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与汉坦病毒β3整合素受体结合的高亲和性多肽的筛选
目的 从噬菌体七肽展示库中筛选与β3整合素结合的多肽序列,并进行鉴定.方法 以β3整合素为靶分子对噬菌体七肽展示库进行8轮亲和筛选,获得与β3整合素结合的噬菌体克隆,挑选结合力强的克隆进行DNA测序,推导出呈现的多肽序列,应用生物信息学软件进行多肽序列分析和同源性分析.结果 经8轮亲和筛选从噬菌体展示七肽库中挑选80个克隆进行DNA序列测序及生物信息学分析,发现TGVKGPG、LPLTPLP、KLTSSPT、SPVGPLP和DHRNHLV肽段有较高的重复机率,与汉坦病毒囊膜糖蛋白氨基酸序列有较高的同源性.结论 通过对噬菌体展示肽库的淘筛,获得与β3整合素结合的高亲和性多肽,为进一步设计和获取高活性的抗汉坦病毒短肽提供参考资料.
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汉坦病毒细胞膜受体的研究进展
病毒通过细胞膜上受体入侵细胞是病毒感染细胞的起始环节.近年来,汉坦病毒细胞膜受体的研究主要集中在β3整合素上,但并没有证据表明病毒与β3整合素之间有直接的相互作用关系,同时对其他可能的协同受体或辅助受体也少有相关报道.此文对汉坦病毒细胞膜受体的相关研究作了综述.
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应用噬菌体展示技术从七肽展示库筛选汉坦病毒β3整合素受体拮抗剂
目的 筛选汉坦病毒β3整合素受体拮抗肽,为进一步设计和获取高活性的抗病毒短肽提供参考资料.方法 以β3整合素为靶分子,从随机七肽噬菌体展示库中筛选β3整合素的高亲和力噬菌体配体,应用相关软件对阳性噬菌体的基因DNA测序结果进行分析.结果 通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,发现LPLTPLP、TGVKGPG、DHRNHLV肽段有较高的重复概率,经与汉滩病毒囊膜糖蛋白氨基酸序列比较发现,两者存在一定的同源序列.结论 运用噬菌体展示技术从肽库中筛选β3整合素受体拮抗剂是可行的.
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β3整合素在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用研究
目的 观察β3整合素在脓毒症大鼠心肌组织中的表达,探讨其在脓毒症心肌损伤中的作用.方法 采用腹腔注射大肠杆菌内毒素(LPS)制作脓毒症模型,在相对应的时间点采用左心室插管术测量心功能参数,留取心脏组织分别用免疫印迹(Western Blot)、免疫组化(IHC)检测β3整合素的表达以及HE染色、天狼猩红染色观察心肌组织形态学变化.结果 心功能参数的改变主要发生在脓毒症早期,即左心室舒张压、左心室发展压、左心室压力上升的大变化速率、左心室压力下降的大变化速率、心肌耗氧指数与对照组相比较,差异有统计学意义(P＜0.05),组织形态学观察实验组大鼠心肌组织细胞空泡变性,排列松散,结构紊乱,间质胶原纤维数量减少.Western Blot和IHC结果显示实验组β3整合素与对照组比较降低,且6h后较显著,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 在脓毒症心肌损伤的过程中,β3整合素表达改变显著,其可能参与了脓毒症心肌损伤的机制.
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汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的表达及相互作用
目的 研究汉坦病毒76-118株包膜糖蛋白G2与133整合素之间的相互作用.方法 根据HV76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR和基因重组获得带有EGFP标签的G2和带有FLAG标签的β3整合素膜外区片段融合表达质粒,并且在HEK293细胞中进行表达.将表达成功的G2与β3整合素片段进行免疫共沉淀,用Western blot检测它们之间的相互作用.结果 成功构建了G2和β3整合素膜外区各片段的融合表达质粒.将各表达质粒转染HEK293细胞进行瞬时表达,Western blot结果显示β3整合素膜外区各功能片段在细胞裂解上清中获得大量表达,而G2蛋白膜外区仅有81-140片段在细胞裂解上清中大量表达.将G281-140片段与β3整合素膜外区各功能片段进行免疫共沉淀的结果显示,仅G281-140片段和3β整合素27-133片段在细胞中以复合物存在,提示两者之间可能有直接的相互作用.结论 汉坦病毒76-118株包膜糖蛋白G281-140片段与β3整合素27-133片段在细胞中以复合物的形式存在,两者之间存在着相互作用,为β3整合素作为汉坦病毒受体提供了进一步的证据.
