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QT延长综合征HERG基因新突变位点E505D的功能检测
目的研究中国人QT延长综合征2型(LQT2)HERG基因突变(E505D)导致的功能改变.方法将HERG基因野生型cRNA和突变型(E505D)cRNA分别和同时注射到非洲爪蟾卵母细胞,采用双电极电压钳技术记录非洲爪蟾卵母细胞膜上电流的表达,了解基因突变对电流的影响.结果单独注射突变型cRNA记录到的电流与注射双蒸水记录到的电流差异无显著性.野生型和突变型cRNA共同注射记录到的电流显著低于单独注射野生型cRNA,电流改变呈负电位占优势的方式.结论HERG基因突变使快速激活延迟整流性钾通道电流减小,心室复极时间延长,QTc延长,证实HERG基因突变与LQT2相关.
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阿托伐他汀预处理对心肌保护作用的实验研究
目的 观察阿托伐他汀(ATV)预处理的心肌保护效应,探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和线粒体膜ATP敏感性钾通道(KATP)在其中的作用以及这两个环节的相互关系.方法 将兔随机分成缺血再灌注模型对照组(对照组)、ATV组、ATV复合iNOS阻断剂S-甲基异琉脲硫酸盐组(ATV+SMT组)、S-甲基异琉脲硫酸盐组(SMT组)、ATV复合线粒体膜KATP通道阻断剂5-羟癸酸组(ATV+5-HD组)、5-羟癸酸组(5-HD)组.进行40 min局部缺血和240 min再灌注,观察各组心肌梗死范围、血液生物化学、一氧化氮合酶、线粒体ATP合成能力.结果 3天阿托伐他汀预处理(10 mg·kg-1·d-1)使心肌梗死范围、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH-1)分别下降26.3%、31.4%、19.1%,使iNOS、线粒体ATP合成能力分别提高102.6%和46.8%.ATV+SMT组心肌梗死范围、CK-MB、LDH-1、iNOS、线粒体ATP合成能力和对照组无明显差异.ATV+5-HD组心肌梗死范围、CK-MB、LDH-1、线粒体ATP合成能力和对照组无明显差异,ATV+5-HD组iNOS和ATV组相似,均明显高于对照组(P＜0.01).结论 阿托伐他汀预处理通过上调iNOS和激活线粒体膜KATP产生心肌保护作用,且iNOS是线粒体膜KATP的上游途径.
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急性冠状动脉综合征患者外周血CD4+T细胞及CD28null/CD28+亚型活化后Kv1.3钾通道的表达和意义
目的 研究急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血中CD4+T细胞及CD28null/CD28+亚型活化前后Kv1.3钾通道数目的 变化以及Kv1.3钾通道阻滞剂对CD4+T细胞活化表达的影响,探讨Kv1.3钾通道在不稳定斑块中的意义.方法 用免疫磁珠法分离出27例ACS患者外周血中的CD4+T细胞,其中12例进一步分出亚型CD4+CD28null和CD4+CD28+T细胞,采用全细胞膜片钳技术记录细胞活化前及经CD3抗体活化72 h后的Kv1.3钾电流.CD4+T细胞活化时分别加入终浓度为0.1、1、10 nmol/L特异性Kv1.3钾通道阻滞剂rMargatoxin(rMgTX),共同培养72 h后用反转录-PER法检测干扰素-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α及颗粒酶B mRNA的表达.结果 活化后CD4+、CD4+CD28null、CD4+CD28+T细胞的Kv1.3钾通道的峰电流均明显增加,细胞平均通道数分别增加约90%、60%、80%[活化前后每个细胞的通道数分别为(402±88)个比(752±275)个、(553±328)个比(874±400)个、(392±133)个比(716±251)个,均P<0.05].活化前CD4+CD28nullT细胞Kv1.3钾通道的平均数目比CD4+CD28+T细胞多约40%(P<0.05),活化后两者差异无统计学意义(P=0.102).不同浓度的rMgTX均下调CD4+T细胞活化后干扰素-γ、TNF-α、颗粒酶B mRNA的表达,各浓度组间干扰素-γ、TNF-α、颗粒酶B mRNA的表达差异均有统计学意义(均P<0.01),浓度越高,各mRNA表达越低.结论 ACS患者外周血CD4+T细胞及CD28null/CD28+亚型活化后Kv1.3钾通道表达增加,特异性Kv1.3通道阻滞剂rMgTX呈浓度依赖性地抑制CD4+T细胞活化时干扰素-γ、TNF-α及颗粒酶B mRNA的表达,提示CD4+T细胞特别是CD4+CD28nullT细胞的Kv1.3钾通道可作为预防动脉粥样斑块不稳定的潜在治疗靶点.
