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阴蒂海绵体中磷酸二酯酶5表达及淫羊藿甙对cGMP浓度的影响
目的探讨阴蒂海绵体中磷酸二酯酶5表达及淫羊藿甙对cGMP浓度的影响. 方法通过反转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测兔阴蒂海绵体中PDE5 mRNA的表达;125I放射免疫法测定不同浓度淫羊藿甙对阴蒂海绵体内PDE5酶底物cGMP浓度的影响,西地那非作为阳性对照,分别计算EC50. 结果阴蒂海绵体组织中有PDE5的表达,淫羊藿甙可明显提高阴蒂海绵体内的cGMP浓度,具有显著的浓度依赖性. 结论淫羊藿甙对阴蒂海绵体平滑肌细胞内cGMP水平的影响可能是通过PDE5发挥作用,与NO-cGMP信号通路有关.
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磷酸二酯酶5抑制剂的发现和治疗用途
磷酸二酯酶5抑制剂可选择性阻断cGMP的酶水解,终引起血管平滑肌的松弛.这一作用靶标目前主要用于人类勃起功能障碍的治疗.本文综述了其作用机制,磷酸二酯酶的生物学与生物化学特点,新的磷酸二酯酶5抑制剂的构效关系以及其他药理学活性.
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抑制磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体对缺氧缺糖乳鼠心肌细胞的保护作用
目的 观察磷酸二酯酶5(PDE5) shRNA对缺氧缺糖条件下乳鼠心肌细胞的保护作用.方法 培养新生C57BL/6J小鼠心肌细胞,通过缺氧缺糖建立小鼠心肌细胞缺氧缺糖损伤模型.随机分2组:实验组(shPDE5)通过构建PDE5 shRNA,将PDE5 shRNA转染心肌细胞;对照组(Null):将普通腺病毒载体转染心肌细胞.用原位末端标记分析(TUNEL)检测2组细胞凋亡情况;免疫蛋白印迹检测PDE5蛋白的表达;用酶联免疫吸附法测定各组心肌细胞cGMP和PKG的水平.结果 与对照组比较,实验组PDE5表达明显下降,cGMP和PKG的活性明显上调(P<0.05);实验组细胞凋亡数明显减少(P<0.05).结论 PDE5 shRNA可明显拮抗缺氧缺糖诱导的心肌细胞凋亡,可能与PDE5 shRNA持续抑制心肌细胞PDE5基因表达、显著上调cGMP和PKG活性有关.
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磷酸二酯酶5抑制剂研究进展
男性勃起功能障碍(ED),是临床上较为常见的一种性功能障碍疾病.磷酸二酯酶5(PDE5)是存在于平滑肌、血小板等组织中一种有特定结构和功能的磷酸二酯酶亚型.口服PDE5抑制剂使环磷酸鸟苷酸水平升高,促使血管平滑肌扩张,能达到治疗男性ED的作用.目前除了西地那非以外,还有一些结构不同的化合物具有PED5抑制作用,他们有可能成为更具疗效及选择性的ED治疗药物.
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磷酸二酯酶5抑制剂改善阿尔茨海默病认知功能的研究进展
近年研究发现磷酸二酯酶5(Phosphodiesterase-5,PDE5)在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发生发展过程的作用倍受关注,其抑制剂可明显增强动物和人的认知功能,其机制与干预AD发病过程如改善血管功能紊乱、促进神经递质释放、促进神经再生及抗凋亡等作用有关.因此,PDE5抑制剂可能为AD的治疗提供新方向.本文中,笔者结合国内外相关研究进展,重点阐述PDE5抑制剂对AD的保护作用及其相关作用机制.
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治疗勃起功能障碍新药他达那非
他达那非是一种口服的新型磷酸二酯酶5抑制剂,主要治疗男性勃起功能障碍.本品选择性强,不良反应少,作用持续时间长,且药动学参数受酒精和食物影响较小.现对其药效学、药动学、药物相互作用、临床应用和药物不良反应作一综述.
