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灰黄霉素对人前列腺癌PC-3细胞体内外作用的实验研究
目的 探讨灰黄霉素在体内外对人前列腺癌PC-3细胞抗肿瘤作用的可能机制.方法 不同浓度(0、5、10、15、20、25 μg/ml)的灰黄霉素作用于PC-3细胞48 h,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞活率;荧光显微镜下观察细胞形态变化;膜联蛋白5-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双标记染色法检测PC-3细胞的凋亡;比色法检测Caspase-3、8、9活性变化.采用灰黄霉素对PC-3细胞BALB/C荷瘤裸鼠瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,12d后免疫组化法检测Bcl-2、Bax、p53和Survivin的表达.结果 灰黄霉素能抑制PC-3细胞增殖,半数抑制率浓度为(18.17±2.10) μg/ml;镜下可见典型的细胞凋亡形态学改变.15 μg/ml灰黄霉素处理组PC-3细胞凋亡率(31.37±2.93)％,与对照组(2.89±0.67)％比较差异有统计学意义(P＜0.01).15μg/ml灰黄霉素处理组PC-3细胞caspase3、8、9的活性分别为0.562±0.050、0.337±0.053和0.293±0.038,对照组分别为0.113±0.014、0.120±0.017和0.109±0.018,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).肿瘤接种后第23天,灰黄霉素组移植瘤体积为( 961.17±78.12) mm3,移植瘤质量为( 742.50±78.63) mg,对照组为( 1732.96±120.73) mm3,(1387.33±71.47)mg,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).灰黄霉素组Bcl-2、Bax、p53和Survivin蛋白表达阳性率分别为(16.10±3.45)％、(39.50±6.88)％、( 48.20±8.04)％和( 16.50±2.22)％,对照组分别为(41.30±3.95)％、(13.70±2.98)％、(17.60±3.21)％和(52.11±6.28)％,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 灰黄霉素能抑制前列腺癌PC-3细胞的生长,诱导PC-3细胞凋亡并抑制PC-3细胞的动物体内致瘤能力.
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UbcH10基因沉默联合多柔比星抑制耐药乳腺癌细胞体内成瘤实验
目的 观察UbcH10基因沉默对多柔比星抑制耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR体内成瘤作用的影响.方法 采用慢病毒系统在MCF-7/ADR细胞中进行UbcH10基因沉默.将基因沉默后的肿瘤细胞及对照肿瘤细胞接种至裸鼠皮下,通过裸鼠尾静脉连续给予多柔比星或生理盐水2周并停药1周,测量肿瘤体积,分析UbcH10沉默对多柔比星抑制MCF-7/ADR体内成瘤作用的影响.采用蛋白质印迹分析检测瘤体中的UbcH10及BCL-2蛋白含量,分析UbcH10与肿瘤细胞化疗敏感性之间的调控关系.结果 通过慢病毒实验系统成功建立UbcH10基因沉默细胞株MCF-7/ADR UbcH10-RNAi.经过3周给药处理,多柔比星组肿瘤体积与对照组比较差异无统计学意义,肿瘤抑制率为4.16％;基因沉默+多柔比星组肿瘤体积与对照组差异有统计学意义(P＜0.05),肿瘤抑制率为41.8％.瘤体内蛋白含量检测结果显示,对照组、多柔比星组、基因沉默+多柔比星组UbcH10蛋白表达量分别为0.81±0.16、0.78±0.12、0.18±0.04,基因沉默+多柔比星组其余两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);BCL-2蛋白表达量组间差异与UbcH10一致,二者之间具有正相关性.结论 UbcH10基因沉默可以显著增强多柔比星抑制耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR的体内成瘤作用.