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急性冠状动脉综合征患者的CD4+CD28null T淋巴细胞电压门控性Kv1.3钾通道数量增加
目的 运用膜片钳技术检测急性冠状动脉综合征(ACS)患者的CD4+CD28nullT淋巴细胞Kv1.3钾通道的数量是否增加,探讨CD4+CD28nullT淋巴细胞上Kv1.3钾通道的表达.方法 选择17例ACS患者,11例年龄、性别匹配的正常体检者作为对照.运用荧光染色标记及膜片钳技术检测单个T淋巴细胞(CD4+CD28nullT淋巴细胞和CD4+CD28+T淋巴细胞)上Kv1.3钾通道的数量,比较Kv1.3通道在两种细胞上的差别.结果 ACS患者的CD4+CD28nullT淋巴细胞比例为(6.97±2.05)%,明显高于对照组的(1.38±0.84)%(P<0.05).ACS患者的CD4+CD28nullT淋巴细胞数量与hsCRP浓度呈正相关(r=0.52,P<0.05).ACS患者CD4+CD28nullT淋巴细胞Kv1.3通道的电导、密度、数量明显高于对照组CD4+CD28+T淋巴细胞(P<0.01).而两组CD4+CD28+T淋巴细胞间Kv1.3通道的电导、密度、数量差异无统计学意义(P>0.05).结论 ACS患者CD4+CD28nullT淋巴细胞明显增多.ACS患者CD4+CD28nullT淋巴细胞上Kv1.3钾通道数量比自身和对照的CD4+CD28+T淋巴细胞明显增多,CD4+CD28nullT淋巴细胞的功能可能与Kv1.3钾通道增多相关.
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辛伐他汀对心力衰竭家兔左室瞬间外向钾通道表达的影响
目的 研究辛伐他汀对心力衰竭(心衰)家兔左室瞬间外向钾通道表达的影响.方法 通过结扎家兔冠状动脉左前降支建立心衰模型.随机分成辛伐他汀组(10 mg·kg-1·d-1)、心衰组和假手术组.10周后应用超声心动图和有创血流动力学检查进行心室重构及心功能评价.在完成血流动力学指标测定后,立即取出心脏,切取左室远离梗死部位心肌组织液氮冻存.应用半定量-聚合酶链式反应和Western blot法检测各组家兔左室电压门控钾通道(Kv通道)α亚单位Kv1.4、4.2和4.3 mRNA与蛋白表达.结果 心衰组家兔左室Kv通道α亚单位Kv1.4、4.2和4.3 mRNA(目的 基因/GAPDH分别为0.48±0.09,0.37±0.07,0.42±0.11)和蛋白(目的蛋白/β-actin分别为0.33±0.09,0.22±0.07,0.29±0.11)表达显著低于假手术组(目的基因/GAPDH分别为0.85±0.08,0.66±0.07,0.67±0.08;目的蛋白/β-actin分别为0.68±0.13,0.53±0.15,0.49±0.10),P均＜0.01;而辛伐他汀组(目的基因/GAPDH分别为0.77±0.10,0.50±0.10,0.57±0.12;目的蛋白/β-actin分别为0.58±0.10,0.36±0.10,0.43±0.12)显著高于心衰组,P均＜0.01.结论 辛伐他汀能够防止心衰家兔左室瞬间外向钾通道表达的下调.
