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微小RNA-29c表达水平与胃癌生物学行为的关系
目的 探讨微小RNA-29c (miR-29c)在胃癌发生、发展过程中的作用.方法 采用微小RNA (miRNAs)微阵列芯片技术检测胃癌组织中miRNAs表达谱,并筛选差异表达的miRNAs；采用实时定量PCR检测miR-29c在胃癌组织和相应正常胃上皮组织、正常胃上皮细胞系GES-1、胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901中的表达水平；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测miR-29c对胃癌细胞增殖、细胞周期及药物敏感性的作用；应用实时定量PCR、Western blot和荧光素酶报告基因技术研究髓样细胞白血病1(Mcl-1)与miR-29c之间的关系.结果 与正常胃上皮组织比较,胃癌组织中表达上升超过2倍的miRNAs有7个,分别为miR-374b*、miRPlus-E1212、miR-338-5p、miR-297、miR-21、miR-135b、miR-18a;表达下降的miRNAs有9个,分别为miR-29b-2*、miR-1260、miRPlusE1241、miR-S1-5p、miR-148a、miR-29c、miR-647、miR-196b*和ebv-miR-BART5.miR-29c在胃癌组织和正常胃上皮组织中的相对表达量分别为0.70±0.34和1.00±0.06(P ＜0.05),分化越差的细胞系miR-29c表达水平越低(P＜0.05).miR-29c表达与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期、Laurén分型、Borrmann分型和Ming分型有关(均P＜0.05).在BGC-823胃癌细胞中,miR-29c过表达可以抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞周期受阻于S期,并增加肿瘤细胞对化疗药物多西紫杉醇的敏感性(均P＜0.05).Mcl-1 mRNA在胃癌组织和正常胃上皮组织中的相对表达量分别为3.47±1.34和1.00 ±0.20(P ＜0.01),miR-29c和Mcl-1 mRNA在胃癌组织中的表达呈负相关(r=-0.633,P＜0.05).miR-29c直接靶向调控Mcl-1在胃癌细胞中的表达.结论 胃癌组织具有自己独特的miRNAs表达谱.miR-29c的表达水平与胃癌的生物学行为相关.miR-29c参与对Mcl-1的靶向调控,可能是胃癌的发病机制之一.
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胶质瘤miR-29c表达异常减少及其对肿瘤细胞增殖的影响
目的：探讨microRNA-29c（miR-29c）在胶质瘤中的表达及其对细胞分裂周期蛋白42（CDC42）的调控作用和对细胞增殖的影响。方法：用锁定寡核苷酸原位杂交法和免疫组织化学法检测60例不同级别胶质瘤及10例非肿瘤对照脑组织中miR-29c和CDC42的表达水平，实时荧光定量RT-PCR、Western blot及MTS法分别检测U87MG细胞中miR-29c瞬时表达、CDC42 mRNA和蛋白表达及其对胶质瘤细胞增殖的影响。结果：各级别胶质瘤的miR-29c表达水平均明显低于非肿瘤对照脑组织，且随肿瘤级别升高而显著降低，各组间的差异均有统计学意义（P<0.001）。而CDC42表达水平则呈相反趋势，其表达水平随胶质瘤良恶性级别增加相应升高，除Ⅰ～Ⅱ级组与非肿瘤对照组之间外，其余各组间的差异均有统计学意义（P<0.001）。与对照组相比， miR-29c转染组的CDC42 mRNA（P<0.001）和蛋白表达水平（P<0.01）均明显降低。miR-29c转染组细胞的增殖能力明显低于U87MG空白对照组和Scr转染组（P<0.05）。结论：miR-29c是胶质瘤的抑瘤miRNA，其表达水平可作为评价胶质瘤良恶性级别的重要参考指标。miR-29c在胶质瘤中表达减少解除了其对靶基因CDC42转录后水平的抑制作用，并导致肿瘤细胞无限增殖。表明miR-29c表达异常减少可能是引起胶质瘤发生、发展的关键事件。
关键词： 胶质瘤 微小RNA-29c 细胞分裂周期蛋白42 细胞增殖 -
miR－29c通过 Tiam1抑制人食管鳞状细胞癌侵袭和转移的研究