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玛咖不同提取部位对磷酸二酯酶5抑制作用的谱-效关系研究
目的 阐明玛咖不同提取部位的指纹图谱特征峰所代表的化学成分对磷酸二酯酶5 (PDE5)抑制作用的影响,揭示药效物质基础.方法 采用高效液相法建立玛咖不同提取部位的指纹图谱;采用同位素标记法测试不同提取部位对PDE5的抑制率;采用灰度关联分析法和偏小二乘法分析谱-效关系.结果 建立了玛咖不同提取部位的指纹图谱;指纹图谱中共有色谱峰21个,指认了其中5个成分.谱-效关系表明,玛咖对PDE5抑制作用的药效是多种成分共同作用的结果,脂溶性的玛咖酰胺类生物碱(峰22、23、24)对药效活性贡献较大.酶活性测试验证了3种玛咖酰胺具有较好的PDE5抑制作用.结论 本实验建立的PDE5抑制剂筛选方法,采用液体闪烁计数,灵敏度高,简便易行;同时揭示了玛咖不同提取部位的指纹图谱与PDE5抑制作用具有相关性,玛咖酰胺类生物碱可能为PDE5抑制作用的药效物质基础,这为玛咖的资源利用和质量控制提供了理论依据.
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PDE5shRNA对心肌细胞凋亡的保护作用
目的 探讨抑制磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体PDE5 shRNA对缺氧缺糖条件下乳鼠心肌细胞的保护作用.方法 培养新生C57BL/6J小鼠心肌细胞,通过缺氧缺糖,建立小鼠心肌细胞缺氧缺糖损伤模型,分实验组(shPDE5)和对照组(Null),实验组:通过构建抑制磷酸二酯酶5的短发夹RNA重组腺病毒载体(PDE5 shRNA),将PDE5 shRNA转染心肌细胞,对照组(Null):将没有插入PDE5 shRNA的普通腺病毒载体转染心肌细胞.利用TUNEL法检测各组细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,细胞在缺氧缺糖条件下,实验组细胞凋亡明显减少(P<0.05).结论 PDE5 shRNA可明显拮抗缺氧缺糖诱导的心肌细胞凋亡.
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磷酸二酯酶5抑制剂的研究进展
磷酸二酯酶5 (PDE5)属超家族酶,催化第二信使cGMP转化为GMP.磷酸二酯酶5抑制剂主要用于治疗勃起功能障碍,目前已有多种药物(西地那非、伐地那非等)上市,此外,PDE5抑制剂亦可用于治疗高血压、冠心病和前列腺增生等疾病.本文重点介绍已上市、处于临床试验阶段以及文献报道的PDE5抑制剂,并对其活性及构效关系进行综述.
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磷酸二酯酶5(PDE5)在人增生前列腺移行带中的表达及分布
目的:探讨磷酸二酯酶5在人前列腺移行带组织中的表达与分布.方法:应用免疫组化SP法,选择前列腺增生患者34例,检测PDE5表达及分布.结果:34例标本中PDE5均呈阳性表达.PDE5在前列腺移行带的腺组织上皮普遍呈中等表达,间质部分弱表达.结论:PDE5在人增生前列腺组织中分布,但分布不均,表明不同PDE5可能行使不同的功能.
