与对照组相比,经NGF刺激后的各组细胞内SP及iNOS表达水平明显升高(P<0.05);与单纯NGF刺激组相比,NGF+IFN-γ刺激组细胞内SP及iNOS表达水平无明显变化:经慢病毒IRF-1 vshRNA阻断IRF-1表达后.细胞内SP及iNOS的表达水平明显降低(P<0.05).结论:NGF通过IRF-1调控神经元细胞内SP及iNOS的合成参与呼吸道神经源性炎症.IRF-1可能成为呼吸道神经源性炎症的治疗靶点.
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瘦素对肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞干扰素调节因子1表达的影响
目的 观察体外培养肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)表达瘦素受体(OB-R)及干扰素调节因子1(IRF-1)情况,及给予瘦素干预后IRF-1的变化.方法 60只雄性SD大鼠随机分为4组,即正常体质量对照组(A组)、正常体质量哮喘组(B组)、肥胖对照组(C组)、肥胖哮喘组(D组),肥胖及哮喘模型建立后取各组大鼠气道,体外培养ASMC,逆转录酶PCR(RT-PCR)测各组OB-R mRNA的表达,然后分别用生理盐水(NS)和瘦素干预A、B、C、D组细胞48 h,Western blot法检测各组IRF-1蛋白表达.结果 RT-PCR电泳结果示在500 bp处有明显条带,其大小与OB-R目的基因片段大小相符,说明AMSC上有OB-R表达.Western blot检测显示,细胞IRF-1蛋白表达量在NS干预的情况下,B、C组均较A组细胞IRF-1蛋白表达量增加(P＜0.05),但均比D组减弱(P＜0.05),而B、C两组蛋白表达量之间无明显差异(P＞0.05).在瘦素干预的情况下,各组细胞IRF-1蛋白表达量均分别较相应的NS干预组的蛋白表达量增加(P＜0.01),且B、C组细胞GR β蛋白表达量均较A组增加(P＜0.05),较D组减弱(P＜0.05),而B、C组蛋白表达量之间仍无明显差异(P＞0.05).结论 瘦素通过OB-R促进IRF-1在肥胖哮喘大鼠ASMC中的表达可能是导致肥胖哮喘发生激素抵抗的重要原因.
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干扰素调节因子1在呼吸道合胞病毒感染后气道神经源性炎症的调控作用
目的 通过研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染后的SD大鼠气道反应性和神经源性炎症的变化及干扰素调节因子1(IRF-1)的调控作用,探讨IRF-1在调控RSV感染后调控气道神经源性炎症的作用地位.方法 对4组SD大鼠(空白对照组、RSV感染组、IRF-1干扰组和IRF-1基因沉寂组)相应处理后进行气道反应性测定,取其左肺行HE染色,右肺行免疫组化检测P物质(SP)及降钙素基因相关肽(CGRP).结果 ①RSV感染组与空白对照组比较:气道反应性明显增高(P＜0.05),炎性细胞浸润明显增多,SP和CGRP的表达明显增多；②IRF-1干扰组与RSV感染组比较:气道反应性无明显差别(P＞0.05),炎性细胞浸润及SP、CGRP的表达无明显差别；③IRF-1基因沉寂组与RSV感染组相比,气道反应性明显降低(P＜0.05),炎性细胞浸润及SP、CGRP的表达明显减少.结论 IRF-1在RSV感染引起气道高反应性的过程中可能是通过参与调节神经源性炎症介质的表达来参与调控,IRF-1有望成为哮喘气道神经源性炎症一个新的治疗靶点.