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三氧化二砷对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外作用及可能的机制
目的 观察三氧化二砷(As2O3)在体内外对人肝癌SMMC-7721细胞抗肿瘤作用.方法 不同浓度的As2 O3作用于SMMC-7721细胞48 h,采用MTT法测定细胞的存活率;荧光显微镜观察细胞形态变化;FITC-Annexin Ⅴ/PI双标记检测SMMC-7721细胞的凋亡;比色法检测Caspase-3活性变化.用As2 O3在SMMC-7721肝癌细胞荷瘤裸鼠的瘤体内进行注射治疗,观察肿瘤生长变化,12 d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重,并通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达.结果 As2 O3能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,半数抑制率浓度为(18.17±2.10)μmol/L;显微镜下可见有典型的细胞凋亡形态学改变,As2O3处理组SMMC-7721细胞凋亡率与对照组相比显著增加,As2 O3可提高SMMC-7721细胞的Caspase-3活性.As2O3瘤内注射肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤后,能显著抑制肿瘤生长,瘤重的抑制率可达52.37％,免疫组化结果显示As2 O3能明显上调与细胞凋亡相关因子Bax和Caspase-3的表达和下调Bcl-2的表达.结论 As2 O3能抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长,诱导SMMC-7721细胞凋亡;As2O3能抑制SMMC-7721细胞的体内致瘤能力.
关键词： 三氧化二砷 凋亡 SMMC-7721细胞 体内成瘤 -
鬼臼毒素抗胃癌细胞株SGC 7901作用的实验研究
目的:研究鬼臼毒素抗胃癌SGC 7901细胞株的作用,为鬼臼毒素用于临床治疗胃癌提供依据.方法:不同浓度的鬼臼毒素(0,5,10,20和50mg/L)处理SGC 7901细胞后,采用MTT比色法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖;采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡;裸鼠成瘤实验检测鬼臼毒素对SGC 7901细胞体内致瘤能力的影响.结果:鬼臼毒素呈时间与剂量依赖性抑制SGC 7901细胞生长,明显降低SGC 7901细胞平板克隆,显著诱导SGC 7901细胞凋亡,并使SGC 7901细胞阻滞于G2/M期,还能显著降低SGC 7901细胞裸鼠移植瘤的体积及质量.结论:鬼臼毒素能抑制胃癌SGC 7901细胞的生长,诱导SGC 7901细胞凋亡,并能抑制GC7901细胞的体内致瘤能力,此为鬼臼毒素临床治疗胃癌提供了科学依据.
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酪氨酸激酶3对赫赛汀耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/H增殖和成瘤能力的影响
目的 探索erb-b2受体酪氨酸激酶3(HER-3)对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/H的体外增殖和体内成瘤能力的影响.方法 采用赫赛汀浓度递增法构建SKOV3耐药细胞株(赫赛汀起始浓度为5 mg/L,经5~8次浓度递增,每次提高50%).实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HER-3在15对非耐药卵巢癌组织和耐药卵巢癌组织中的表达(SKOV3和SKOV3/H细胞中的表达).MTT实验验证分别转染sh-HER-3及其对照质粒vector对SKOV3/H细胞增殖能力的影响.将包含sh-HER-3的重组慢病毒质粒及其阴性对照慢病毒空载体质粒vector(均带egfp荧光标签)分别以病毒/细胞数量=15的比例感染SKOV3/H细胞,加入2.0μg/ml的嘌呤霉素筛选,构建稳定转染sh-HER-3或vector的SKOV3/H细胞,将2株细胞分别注射到裸鼠皮下,复制卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察体内成瘤情况.结果 成功构建卵巢癌SKOV3耐赫赛汀细胞株SKOV3/H,且SKOV3/H的群体倍增时间为SKOV3细胞的1.4~1.9倍.HER-3在耐药卵巢癌组织中的表达水平高于非耐药癌组织(<0.05),且HER-3在耐药细胞株SKOV3/H中的表达水平也高于非耐药卵巢癌细胞株SKOV3(<0.05).转染sh-HER-3后,SKOV3/H细胞的增殖能力低于阴性对照组(<0.05).转染sh-HER-3后,耐药细胞株SKOV3/H的裸鼠体内成瘤能力降低(<0.05).结论 HER-3参与卵巢癌的赫赛汀耐药,并正向影响耐药细胞株SKOV3/H的增殖和体内成瘤能力.