目的：研究微小RNA（miR）－29c通过靶向T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）基因对食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞侵袭和迁移的影响。方法通过细胞划痕和transwell实验观察miR－29c过表达的ESCC细胞侵袭迁移能力的变化；通过免疫印迹法和sensor reporter 实验研究miR－29c对Tiam1的调控作用和靶标位点；在细胞“拯救”实验中通过免疫印迹法检测相关蛋白表达量的变化以及用免疫荧光－激光共聚焦显微镜观察细胞形态的改变，研究miR－29c 抑制ESCC 细胞侵袭迁移的调节机制。结果细胞划痕实验和 transwell 实验显示miR－29c能抑制ESCC细胞的侵袭迁移；通过生物信息学方法预测miR－29c的靶基因是Tiam1；免疫印迹法和sensor reporter检测结果显示miR－29c通过与Tiam13′－非翻译区（ UTR）结合降解Tiam1；细胞功能“拯救”实验的细胞划痕、免疫印迹法和免疫荧光结果显示miR－29c能抑制Tiam1的表达，导致激活态Rac1－三磷酸鸟苷（ GTP）减少，致使细胞运动状态改变，迁移能力减弱；而人工合成的针对Tiam1的特异siRNA分子siTiam1的干涉作用能“拯救”miR－29C对ESCC细胞迁移能力的抑制。结论 miR－29C通过降解Tiam1 mRNA，下调了Rac1的激活水平，导致细胞运动状态变化，从而抑制ESCC细胞的侵袭迁移。
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非增殖性糖尿病视网膜病变患者血清miR-29c的表达及相关分析
目的:观察微小RNA-29c(miR-29c)在非增殖性糖尿病视网膜病变(non-proliferative diabetic retinopathy,NPDR)患者血清中的表达水平,探讨其在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)发病机制中的作用.方法:选择2型糖尿病NPDR患者及无视网膜病变(non-diabetic retinopathy,NDR)患者各30例.收集血清样本,应用荧光定量PCR方法检测血清miR-29c的相对表达水平.应用PicTar、TargetScan与MiRanda软件综合预测miR-29c的靶基因,取三款软件的交集作为终靶基因.结果:miR-29c在NPDR患者血清中的表达量明显高于NDR组(P＜0.05),其表达量与HbA1c呈显著正相关(r=0.379,P＜ 0.05).预测miR-29c靶基因集合富集在磷酸肌醇代谢、细胞因子及受体的相互作用、细胞外基质与受体信号作用通路中.结论:NPDR患者血清miR-29c表达显著上调,miR-29c可能通过调控细胞因子的相互作用、磷酸肌醇代谢等途径参与DR的发生发展.
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脑胶质瘤患者血清miR-720、miR-29 c表达及临床意义
目的 探讨miR-720、miR-29c在脑胶质瘤发生、发展中的作用.方法 选取脑胶质瘤患者87例(胶质瘤组),体检健康者50例(对照组),分别采集胶质瘤组手术前后及对照组清晨空腹肘静脉血.采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-720和miR-29c表达,分析脑胶质瘤患者血清miR-720、miR-29c表达与其临床病理特征及预后的关系.结果 与对照组比较,胶质瘤组术前、术后血清miR-720相对表达量均升高,血清miR-29c相对表达量均降低;与术前相比,胶质瘤组术后血清miR-720相对表达量降低,血清miR-29c相对表达量升高;组间及组内比较P均<0.05.血清miR-720表达与脑胶质瘤肿瘤分化程度呈负相关,血清miR-29c表达与肿瘤分化程度呈正相关(P均<0.05);血清miR-720、miR-29c表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理类型、肿瘤位置、KPS评分均无关(P均>0.05).脑胶质瘤组miR-720高表达者与低表达者1年生存率分别为74.37%、92.50%,miR-29c高表达者与低表达者1年生存率分别为92.86%、73.33%(33/45),两者比较P均<0.05.结论 miR-720高表达、miR-29c低表达共同促迸脑胶质瘤的发生及发展.血清miR-720、miR-29c具有作为脑胶质瘤生物靶标的潜能.
