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氟哌啶醇在K562/Dox细胞中对P-糖蛋白及氯离子通道的影响
目的探讨氟哌啶醇(Hal)对人红白血病耐药细胞K562/Dox的逆转耐药作用,以及对P-糖蛋白(P-gp)和肿胀激活的氯离子通道的影响.方法应用乳酸脱氢酶法(LDH),测定Hal对瘤细胞增殖的抑制作用.以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),分析经Hal处理后3种耐药基因mRNA表达的变化.将瘤细胞荷载氯离子敏感染料MQAE后,以荧光分光光度计测定低渗环境中Hal对K562/Dox细胞肿胀激活的氯离子通道的影响;应用ZM库尔特血球计数仪及256频道测定仪,测定低渗环境中瘤细胞的体积变化,以判断Hal对细胞调节性体积减小(RVD)的影响.结果 Hal对K562/Dox细胞的耐药性具有明显的逆转作用,在12.50,6.25和3.12μmol/L浓度时,其对K562/Dox细胞耐药性的逆转倍数分别为8.61,4.35和2.25.RT-PCR结果显示,用12.μmol/L Hal处理K562/Dox细胞后,P-gp和多药耐药相关蛋白(MRP)mRNA表达水平均降低,并呈现时间依赖性,分别较原水平下降76.3%和64.6%(P＜0.05);谷胱甘肽硫转移酶π(GSTπ)mRNA的表达水平于用药后第2天下降66.1%,第3天回升(P＜0.05).K562/Dox细胞的氯离子浓度检测结果显示,单纯低渗刺激可使K562/Dox细胞中MQAE荧光强度下降(34.46±5.91)%;经6.μmol/L和18.7μmol/L Hal处理后,细胞荧光强度分别降低(24.43±3.25)%和(16.63±4.98)%,与单纯低渗刺激比较,差异有统计学意义(P＜0.01).单纯低渗刺激时,RVD率为(84.95±5.69)%;经6.μmol/L和18.75μmol/L Hal处理后,RVD率分别为(51.12±6.01)%和(39.51±4.79)%,与单纯低渗刺激比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Hal具有较强的逆转K562/Dox细胞耐药性的作用;可抑制P-gp基因的表达和氯离子通道的活性;P-gp和肿胀激活的氯离子通道在耐Dox的K562/Dox细胞中密切相关.
关键词： 氟哌啶醇 多药耐药 K562/Dox细胞 氯离子通道 -
高效液相色谱法测定细胞核内多柔比星浓度
目的 建立高效液相色谱-荧光测定法测定K562/DOX(doxorubicin-resistant K562 cells,耐多柔比星K562细胞)细胞核多柔比星浓度.方法 分离K562/DOX细胞核,多柔比星浓度测定采用Diamond C18色谱柱,甲醇-水-醋酸(50:50:0.25)为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,荧光检测,激发波长497 nm,发射波长555 nm,以盐酸柔红霉素为内标.结果 细胞核中多柔比星浓度在5.0～5 000.0 μg·L-1内呈良好线性关系,r=0.999 9.加样回收率为98.55%～100.84%(RSD 1.77%～3.27%),日内和日间精密度均<15%,低检测浓度为5.0μg·L-1.结论 该方法简单、方便,检测限低,精确度和回收率良好,可用于多药耐药肿瘤细胞内多柔比星浓度的胞内动力学研究.