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PDE5在大鼠脂肪干细胞和阴茎海绵体平滑肌细胞中表达的比较研究
目的：探讨磷酸二酯酶5（Phosphodiesterase 5, PDE5）在大鼠脂肪干细胞（Adipose-Derived Stem Cells，ADSCs）中的表达情况，为PDE5基因siRNA修饰ADSCs移植治疗勃起功能障碍提供理论基础。方法分别采用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测ADSCs和阴茎海绵体平滑肌细胞（Cavernosum Smooth Muscle Cells, CSMCs）中PDE5在mRNA和蛋白水平的表达情况，并采用免疫荧光技术观察PDE5蛋白在ADSCs和CSMCs细胞内的表达与定位。结果 PDE5在ADSCs中表达，且均匀分布于细胞浆内，其表达水平显著高于CSMCs（P＜0.05）。结论 PDE5在大鼠ADSCs内高表达且定位于细胞浆内，为PDE5基因siRNA修饰ADSCs移植治疗勃起功能障碍的可行性研究奠定了良好的基础。
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小檗碱对大鼠阴茎海绵体磷酸二酯酶5mRNA水平的影响
目的:检测大鼠阴茎海绵体中磷酸二酯酶5(PDE5)mRNA的表达,进而探讨小檗碱(berberine,Ber)的分子作用机制.方法:通过逆转录酶链反应(RT-PCR)技术检测大鼠阴茎海绵体中PDE5 mRNA的表达.结果:大鼠阴茎海绵体中有PDE5A1和PDE5A2 mRNA的表达,以PDE5A2为主要的异构酶.与内参照β-肌动蛋白相比,对照组、Ber孵育1和3 h组的PDE5A1及PDE5A2基因mRNA的相对表达量分别为:0.22±0.02,0.41±0.01:0.15±0.01,0.34±0.02;0.10±0.01,0.12±0.01.与对照组相比,PDE5A1、PDE5A2的mRNA表达,在Ber孵育1 h组降低了32%和17%,3 h组降低了55%和71%,其中尤以应用Ber 3 h后PDE5A2的mRNA减少为明显(n=5,P＜0.01).结论:Ber对NO-cGMP信号通路的下游关键酶(PDE5)具有一定的调控作用,尤其是抑制PDE5A2的mRNA表达,为Ber治疗勃起功能障碍的分子机制之一.
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良性前列腺增生/下尿路症状合并勃起功能障碍治疗的新靶点——PDE5
伴有下尿路症状(LUTS)的良性前列腺增生(BPH)是中老年男性常见病和多发病,其发病率随着年龄的增长而显著升高.研究表明,BPH/LUTS和勃起功能障碍(ED)之间密切相关,并对中老年男性的生活质量产生重要影响.磷酸二酯酶5抑制剂(PDE5i)在治疗ED的同时,可改善患者的BPH/LUTS,PDE5有望作为BPH/LUTS合并ED治疗的新靶点.对PDE5的结构、功能以及PDE5i的作用机制进一步探索,可为BPH/LUTS合并ED的临床治疗提供更加有效的策略.
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磷酸二酯酶5抑制剂治疗勃起功能障碍的疗效和安全性比较
磷酸二酯酶5(PDE-5)抑制剂西地那非的问世使男性勃起功能障碍(ED)的治疗手段发生了根本性的改变.1998年以来有100多个国家的2 000多万患者使用了西地那非,患者的死亡率与总体人群的死亡率差异无显著性.西地那非治疗ED平均有效率达80%以上,成为治疗ED的首选手段.随着新的PDE-5抑制剂伐地那非和泰地那非在国外先后进入临床使用,药物治疗ED有了更多的选择.本文通过比较3种PDE-5抑制剂的药效学、药动学及不良反应以评价其疗效和安全性.
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从牛海绵体组织分离纯化磷酸二酯酶5
目的:纯化磷酸二酯酶5(PDE5)用以研究其抑制剂及临床意义.方法:利用快速蛋白液相层析系统,NaCl线性梯度分离PDE5.结果:从牛海绵体组织与牛海绵体血管均得到3个蛋白峰,Western印迹实验证实峰1为PDE5,其余二峰可能为PDE2和PDE3.结论:哺乳类海绵体组织有cGMP特异性PDE5存在,在海绵体血管尤为丰富.采用快速蛋白液相系统成功分离PDE5,方法简便可靠.
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磷酸二酯酶5基因在肾癌组织中表达情况的研究
目的 探讨磷酸二酯酶5 (PDE5)基因在肾癌组织中的表达情况.方法 采用RT-qPCR和Western blot实验检测45例肾癌及其癌旁组织中PDE5基因的表达水平.结果 肾癌PDE5/癌旁PDE5的mRNA阳性表达相对Ct值为(1.65±0.1189),差异有统计学意义(P＜0.01);肾癌PDE5/癌旁PDE5的蛋白阳性表达的相对灰度值为(2.664±0.3419),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PDE5基因在肾癌的发生发展中可能起重要作用.