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桃红四物汤含药血清对血管平滑肌细胞迁移β3整合素及基质金属蛋白酶9表达的影响
目的 研究桃红四物汤含药血清对血管平滑肌细胞迁移及β3整合素、MMP9表达的影响,并探讨其相关机制.方法 制备桃红四物汤含药血清,体外分离培养大鼠颈总动脉血管平滑肌细胞,将血管平滑肌细胞分为对照组(正常大鼠血清培养)与实验组(桃红四物汤含药血清干预)分别进行处理,采用改良的Boyden chamber观察两组血管平滑肌细胞迁移的活性,采用免疫细胞化学方法检测各组血管平滑肌细胞的β3整合素和MMP9表达的情况.结果 对照组血管平滑肌细胞存在迁移,在含药血清干预后,大鼠血管平滑肌细胞迁移细胞数减少、迁移距离缩短(P＜0.01),且β3整合素和MMP9的表达均降低(P＜0.01).结论 桃红四物汤含药血清可抑制血管平滑肌细胞的迁移,且对β3整合素和MMP的表达均产生负性影响,此影响可能参与了对血管平滑肌细胞的迁移及增殖的抑制作用.
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汉坦病毒感染对β3整合素及血管内皮生长因子受体2的作用
目的 探讨汉坦病毒(HV)感染后β3整合素与血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的变化及其对内皮功能的影响.方法 本研究以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为对象,应用黏附试验、Transwell技术及流式细胞技术,观察HV感染后HUVEC黏附和迁移能力的变化,分析β3整合素与VEGFR2在其中的作用及二者表达数量的变化.结果 HV明显抑制HUVEC黏附和迁移能力(P＜0.05).VEGF促进内皮细胞的黏附和迁移的能力可被β3整合素拮抗剂或HV感染所阻断(P＜0.05),VEGF促进β3整合素表达的作用也可被HV抑制(P＜0.05).HV可以促进β3整合素及VEGFR2的表达(P＜0.05),且二者呈密切正相关(r=0.846).结论 HV感染对β3整合素、VEGFR2的功能及表达数量的影响可能是其致病机制之一.
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肿瘤浸润和转移的相关基因在不同时期宫颈癌中的表达及临床意义
目的:通过病理检测技术查看不同阶段病变情况,并通过基因扩增技术,检测正常宫颈、宫颈癌前病变和宫颈癌病人标本中相关基因的表达情况,研究宫颈癌发生发展及预后的分子机制,为宫颈癌靶向分子治疗提供靶点.方法:选取不同时期宫颈癌癌肿瘤标本、转移淋巴结及正常宫颈组织、宫颈癌前病变组织,标本固定蜡块切片,HE染色观察病变情况;通过RT-PCR技术检测各组织中肿瘤浸润和转移的相关基因VEGF-C、VEGFR-3及 β3整合素的表达,并研究其相关性.结果:组织病理检查证实了各标本的细胞形态;RT-PCR检测发现肿瘤浸润和转移的相关基因VEGF-C和 β3整合素在宫颈癌癌肿瘤标本中表达高、在转移淋巴结中表达次之、在正常宫颈组织中表达低,VEGFR-3在转移淋巴结中表达高,宫颈癌癌肿瘤标本中表达次之.结论:控制肿瘤浸润和转移的相关基因VEGF-C、VEGFR-3及 β3整合素可以阻断人乳头瘤病毒E6E7的表达,阻断宫颈癌的发展,为宫颈癌靶向分子治疗提供靶点.