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大鼠压力负荷性心力衰竭进展过程中三磷酸腺苷敏感性钾通道功能观察
目的 建立压力负荷性心力衰竭(心衰)大鼠模型,在模拟缺血的条件下,研究心衰发展的不同阶段大鼠左室心肌细胞膜三磷酸腺苷敏感性钾通道(K_(APT)通道)的功能变化.方法 雄性Wistar大鼠被随机分配到4周假手术组(F4)11只、12周假手术组(F12)10只、4周手术组(T4)13只和12周手术组(T12)10只.使用腹主动脉缩窄法建立大鼠心衰模型.通过右侧颈总动脉插管记录血流动力学指标.使用改良的Langendorff法分离大鼠左室心肌细胞.应用全细胞膜片钳技术,在电压钳模式下,记录F4、T4、F12、T12各组大鼠左室心肌细胞在正常状态及模拟缺血液灌流条件下K_(ATP)通道电流情况,比较0 mV电压下各组电流密度大小.结果 动脉收缩压、舒张压及平均动脉压从术后4周开始明显升高,但是到12周的时候有所降低.左心室舒张末压和左心室内压上升/下降大速率在T4组没有明显变化,在T12组左心室舒张末压明显升高而左心室内压上升/下降大速率明显降低.膜片钳实验结果显示,基础状态下,全细胞膜电流密度在各组之间差异均无统计学意义,但是在模拟缺血液灌流25 min时,T12组大鼠K_(ATP)通道的开放幅度比F12组明显增加,电流密度明显增大[(28.11±3.91)pA/pF比(11.55±1.17)pA/pF,P<0.01],而T4组与F4组之间差异无统计学意义[(14.09±5.74)pA/pF比(11.74±3.68)pA/pF,P>0.05].无论是T12组还是T4组,大鼠心肌中K(ATP)通道的基因表达并没有增多.结论 成功构建压力负荷性大鼠心衰模型,T4组心肌肥厚,T12组呈慢性心衰.心肌细胞膜K_(ATP)通道在慢性心衰期对缺血的敏感性增强,全细胞膜电流明显增大,而这种反应发生在心肌细胞K_(ATP)通道表达增多之前.
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快速起搏大鼠心房肌细胞L-型钙通道及钾通道Kv4.3的表达变化
目的利用原代培养的心房肌细胞建立快速起搏模型,研究L-型钙通道及钾通道Kv4.3在快速起搏早期的表达变化.方法原代培养大鼠心房肌细胞,并建立快速起搏细胞模型,利用RT-PCR以及Western-blot方法检测L-型钙通道α1c及钾通道Kv4.3在快速起搏3、6、12、24 h后mRNA和蛋白的表达变化.结果快速起搏6 h后L-型钙通道α1c的mRNA和蛋白表达较起搏前持续降低,并于24 h时达到低值;而钾通道Kv4.3 mRNA和蛋白的表达在快速起搏12 h后降低,并且在其后保持相对稳定的水平.结论快速起搏早期,原代培养心房肌细胞L-型钙通道α1c及钾通道Kv4.3的mRNA和蛋白表达均出现不同程度的降低,提示其发生了离子通道重构,并且可能是电重构的分子基础.
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心房颤动患者KCNQ1、KCNE1和KCNE4基因单核苷酸多态性研究
目的心房颤动(房颤)与缓慢型延迟整流钾离子流(IKs)密切相关,该研究探讨房颤与IKs相关基因KCNQ1、KCNE1及KCNE4单核苷酸多态性(SNP)的相关性.方法采用关联分析,入选汉族对象,房颤病例142例,社区对照120例,病区对照118例.选择亚洲人群特异的非同义SNP KCNQ1 P448R、KCNQ1 R519H、KCNQ1 G643S、KCNE1 G38S及KCNE1 D85N,对KCNE4基因进行测序,以发现可能存在的SNP.采用限制性内切酶片段长度多态性法确定基因型.结果 KCNQ1 P448R、KCNQ1 R519H、KCNQ1 G643S、KCNE1 G38S及KCNE1 D85N在汉族社区人群中的频率(少见等位基因频率)分别为0.079、0、0.042、0.317、0.004,未证实这些SNP与房颤相关.在KCNE4基因中发现E145D多态,在汉族社区人群中频率高达0.271,logistic回归分析与房颤显著相关(OR＝1.66,P＝0.044).结论 KCNQ1 P448R、KCNQ1 R519H、KCNQ1 G643S、KCNE1 G38S及KCNE1 D85N多态性与房颤无关,KCNE4 E145D与房颤有关,其对IKs的功能影响值得进一步研究.