关键词： 高效液相色谱法 多柔比星 细胞核 K562/Dox细胞 -
小檗碱增强K562/DOX细胞对多柔比星敏感性的研究
目的 探讨小檗碱增强耐药K562/DOX细胞对化疗药多柔比星的敏感性的作用.方法 四甲基偶氮唑蓝法检测小檗碱的细胞毒性及其对多柔比星抗肿瘤活性的增强作用；高内涵活细胞成像系统检测无毒剂量小檗碱作用后,多柔比星在K562/DOX细胞内的蓄积量；PI/Hoechst33342双染法检测小檗碱对多柔比星诱导的K562/DOX细胞凋亡的影响；罗丹明123蓄积实验检测小檗碱对P-糖蛋白外排功能的影响.结果 1 μmol·L-为小檗碱的无毒剂量,在此无毒剂量下,小檗碱使多柔比星对K562/DOX细胞的IC50降低了1.5倍；1μmol·L-1小檗碱可使多柔比星在K562/DOX细胞内的蓄积量增加,增强多柔比星诱导的K562/DOX细胞凋亡,增加K562/DOX细胞内罗丹明123的蓄积量,从而抑制P-糖蛋白的外排功能.结论 小檗碱可通过抑制K562/DOX细胞膜上P-糖蛋白的外排功能,增加K562/DOX细胞内多柔比星浓度,促进多柔比星对耐药细胞的诱导凋亡作用,逆转K562/DOX细胞的多药耐药性.
关键词： 小檗碱 K562/Dox细胞 多柔比星 敏感性 -
六神丸及其成分蟾酥对K562/DOX细胞的增殖和MDR1基因表达的影响
目的:探讨传统中成药六神丸及其成分蟾酥对K562/DOX细胞的增殖和MDR1基因表达的影响.方法:采用中药血清药理学方法制备六神丸和蟾酥的含药血清,以MTT法检测六神丸以及蟾酥含药血清、阿霉素处理后K562/DOX细胞的抑制率；RT-PCR检测MDR1 mRNA表达；Western blot检测MDR1蛋白的表达.结果:与对照组相比,蟾酥和六神丸对K562/DOX细胞均有抑制作用；六神丸组MDR1 mRNA表达降低,MDR1蛋白表达下降；而蟾酥组、阿霉素组未有明显变化.结论:六神丸可能通过下调MDR1表达水平进而逆转K562/DOX细胞的耐药性,而其成分蟾酥作用不明显.
关键词： K562/Dox细胞 六神丸 蟾酥 MDR1基因 -
蟾酥逆转人白血病K562/DOX细胞多药耐药的实验研究
目的：探讨传统中药蟾酥逆转人白血病K562/DOX细胞多药耐药性（MDR）的作用。方法采用中药血清药理学方法制备蟾酥含药血清，以MTT法分别检测蟾酥含药血清联合柔红霉素，或单用蟾酥含药血清处理后，不同时段作用于K562/DOX 细胞的抑制率；实时荧光定量 PCR法检测蟾酥含药血清对 K562/DOX细胞的Bcl-2 mRNA表达。结果与空白对照组比较，蟾酥对K562/DOX细胞均有抑制作用；蟾酥组Bcl-2 mRNA表达降低。结论蟾酥可能通过下调MDR1表达水平进而逆转K562/DOX细胞的耐药性。
关键词： K562/Dox细胞 蟾酥 Bcl-2基因 -
硒化壳聚糖抑制耐多柔比星K562细胞增殖及对PI-3K/Akt信号通路的影响
目的:研究硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病耐多柔比星细胞株(K562/DOX)增殖的影响,探讨其与磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI-3K/Akt)信号通路的关系.方法:将K562/DOX细胞分为阴性对照组、DOX组(50 μg/ml DOX)和25、50、100、200、400 μg/ml硒化壳聚糖(50 μg/ml DOX+相应浓度的硒化壳聚糖)组,每组4个复孔,作用12、24、36h后,应用MTT法和克隆形成法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响并计算逆转倍数,应用免疫印迹法检测DOX组和100、200 μg/ml硒化壳聚糖组作用24h后细胞内磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达.结果:与DOX组比较,50、100、200、400 μg/ml硒化壳聚糖组对细胞具有明显抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),且与浓度、时间呈正相关;25、50、100、200、400 μg/ml硒化壳聚糖组细胞的逆转倍数分别为1.11、1.57、1.68、2.09、2.51.硒化壳聚糖明显下调了细胞内p-Akt蛋白表达(P＜0.01).结论:硒化壳聚糖可通过抑制PI-3K/Akt信号通路对K562/DOX细胞产生增殖抑制和多药耐药逆转作用.
