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mGM-CSF转导的小鼠黑色素瘤细胞融合巨噬细胞的抗肿瘤作用研究
目的 比较小鼠黑色素瘤细胞B16致瘤性与转导mGM-CSF基因的小鼠黑色素瘤细胞B16致瘤性的差别,同时研究转导该基因阳性的B16肿瘤细胞与同源小鼠巨噬细胞融合后其致瘤性变化,初步探讨巨噬细胞在肿瘤生成中的作用.方法 本实验以FuGENE6介导,将融合基因Lxpsp-mGM-CSF转导逆转录病毒包装细胞PA317,以含适量感染能力的重组逆转录病毒上清液转导B16,潮霉素筛选获得阳性细胞(B16+GM-CSF),再将阳性细胞在PEG介导下与同源鼠巨噬细胞(Mφ)融合(B16+GM-CSF+Mφ).B16、B16+GM-CSF、B16+GM-CSF+Mφ三种细胞分组分别接种于C57BL/6小鼠皮下观察成瘤能力.结果 B16组平均21天长出肿瘤;B16-GM-CSF长成实体瘤延迟7天,B16-GM-CSF-Mφ在第40天仍未长出实体瘤.结论 巨噬细胞在小鼠黑色素瘤生长、转移中有重要作用.
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mGM-CSF/βhCG融合蛋白的制备及其致敏树突状细胞疫苗抗小鼠RM-1前列腺癌的作用
利用分子生物学方法设计并构建含有βhCG基因和mGM-CSF基因的表达载体pET-28a-mGM-CSF-X1o-βhCGCTP37质粒.乳糖诱导表达该融合蛋白,通过硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱DEAE-cellulose进行纯化,并以此融合蛋白致敏从C57BL/6J小鼠体内提取的树突状细胞(DC)从而获得DC疫苗.将DC疫苗回输至接种前列腺癌RM-1的C57BL/6J小鼠体内,分组检测.结果显示,DC组和DC与紫杉醇(Pac)联用(DP)组与Pac组相比抗肿瘤效果具有极显著性差异(P ＜0.01);且DP组的抗肿瘤效果优于DC组.可见构建的新型DC疫苗可抑制前列腺癌的生长,且与紫杉醇联合使用具有协同抗肿瘤作用.
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融合基因mGM-CSF/hIL-2在肝癌细胞瘤苗特异性免疫治疗中的作用
背景与目的:手术切除是治疗肝癌的主要方法,但对其术后的复发转移却无更好的办法.近年来,免疫学的发展使肝癌的治疗有了更好的治疗方法.本研究旨在通过制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒.单核细胞集落刺激因子(mGM-csr)融合基因修饰的H22肝癌瘤苗,观察其特异性抗肿瘤免疫作用.方法:用含hIL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体,在体外转染H22细胞,制成疫苗,皮下接种小鼠,同时建立荷瘤小鼠模型.用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、空载组、未转染组小鼠脾细胞对亲本H22细胞的杀伤活性.取血检测血清中IL-10、IFN-у水平.观察小鼠存活期.结果:成功制备了含有hIL-2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗.免疫小鼠脾细胞体外对H22细胞的杀伤率为38.3%.显著高于对S180细胞的9.1%,以及空载组和未转染组的13.6%和7.5%(P＜0.05).转基因瘤苗免疫组血清IFN-у为(12.83±0.75)pg/mL,较空载瘤苗组的(7.83±0.65)pg/mL明显升高(P＜0.01),血清IL-10[(4.58±0.34)pg/mL]较空载瘤苗组的(8.15±0.28)pg/mL明显降低(P＜0.01).同时,转基因瘤苗免疫组小鼠存活期为(40±6)d,较对照组[空载瘤苗组(30±3)d,未转染组(19±4)d]明显延长.结论:转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应.延长荷瘤小鼠存活期.
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工程菌BL21/pET-11 c/hIL-2-mGM-CSF培养条件的优化
目的优化BL21/pET-11 c/hIL-2-mGM-CSF的培养条件以提高目的蛋白的表达量.方法采用拉丁方试验设计方法进行培养基、诱导温度和IPTG使用浓度的综合比较试验,对电泳结果进行扫描后作统计分析,并对该试验所推导出的培养条件进行验证.以佳的培养条件进行连续3次扩大培养,将其与常规培养条件进行比较.结果采用高浓度肉汤培养得到的蛋白相对表达量优于2×YT和LB培养基.42℃诱导与37℃诱导相比能显著提高蛋白表达量,而低至0.3 mmol/L的IPTG可得到优于1.0mmol/L所能诱导得到的蛋白表达量.统计学分析表明优化的培养条件与常规培养条件相比能显著提高目的蛋白的相对表达量.扩大培养时,采用佳的培养条件培养,蛋白的相对表达量比优化之前提高了5倍,表达量达到菌体总蛋白的29%以上.结论通过改良方法培养工程菌BL21/pET-11 c/hIL-2-mGM-CSF,hIL-2-mGM-CSF蛋白以较高的水平表达,为下一步的蛋白纯化和功能分析奠定了基础.