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犬右心室心外膜下细胞瞬间外向钾电流特性的研究
目的探讨犬右心室心外膜下(Epi)细胞复极1期瞬间外向钾电流(Ito1)的电生理特性.方法应用全细胞钳制技术,对右心室Epi细胞复极1期Ito1的电流强度、动力学过程和动作电位切迹进行定量观察.结果 (1)犬右心室Epi细胞具有强大的Ito1,其激活过程呈明显的电压依赖性,在37℃、0.2Hz和去极化试验电压为+70 mV时,Epi细胞的峰值Ito1强度和密度分别达(4 150±1 780 )pA和(31±11.4 )pA/pF,其激活和失活动力学过程符合Boltzmann分布;(2)犬右心室Epi细胞Ito1具有明显的频率依赖性,即在基础刺激周长增加时,Ito1明显增大,并和动作电位的"尖峰-穹隆"幅度的增加相对应;(3)温度对Ito1强度的影响明显,在去极化试验电压为+70 mV、0.2 Hz和温度为22℃、37℃条件下,右心室Epi细胞的Ito1强度和密度分别为(2 380±1 050)pA与(18±7.6)pA/pF 、(4 150±1 780)pA与(31±11.4)pA/pF,差异明显.结论犬右心室Epi细胞存在强大的Ito1,这种具有明显电压依赖性、频率依赖性和温度依赖性的Ito1及其参与介导的 "尖峰-穹隆"状动作电位图形是右心室Epi细胞复极1期一个突出的电生理特点.
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二十二碳六烯酸对Sprague-Dawley大鼠心室肌细胞动作电位和瞬时外向钾离子流的作用
目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)对Sprague-Dawley大鼠心窜肌细胞动作电位(AP)和瞬时外向钾离子流(Ito)的作用.方法 采用酶消化法获得大鼠耐钙心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术分别记录加入 DHA 10、20、40、60、80、100、120 和200 μmol/L 后大鼠心室肌细胞AP和Ito的变化.结果 (1)当 DHA 浓度大于30 μmol/L时,动作电位时程(APD)逐渐延长,且呈浓度依赖性(P<0.05);当 DHA 浓度在0～30 μmoL/ L 时,随着 DHA 浓度增加,APD 延长不明显(P>0.05);加入不同浓度DHA后,在5 min内 APD 随时间延长而逐渐延长,5 min后 APD 基本固定.(2)加入不同浓度DHA 后,随着 DHA 浓度增加,Ito逐渐降低,DHA对Ito呈浓度依赖性阻滞(P<0.05).DHA 对Ito半效抑制浓度为58.3 μmoL/ L.结论 当加入不同浓度 DHA 后,APD 随着 DHA 浓度增加而逐渐延长,Ito逐渐降低,DHA 对 AP 和Ito的影响可能足其抗心律失常作用的机制之一.
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吗啡对大鼠离体工作心脏延迟性保护作用的实验研究
目的 研究吗啡预处理对大鼠离体工作心脏缺血再灌注的延迟性保护作用,并探讨其机制.方法 48只Wistar大鼠随机分为6组,每组8只,即对照组、吗啡组、纳络酮组、格列本脲组、吗啡+纳络酮组和吗啡+格列本脲组.腹腔注射给药24 h后,建立离体工作心脏模型,4℃ St.ThomasⅡ停搏液诱导心脏停搏30 min,复灌45min.观察心脏缺血再灌注前后血流动力学恢复率、心肌酶及心肌超微结构的变化.结果 吗啡组的心排出量(CO)恢复率、左室发展压(LVDP)恢复率、左室压力微分(±dp/dtmax)恢复率及乳酸脱氢酶(LDH)漏出量均优于对照组(P＜0.05);30 min缺血再灌注后心肌超微结构损伤明显减轻;纳络酮和格列本脲可以完全阻断吗啡的作用,而单独使用纳络酮或格列本脲对大鼠心脏不产生影响.结论 吗啡预处理对缺血心肌可以产生延迟性保护作用,其作用与阿片受体和心肌细胞ATP敏感性钾通道(KATP通道)介导有关.
