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手霉素通过反应性氧基诱导甲状腺未分化癌KAT-4细胞凋亡
目的 研究手霉素对甲状腺未分化癌KAT-4细胞的作用,探讨其作用机制.方法 使用人的甲状腺未分化癌KAT-4细胞,MTT细胞毒性测定评价手霉素对KAT-4细胞的作用,使用annexin v和一氧化氮(nitric oxide, NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡;细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium, DHE)测定;采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathione, GSH).结果 手霉素降低KAT-4细胞活性,且呈剂量依赖性.手霉素诱导KAT-4细胞凋亡和反应性氧基(reactive oxygen species, ROS)产生包括NO和超氧阴离子增加和GSH降低.手霉素诱导细胞凋亡与ROS的增加有关,N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)可抑制ROS产生,保护KAT-4细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡.结论 细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用.手霉素通过增加ROS产生诱导甲状腺癌细胞凋亡.
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2-methoxyestradiol通过反应性氧基对U937白血病细胞的凋亡诱导作用
目的:探讨2-ME诱导U937白血病细胞凋亡的作用和机制.方法:实验分为白血病细胞株U937细胞含有等量DMSO RPMI 1640培养液的对照组、2-ME处理组、NAC处理组和2-ME+NAC处理组.MTT测定评价对U937细胞毒作用;采用Annexin V和NO染料标记细胞,流式细胞术检测细胞内NO生成和细胞凋亡;DHE测定细胞内超氧阴离子.结果:不同浓度2-ME(0.25、0.50、1.00、和2.00μmol·L-1)处理U937细胞48h后,U937细胞活性均较对照组明显减少(P<0.05),随着2-ME浓度的增高,U937细胞的生存率逐渐减低,呈剂量依赖性.2-ME(2.00μmol·L-1)处理U937细胞8、12、18和24h后的细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05),随着处理时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高;而2-ME处理U937细胞1、3及6h后的细胞凋亡率与对照组比较差异均无显著性(P>0.05).2-ME(2.00μmol·L-1)处理U937细胞产生NO荧光值显著增加,超氧阴离子为1.21±0.02,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05).2-ME处理U937细胞1h时,胞NO阳性率是46.74%±0.15%,与对照组(0.52%±0.21%)比较差异具有显著性(P<0.05);而细胞凋亡率(1.28%±0.07%)与对照组(1.59%±0.12%)比较差异无显著性(P>0.05);2-ME处理U937细胞3h后,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),提示U937细胞NO的产生早于细胞凋亡.用NAC抑制反应性氧基(ROS)可保护U937细胞逃避2-ME的细胞毒作用和避免2-ME诱导的细胞凋亡.2-ME(2.00μmol·L-1)处理组U937细胞活性和细胞凋亡率分别是0.47%±0.02%和13.87%±0.69%,与对照组和2-ME+NAC处理组(0.82%±0.08%及2.98%±0.19%)比较差异均具有显著性(P<0.05).结论:2-ME通过ROS诱导U937细胞凋亡,提示产生ROS的物质可能增强抗白血病作用.
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氧化还原状态的改变控制手霉素诱导HL-60白血病细胞凋亡
目的 研究手霉素对HL-60白血病细胞的作用,探讨其作用机制,主要是线粒体的改变.方法 使用人的白血病细胞株HL-60细胞.MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用Annexin V和一氧化氮(nitric oxide,NO)染料标记细胞,应用流式细胞仪术检测细胞内NO生成和细胞凋亡.细胞内超氧阴离子通过二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)测定.应用化学发光法测定超氧歧化酶 (superoxide dismutase,SOD)活性.采用荧光法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH),萤光素-萤光素酶发光法测定ATP含量.免疫印迹技术检测细胞色素C和Mn-SOD的表达.结果 手霉素引起HL-60细胞活性的下降,且呈剂量依赖性.手霉素诱导产生反应性氧基(reactive oxygen species,ROS):NO和超氧阴离子,降低GSH,但不影响SOD.手霉素诱导线粒体降低细胞ATP的含量,线粒体肿胀和细胞色素C从线粒体释放到细胞质.手霉素诱导的凋亡与ROS的增加有关.用N-乙酰基-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)抑制ROS可保护HL-60细胞逃避手霉素的细胞毒作用和避免手霉素诱导的凋亡.结论 细胞内ROS的产生对手霉素的细胞毒作用起非常重要的作用.手霉素通过包括上游ROS产生,线粒体形态改变和细胞色素C释放的线粒体途径,诱导白血病细胞凋亡.
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丹参注射液对血管紧张素Ⅱ诱导肾脏系膜细胞活性氧水平增加的干预作用
目的:观察丹参注射液对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾脏系膜细胞活性氧(ROS)水平增加的干预作用.方法:采用AngⅡ刺激系膜细胞增殖,同时加入浓度分别为37.5、75、150mg/ml的丹参注射液对系膜细胞作用24h.观察系膜细胞内ROS水平的变化.同时设非干预组(对照组)及单纯丹参组.结果:AngⅡ与大鼠肾脏系膜细胞孵育24h后,细胞内ROS水平上升为对照组的4.61倍(P<0.01).各浓度丹参注射液干预后细胞内ROS水平为对照组3.88倍(P<0.01)、2.55倍(P<0.05)、2.20倍(P<0.05);中、小剂量干预组与AngⅡ组比较:P<0.01);150mg/ml丹参注射液单独与系膜细胞孵育后对细胞内ROS水平没有影响.结论:丹参注射液下调AngⅡ诱导的系膜细胞内ROS水平的增高,从而发挥抗肾小球硬化的作用.