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镍化合物诱发细胞恶变过程中的P53基因的变化
目的 探讨三种镍化合物在诱发细胞恶变过程中不同阶段P53基因突变情况，并比较它们之间的差异。方法 三种镍化合物转化细胞接种BALB/c裸鼠，应用PCR-SSCP法进行肿瘤细胞和转化细胞P53基因第5～8外显子检测。结果 硫化镍组一个经软琼脂筛选的转化细胞系和相应的肿瘤细胞系P53基因第8外显子检出突变。氯化镍组的肿瘤细胞系第6外显子检出突变。结论 本文说明了镍化合物诱发细胞恶变的晚期发生P53基因突变。
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三种镍化合物诱发转化细胞恶性度的鉴别与分析
目的:利用已建立的三种镍化合物体外转化细胞进行裸鼠体内成瘤实验研究,比较它们恶性度的差异.方法:三种镍化合物转化细胞接种BALB/C裸鼠,进行肿瘤细胞和转化细胞的透射电镜及扫描电镜观察.结果:硫化镍,氯化镍,硫酸镍分别诱发的转化细胞都能在BALB/C裸鼠皮下形成肿瘤,病理组织学检查确定为纤维肉瘤.经扫描电镜与透射电镜观察瘤细胞形态与转化细胞有一定差别.结论:本文进一步说明了三种镍化合物所诱发的细胞转化为恶性转化,且都具有体内致瘤性.
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鼻咽癌干细胞分子标记的研究进展
鼻咽癌是一种具有独特生物学行为的头颈部恶性肿瘤，其发病有明显的地域特征，在中国的南部沿海地区较高。目前根治性放疗是治疗鼻咽癌的主要手段，Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌行放疗后5年生存率可达80％～90％，但Ⅲ～Ⅳ期仅为10％～40％。因此，寻找导致鼻咽癌复发及转移的“种子”细胞，对研究新的治疗途径有重要意义。肿瘤干细胞（ cancer stem cell， CSC）是在研究多种恶性肿瘤时发现的具有类似于干细胞特性的肿瘤细胞，具有自我增殖、更新、分化、放化疗抗拒等特性。鉴定CSC的金标准是看分选得到的CSC能否在移植动物体内形成新肿瘤［1］。 WANG等［2］分离出的具有干细胞特性的鼻咽癌细胞可以在裸鼠体内成瘤，表明在鼻咽癌组织中同样存在CSC。研究还证实头颈肿瘤侧群细胞（ SP细胞）具有高侵袭、化疗耐药、致瘤等特性［3］。进一步研究发现鼻咽癌SP细胞也表现出CSC特性［2，4］，提示鼻咽癌SP细胞可能是潜在CSC，可以为研究鼻咽癌CSC特异性分子标记提供条件。现将近年来与鼻咽癌CSC识别有关的分子标记综述如下。
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RhoE对cd44基因启动子的转录活性及大肠癌细胞系恶性生物学行为的影响
目的 研究RhoE对cd44基因启动子的转录调控,并探讨RhoE对裸鼠体内成瘤性的影响.方法 采用PCR技术从人胚肾HEK293细胞中扩增出cd44启动子,并将其插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,经测序确定所扩增的DNA序列,并将其转染入SW480及LoVo细胞中监测其活性.将pcDNA3.1-RhoE和pcDNA3.1分别与pGL3-CD44 promoter共转染大肠癌LoVo细胞和SW480细胞,双荧光素报告基因检测活性.另外将pcDNA3.1-RhoE和对照组分别稳定转染LoVo细胞和SW480细胞,并将筛选的稳定表达的细胞分别接种裸鼠,观察肿瘤的生长;用免疫组化的方法检测RhoE对肿瘤组织细胞形态及CD44分子表达的影响.结果 测序结果表明,扩增的cd44启动子序列正确,双报告基因实验检测荧光素酶活力表明构建的报告基因具有启动子活性.含cd44启动子序列的报告基因在pcDNA3.1-RhoE阳性的LoVo细胞中表达受到抑制;HE染色显示pcDNA3.1-RhoE转染组较对照组肿瘤细胞明显变小,且大小和形态呈现一致性,已没有瘤巨细胞,相应的肿瘤细胞核的体积也变小.结论 RhoE通过抑制cd44基因启动子的活性部分逆转肿瘤的恶性生物学行为.为研究RhoE表达与cd44基因的关系及CD44蛋白表达与结直肠癌发生、发展及浸润转移的关系提供了良好的实验基础.