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电压依赖性钾通道和逼尿肌不稳定关系的实验研究
目的 观察电压依赖性钾(Kv)通道在逼尿肌不稳定(DI)中的表达变化及作用,探讨DI的发生机理及Kv通道作为治疗靶点的可行性. 方法 25只雌性Wistar大鼠建立膀胱出口部分梗阻模型,6周后行膀胱测压获得DI模型.制备逼尿肌肌条,离体收缩实验观察Kv通道阻断剂对逼尿肌肌条自发性收缩功能的影响;RT-PCR技术检测逼尿肌中Kv通道mRNA的表达.10只正常大鼠为对照组. 结果 Kv通道阻断剂4-氨基吡啶干预后,对照组逼尿肌肌条的收缩频率、幅度变化率分别为(84.3±23.8)%、(45.9±16.1)%,DI组分别为(34.2±11.4)%、(14.2±5.1)%,DI组均低于对照组(P《0.05).对照组逼尿肌中Kv通道亚型Kv2.1、Kv1.5的相对含量分别为0.75±0.11、0.61±0.09,DI组分别为0.65±0.09、0.39±0.07,DI组Kv通道含量减少,其中Kv1.5减少更明显(P《0.01). 结论 Kv通道反馈调节逼尿肌收缩,此机制在DI组明显减弱,可能导致逼尿肌收缩过度活跃.DI组Kv通道作用下调可能与逼尿肌中Kv通道亚型特别是Kv1.5的mRNA表达减少有关.Kv1.5也许可以作为治疗DI的较好靶点.
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线粒体ATP敏感性钾通道在大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用及机制研究
目的 探讨线粒体ATP敏感性钾通道在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制.方法 建立70%的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,SD大鼠随机分为6组,假手术组(sham,S),缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion,IR)组,对照组(control,C),二氮嗪(diazoxide,DZ)预处理组,DZ+5-羟基葵酸(5-hydroxydecanoate,5-HD)预处理组,以及5-HD预处理组.再灌注后,取静脉血检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,取肝脏组织TUNEL法检测缺血肝脏细胞凋亡指数(apoptotic index,AI),免疫组化检测Bcl-2,Bax,caspase-3表达.结果 其他各组与S组相比,血清ALT、AST水平升高(P＜0.05),C组与IR组之间ALT、AST水平无差异(P＞0.05).DZ预处理组大鼠血ALT、AST水平较IR组明显改善,肝细胞凋亡减少,为(14.5±4.5)%(P＜0.05),Bax及caspase-3表达降低,分别为15.7±5.4,15.1±6.3(P＜0.05),而Bcl-2表达升高(18.5±5.8)(P＜0.05),5-HD能阻断DZ的保护作用,使肝细胞凋亡(25.6±7.9)%增加,Bcl-2表达(13.4±5.7)下降,caspase-3表达(25.0±6.6)升高(P＜0.05).单独应用5-HD时与IR组相比肝脏细胞凋亡(30.4±8.7)%和caspase-3(33.8±7.1)表达增加(P＜0.05),Bax(31.2±7.0)和Bcl-2(9.1±3.6)差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 线粒体ATP敏感性钾通道的开放对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,它可能是通过上调Bcl-2表达,下调Bax和caspase-3表达,抑制肝脏细胞凋亡而起作用的.
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药物预处理与诱导超极化对离体心脏的保护研究
℃预处理ATP含量较高；而经吡那地尔处理的4组，丙二醛则不同程度的低于对照组。结论吡那地尔诱导心脏超极化停跳以及药物预处理，有助于降低心肌ATP的消耗，减少脂质过氧化物的形成，明显改善离体兔心脏缺血/再灌注后期心功能。
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二氮嗪改善供心超时冷保存效果的实验研究
目的研究二氮嗪在离体大鼠心脏冷保存中的作用,探讨线粒体ATP敏感性钾通道(Mitochondrial ATP-sensitive potassium channel,MitoKATPC)开放剂在改善供心功能中的可能机制,及超时(超过公认5h)冷保存供心的有效性.方法 SD大鼠随机分7组.对照组、二氮嗪(DE)组,以上两组又各分为冷保存3、5、10h组和DE+5-羟基葵酸盐(5-HD)组.采用Langendorff离体鼠心灌注法,复灌60min,观察心脏血流动力学、冠脉流出液心肌酶漏出量及心肌水含量变化,并做心肌超微结构检查.结果 (1)冷保存3、5、10h后,DE组LVDP、±dp/dtmax、CF恢复率在多个复灌时间点上均优于对照组,且心肌酶漏出量明显减少.(2)5、10h保存组中,DE处理后LVEDP的变化明显小于对照组.(3)与对照组相比,保存10h后DE组的心肌水含量明显降低,且心肌超微结构优于对照组.(4)与保存5h对照组相比,保存10h后DE组在复灌期可显著抑制LVEDP的增高;仅LVDP和-dp/dtmax恢复率较保存5h对照组低.(5)DE的上述作用可被MitoKATPC的特异性阻断剂5-HD抵消.结论 Celsior保存液中加入DE 能明显改善离体大鼠心脏冷保存效果,且供心的冷缺血安全时间可安全延长至10h,其保护机制涉及MitoKATPC的开放.