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慢病毒介导磷酸二酯酶5基因修饰对大鼠脂肪干细胞效能的影响
目的 探讨慢病毒介导的磷酸二酯酶5(PDE5)基因抑制对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)增殖、凋亡及分泌功能的影响及其可能机制. 方法 (1)分离纯化大鼠ADSCs,传代培养及鉴定.构建沉默PDE5基因不同位点的3组PDE5慢病毒表达载体(PDE5 shRNA1、PDE5 shRNA2、PDE5 shRNA3)并设置阴性对照(NC shRNA),采用慢病毒包装系统稳定转染ADSCs,应用RT-PCR检测ADSCs PDE5 mRNA表达,应用Western blotting检测ADSCs PDE5蛋白表达,以筛选出高效的转染细胞株.(2)实验分为4组:正常细胞组、缺血-复氧(I/R)损伤细胞组(正常细胞+I/R损伤)、阴性对照组(NC shRNA-ADSCs+I/R损伤)、PDE5 shRNA-ADSCs+I/R损伤组(PDE5 sh I/R组).采用CCK-8法及Edu法检测各组细胞24 h、48 h增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用ELISA法检测上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子(FGF)及细胞内环磷鸟苷(cGMP)水平.结果 成功构建了PDE5慢病毒表达载体,筛选并成功建立了稳定低表达PDE5基因的ADSCs细胞株PDE5 shRNA-ADSCs.与正常细胞组相比,I/R损伤细胞组ADSCs增殖率明显降低,早期、晚期及总凋亡率均明显增加,上清液中VEGF、FGF水平及细胞内cGMP水平明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05);阴性对照组与I/R损伤细胞组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);而与阴性对照组相比,PDE5 sh I/R组ADSCs增殖显著增加,凋亡率明显下降,且上清液中VEGF、FGF水平及细胞内cGMP水平进一步升高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 PDE5基因表达被抑制后可能通过上调cGMP水平,有效改善ADSCs在I/R状态下的增殖、凋亡及分泌功能,优化其效能.
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股骨头磷酸二酯酶5基因的检测
[目的]检测股骨头内及其支配血管磷酸二酯酶5(PDE5)基因及其表达水平,为研究磷酸二酯酶5抑制药可选择性增加股骨头血流量提供合理解释.[方法]采用RT-PCR法、Western印迹法和免疫组化染色检测17只雄性狗股骨头、主要髋外周动脉的PDE5基因及其表达.[结果]狗股骨头和髋外周动脉组织提取物用琼脂糖凝胶电泳均可显示较清晰的总RNA条带,分别为28S,18S,5S;RT-PCR扩增PDE5 cDNA后可见大小为426 bp的PDE5特异条带;Western印迹法显示狗股骨头在相对分子质量Mr≈95 × 101处有PDE5蛋白的表达;免疫组化染色显示狗股骨头PDE5分布于骨髓粒细胞系胞浆内.[结论]股骨头和供血血管有PDE5的正常表达,提示PDE5特异性抑制药可通过调控基因表达而影响股骨头血流量.
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PDE5在ED治疗中的靶向作用
作为细胞内信号传导的第二信使,cAMP和cGMP在细胞的生命活动中有重要的意义,细胞内cAMP和cGMP水平的调控是由环化酶的合成和磷酸二酯酶(PDEs)的水解作用来实现.PDEs能特异性地催化环嘌呤核苷酸的3',5'-磷酸二酯键,水解生成相应的无活性的5'-GMP或5'-AMP.自1962年Sutherland和Rall首次发现对细胞内第二信使cGMP和cAMP具有水解活性的PDE以来,现确定PDEs家族已有11个基因家族,而且每个家族又有数目不等的亚型,它们对底物的专一性、抑制剂的敏感性和钙/钙调蛋白的依赖性的各不相同.
