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pcDNA3.0/PNP-CD和pcDNA3.0/PNP表达载体的克隆和表达
目的:构建新型PNP/Mep-dR自杀基因系统的融合和单基因表达载体.方法:利用DNA重组技术制备融合自杀基因PNP-CD.将其和PNP单基因分别插入真核表达载体pcDNA3.0中.构建融合与单自杀基因表达载体pcDNA 3.0/PNP-CD和pcDNA 3.0/PNP:酶切、PCR及测序鉴定两重组体.结果:成功构建了两个新型自杀基因载体并实现在HepG2肝癌细胞株中的表达.结论:两个新型自杀基因表达载体,尤其是PNP-CD融合自杀基因载体.是肿瘤基因治疗中广谱、高效的治疗载体.
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复方百肤青抗大肠杆菌引起细菌性阴道病生物膜的研究
细菌性阴道病,又称非特异性阴道炎,是生育期妇女常见的疾病之一,主要研究在临床已证实治疗细菌性阴道病(bacterial vaginosis,BV)有显著疗效,以及实验研究中对细菌性阴道病有良好的抗菌作用 [1]的中药复方百肤青抗BV主要致病菌大肠杆菌生物膜的作用,目的是预防细菌性阴道病的复发,解决细菌性阴道病复发率高的问题.同时,为寻找抗菌生物膜新药开辟新途径.
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198株肺炎克雷伯菌和491株大肠埃希菌耐药性分析
目的探讨肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs的耐药性情况,为产ESBLs细菌的监控和治疗提供依据.方法采用Micro scan wat RA way-40系统全自动细菌鉴定/药敏分析仪、双纸片协同试验法和K-B纸片扩散法进行产ESBLs菌株鉴定及药敏测定.结果两年中共分离到肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌689株,产ESBLs菌株77株,总检出率为11.18%,其中肺炎克雷伯菌检出率16.16%,大肠埃希菌检出率9.16%;产ESBLs菌株主要分布在ICU、血液科、烧伤病房;两种产ESBLs菌株对阿米卡星、亚胺培南均有高度敏感性,对头孢唑啉、头孢拉啶、氨苄西林、哌拉西林、阿莫西林/棒酸、替卡西林、庆大霉素、妥布霉素和奈啶酸均有极高的耐药性(耐药率＞80%),高于不产ESBLs组,差别有显著性(P＜0.05).结论肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的产ESBLs菌株在临床分离率较高,对多种抗生素具有较高耐药性,应加强对ESBLs的检测和预防.
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SN标准和3M Petrifilm法检测水产品卫生指标菌的比较
目的:探讨3M Petrifilm检测纸片法能否代替SN标准应用于出口水产品的检测.方法:采用SN标准和3M Petrifilm法同时对随机挑选的出口水产品样品进行细菌总数、大肠菌群和大肠杆菌的检测比对.结果:用两种方法检测水产品的细菌总数结果无显著性差异,而两种方法检测水产品的大肠菌群检出率有显著差异,大肠杆菌检出率有极显著差异.结论:3M Petrifilm法具有快速简便的优点,但检测成本高,检测大肠菌群、大肠杆菌的灵敏度不够.
关键词： SN法 3M Petrifilm法 细菌总数 大肠菌群 大肠肝菌 -
TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达
目的:用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原,建立诊断TTV 感染的特异性方法. 方法:采用PCR方法扩增TTV ORF2基因,将之插入到测序质粒载体中进行测序,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30,并转化大肠杆菌M15菌株,进行诱导表达.用SDS-PAGE分析表达产物.表达产物经Ni-NTA柱层析纯化后,得到纯度为90%的ORF蛋白抗原.用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western-Blot Blotting分析.结果:经IPTG诱导后,筛选出2株高表达株. 结论:该蛋白具有良好的抗原活性.
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尿路感染的治疗新进展
1 引言尿路感染是指肾脏、输尿管、膀胱或尿道的感染.通常分为急性和慢性、上尿道和下尿道、单纯性和复杂性感染.细菌、病毒、真菌、衣原体、支原体等均可引起尿道感染.我们所说的尿路感染多指由细菌感染引起的.大肠肝菌是主要的病原菌,产碱杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌等也是复杂性尿感的常见致病菌.尿感的治疗目前采用分型治疗,即将尿感分为膀胱炎、急性肾盂肾炎、无症状细菌尿、复杂性尿感、再发性尿感、男性尿感和妊娠期间的细菌尿等不同类型给予相应治疗,更有针对性.
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菌必治肌注致过敏性休克一例
菌必治为长效广谱头孢菌素,对革兰氏阴性菌(如大肠肝菌、沙门氏菌等)具有高度的抗菌活性,对脑膜炎球菌、淋球菌等革兰氏阴性球菌也有效.临床常用于敏感菌所致的感染,如呼吸道感染、泌尿道感染(包括淋病及肾盂肾炎)等.我院一患者肌注菌必治发生过敏性休克,临床少见.
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Ⅴ型腺病毒纤毛基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
目的克隆腺病毒纤毛基因,为构建腺病毒靶向性载体创造条件.方法应用限制性内切酶酶切技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆后完成克隆纤毛基因,并构建纤毛基因原核表达载体.用IPTG诱导纤毛蛋白的表达,再用SDS-PAGE和Western blot对其进行分析.结果成功地克隆纤毛基因.质粒pBS/Fiber经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性.经质粒pQE/Fiber转化的细菌,在IPTG诱导下可表达一种新的蛋白,并于5h表达量高.经Western blot证实,在变性条件下表达蛋白的Mr为62 000,在非变性条件下为186 000.结论已克隆的纤毛基因能在大肠杆菌中表达,并具有三聚体结构,可用于腺病毒载体靶向性构建.