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转化生长因子β1诱导的系膜细胞纤维蛋白溶酶系统变化及其机制
目的研究转化生长因子(TGF)-β1对大鼠系膜细胞纤维蛋白溶酶(纤溶酶)系统的影响,并探讨反应性氧基(ROS)的作用.方法以体外培养的大鼠系膜细胞为对象,采用TGF-β1刺激12 h,部分实验中培养的细胞在刺激前应用DL-buthionine-(S,R)-sulfoximine(BSO)预处理24 h,或应用抗氧化剂N-acetylcysteine(NAC)预处理1 h.应用荧光素法测定细胞ROS含量.系膜细胞tPA、uPA和PAI-1 mRNA的表达采用RT-PCR测定.PAI-1蛋白表达应用ELISA检测.应用合成的荧光素酶底物及荧光扫描法分别测定纤溶酶、uPA、tPA活性.结果 TGF-β1可显著增加细胞ROS含量.2 ng/ml TGF-β1可显著上调PAI-1 mRNA和蛋白的表达,分别为1.9倍(P＜0.01)和1.5倍(P＜0.05).tPA mRNA的表达不受影响但uPA mRNA的表达较对照组下调52%(P＜0.01).TGF-β1可抑制纤溶酶和uPA活性,分别为30%(P＜0.01)和23%(P＜0.05),但对tPA的活性无显著影响.在βSO预处理组,TGF-β1对uPA、PAI-1 mRNA表达和蛋白释放的影响得到显著增强;而NAC预处理可明显逆转由TGF-β1诱导的uPA、PAI-1 mRNA表达的上调和蛋白表达增加以及活性的改变.结论TGF-β1可促使细胞ROS产生增加.ROS介导了由TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1 mRNA和蛋白表达的上调以及uPA mRNA表达的下调和uPA、纤溶酶活性的下降.TGF-β1对系膜细胞纤溶酶活性的抑制主要通过抑制uPA表达和活性而实现.
关键词： 转化生长因子β 纤维蛋白溶酶 纤溶酶原激活物 纤溶酶原激活物抑制物 反应性氧基 -
转化生长因子β1对系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1表达的影响
目的观察转化生长因子(TGF)β1对肾小球系膜细胞(GMC)纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1表达的影响,并探讨反应性氧基(ROS)在TGF-β1诱导的PAI-1表达中的作用.方法体外培养大鼠GMC,分别用TGF-β1(2 ng/ml)和葡萄糖氧化酶(GO)(10 mU/ml)刺激,并用BSO和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行干预处理.采用Western印迹检测PAI-1蛋白表达;RT-PCR和Northern杂交检测PAI-1 mRNA表达;合成的荧光素纤溶酶底物测定纤溶酶活性.结果外源性TGF-β1和GO可显著上调大鼠系膜细胞PAI-1蛋白和mRNA的表达并降低纤溶酶活性.BSO可显著增强TGF-β1和GO诱导的系膜细胞PAI-1 mRNA的表达;而NAC可显著地逆转由TGF-β1和GO诱导的PAI-1 mRNA表达的上调作用.结论TGF-β1可显著上调系膜细胞PAI-1的表达并抑制纤溶酶活性.ROS在TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1表达上调的信号传递途径中可能起了信号传递分子的作用.
关键词： 转化生长因子β 纤溶酶原激活物抑制物 反应性氧基 系膜细胞 -
手霉素对甲状腺癌KAT-18细胞的作用及其机制
目的：探讨手霉素对甲状腺未分化癌KAT-18细胞株的作用及其机制。方法：使用SRB细胞毒性测定法评价KAT-18细胞的活性，使用 Annexin v 和一氧化氮（NO）染料标记细胞，应用流式细胞术检测细胞内NO生成和细胞凋亡，二氢乙啶（DHE）方法测定细胞内超氧阴离子。应用化学发光法测定超氧歧化酶（SOD）活性，Mn-SOD的表达采用免疫印迹技术检测。谷胱甘肽（GSH）含量采用荧光法测定。结果：手霉素有效杀伤KAT-18细胞，随着手霉素剂量的增加，细胞活性逐渐下降。手霉素诱导产生NO和超氧阴离子，降低GSH ，但不影响Mn-SOD的蛋白表达和6 h的SOD活性，但24 h的SOD活性代偿性增加。手霉素诱导的凋亡与NO和超氧阴离子增加及GSH下降有关。用N-乙酰基-L-半胱氨酸（N-acetyl-L-cysteine， NAC）抑制NO和超氧阴离子产生，提高GSH可减少手霉素诱导KAT-18细胞凋亡，从而逃避细胞被手霉素杀伤。结论：手霉素通过细胞内NO和超氧阴离子的产生诱导甲状腺癌细胞凋亡，杀伤甲状腺癌细胞。