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食管鳞状细胞癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、 miRNA-29c、VEGF-A表达变化及其相关性
目的 观察食管鳞状细胞癌(ESCC)癌组织及癌旁组织中miRNA-29家族(miRNA-29a、miRNA-29b、miR-NA-29c)及血管内皮生长因子A(VEGF-A)的相对表达量变化,并探讨他们之间的关系.方法 收集手术切除并经病理检查确诊的ESCC癌组织及癌旁组织,应用qRT-PCR及免疫组织化学染色技术分别检测miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c、VEGF-A的相对表达量,并分析其相关关系;进一步应用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因系统推测和验证miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同调控同一靶基因VEGF-A的分子调节机制.结果 与癌旁组织比较,ESCC癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c呈低表达(P均<0.05);VEGF-A呈高表达(P<0.05),且其之间呈负相关关系(miRNA-29a:r=-0.955;miRNA-29b:r=-0.950;miRNA-29c:r=-0.893,P均<0.01).生物信息学分析结果发现,VEGF-A能够与miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c进行特异性结合,可能为miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶基因.双荧光素酶报告基因系统验证了VEGF-A是miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶基因.结论 ESCC癌组织中miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c低表达,VEGF-A高表达;且他们之间具有负相关关系.VEGF-A为miRNA-29a、miRNA-29b、miRNA-29c共同的靶向调节基因.
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微小RNA-29b-1*和微小RNA-29c对膀胱癌T24细胞增殖的影响
目的 观察微小RNA(miR)-29b-1*和miR-29c对膀胱癌T24细胞的活性和增殖的影响.方法 构建携带目标miRNAs干扰基因的慢病毒(pGCsil-H1-CMV-GFP)载体、阳性克隆的聚合酶链反应(PCR)鉴定.用293T细胞包装慢病毒形成慢病毒重组体,并用孔稀释法测定滴度.T24细胞中转染慢病毒重组体及转染效率测定.用噻唑蓝(MTT)比色法对4组处于对数生长期的实验组[空细胞对照组、转染阴性对照慢病毒细胞组、转染miR-29b-1*基因RNA干扰(RNAi)慢病毒细胞组、转染miR-29c基因RNAi慢病毒细胞组]进行连续5d的细胞增殖分析.结果 实时定量PCR(Real-time PCR)验证结果显示:T24细胞中miR-29b-1 *和miR-29c表达水平比较于空细胞组分别为3.47和4.40；MTT比色法显示,转染阴性对照慢病毒细胞组与空细胞对照组细胞比较,增殖受到轻度抑制；而转染miR-29b-1*、miR-29c基因RNAi慢病毒细胞组与染阴性对照慢病毒细胞组和空细胞对照组细胞比较,增殖均受到明显抑制,前者抑制效果更明显.结论 细胞增殖MTT法分析显示通过RNAi降低miR-29b-1*、miR-29c的表达均能引起T24细胞的增殖抑制.
关键词： 微小RNA-29b-1* 微小RNA-29c 膀胱癌 T24 -
微小RNA-29c在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞的影响
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-29c在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、侵袭力的影响.方法 选择长春大学医院及吉林大学第一医院2013年1月至2015年12月23例膀胱组组织标本及相应的癌旁组织标本,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定膀胱癌及癌旁组织中miRNA-29c的表达.miRNA-29c质粒转染膀胱癌T24细胞,RT-PCR测定转染T24细胞中miRNA-29c的表达量,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭力.结果 膀胱癌组织中miRNA-29c相对表达量(0.41±0.17)明显低于癌旁组织(1.00 ±0.00) (P ＜0.05).A组的miRNA-29c相对表达量(354.36±13.54)明显高于B组(1.21±0.02)和C组(1.00 ±0.01) (P ＜0.05).A组细胞早期凋亡率(25.63±0.86)％和总凋亡率(26.21±0.25)％均明显高于B组[(8.01±0.15)％、(8.69±0.13)％]和C组[(6.52±0.12)％、(6.81±0.16)％,P＜0.05].A组细胞吸光度(A)值(0.589±0.302)明显低于B组(0.823±0.354)和C组(0.921±0.424,P＜0.05).A组细胞侵袭数(56.24±2.15)明显低于B组(92.31±2.76)和C组(113.24±12.17,P ＜0.05).T24 A组c-myc蛋白表达量(0.39±0.03)低于T24 B组(1.33±0.23)和C组(1.28±0.17,P＜0.05).结论 膀胱癌组织巾miRNA-29c的表达量下降,miRNA-29c能够促进膀胱癌细胞凋亡,抑制膀胱癌细胞增殖,降低膀胱癌细胞的侵袭力,miRNA-29c抑制膀胱癌细胞增殖可能和蛋白激酶B(Akt)通路有关.
