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S100A7在子宫颈癌组织中的表达及其对子宫颈癌HeLa和CaSki细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响
目的 探讨S100钙结合蛋白A7(S100A7)在子宫颈癌组织中的表达及其对子宫颈癌HeLa和CaSki细胞迁移、侵袭、增殖及上皮间质转化(EMT)的影响.方法(1)选择2007年4月至2008年3月青岛大学附属医院妇科收治的因子宫颈鳞癌进行手术治疗的癌组织标本共40份作为子宫颈癌组,以同期因妇科良性肿瘤行子宫全切除术的正常子宫颈组织20份作为对照组,应用免疫组化SP法检测两组子宫颈组织中S100A7蛋白的表达.(2)通过慢病毒包装系统将重组质粒pLVX-IRES-Neo-S100A7和空质粒pLVX-IRES-Neo分别转染子宫颈癌HeLa和CaSki细胞(分别为转染组和对照组),筛选稳定表达S100A7基因的HeLa和CaSki细胞系并进行鉴定.穿膜(transwell)小室体外实验检测两组子宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力,活细胞计数(CCK-8)法检测两组子宫颈癌细胞的增殖能力,流式细胞仪检测两组子宫颈癌细胞的细胞周期比例,蛋白印迹(western blot)法检测两组子宫颈癌细胞中EMT标志分子——上皮型钙黏蛋白(E-cad)、神经型钙黏蛋白(N-cad)、波形蛋白(Vim)和纤连蛋白(FN)的表达.结果(1)免疫组化SP法检测显示,子宫颈癌组、对照组子宫颈组织中S100A7蛋白表达水平的中位数分别为91.6和52.1,两组比较,差异有统计学意义(Z=-2.948,P=0.003).(2)本研究成功构建稳定的过度表达S100A7基因的HeLa和CaSki细胞系,转染组HeLa和CaSki细胞中S100A7 mRNA的表达水平分别为119±3和177±16,均明显高于各自的对照组(均设为1, P均<0.01);转染组HeLa和CaSki细胞中S100A7蛋白的表达强度均明显高于各自对照组HeLa和CaSki细胞.transwell小室体外迁移实验显示,转染组HeLa和CaSki细胞的穿膜细胞数分别为(572± 51)和(100±8)个,均明显高于各自的对照组[分别为(337±25)和(41±4)个;P均<0.01];应用matrigel基质的transwell小室进行细胞侵袭能力检测,结果显示,转染组HeLa和CaSki细胞的穿膜细胞数分别为(441±15)和(110±14)个,均明显高于各自的对照组[分别为(156±21)和(59±7)个;P均<0.05].CCK-8法和流式细胞仪检测显示,转染组HeLa和CaSki细胞的增殖率和细胞周期比例分别与各自的对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05).western blot法检测显示,与各自的对照组比较,转染组HeLa和CaSki细胞中E-cad蛋白的表达强度均明显减弱,而N-cad、Vim和FN蛋白的表达强度均明显增强.结论 S100A7基因促进子宫颈癌HeLa和CaSki细胞的侵袭转移和EMT,可能与子宫颈癌的发生、发展有关.