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钙激活性中电导钾离子通道在子宫内膜癌组织中的表达及其在细胞增殖中的作用
目的 探讨子宫内膜癌组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)的表达变化及其在子宫内膜癌细胞增殖中的作用.方法 应用蛋白印迹(western blot)法、RT-PCR技术来研究13份正常子宫内膜及25份子宫内膜癌组织中IKCal mRNA和蛋白的表达;利用IKCal的阻断剂--克霉唑(clotrimazole),使用小分子干扰RNA(siRNA)的RNA干扰技术和氚胸腺嘧啶核苷掺入试验等观察子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖的变化.结果 子宫内膜癌组织中IKCal mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为84%、0.89±0.52)明显高于正常子宫内膜组织(分别为8%、0.14±0.12,P均＜0.01).子宫内膜癌组织中IKCal蛋白的阳性表达率及表达水平(分别为80%、1.18±0.41)也明显高于正常子宫内膜组织(分别为15%、0.71±0.26,P均＜0.01).子宫内膜癌组织中IKCal mRNA和蛋白的表达水平与手术病理分期无关(P＞0.05),但与病理分级有关(P＜0.05).克霉唑呈剂量和时间依赖性方式阻滞HEC-1A细胞的增殖.与转染阴性对照siRNA的细胞比较,转染IKCal siRNA的HEC-1A细胞IKCal蛋白的表达水平降低,为转染阴性对照siRNA的细胞的(48.27±9.07)%.与转染阴性对照siRNA的HEC-1A细胞比较,转染IKCal siRNA能减少细胞的增殖(P＜0.05).结论 IKCal的异常表达与子宫内膜癌的发展密切相关,降低其表达可减少子宫内膜癌细胞的增殖.
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电压门控钾离子通道对卵巢黄素化颗粒细胞增殖、分泌及凋亡的影响
目的 探讨电压门控钾离子通道(Kv)对人绒毛膜促件腺激素(hCG)诱导的卵巢黄素化颗粒细胞增殖、分泌及凋亡的影响.方法 收集2007年11月至2008年2月行体外受精-胚胎移植患者的卵泡液共25份,密度梯度法获得卵巢黄素化颗粒细胞,采用RT-PCR技术检测颗粒细胞中KvmRNA的表达.将培养贴壁后的颗粒细胞按干预方式分为空白组、4氨基吡啶(4-AP)组、hCG组和hCG+4-AP组共4组,hCG和4-AP的终浓度分别为1250 U/L、5 nmol/L.培养24 h后,采用化学发光法测定各组孕酮水平;采用流式细胞仪和分光光度法检测各组颗粒细胞的凋亡情况;采用四甲基偶氮唑监(MTT)比色法检测各组颗粒细胞的增殖、抑制情况.结果 (1)培养24 h后,空白组、4-AP组、hCG组和hCG+4.AP组颗粒细胞中的孕酮水平分别为(547 ±64)、(206 ±32)、(1991±172)和(763 ±79)nmol/L.4-AP组、hCG组分别与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);hCG+4-AP组与hCG组比较,差异也有统计学意义(P<0.01).(2)培养24 h后,4-AP组颗粒细胞抑制率为19.7%,与空白组(0)比较,差异有统计学意义(P<0.05);hCG+-AP组为34.6%,与hCG组(0)比较,差异也有统计学意义(P<0.01).4-AP组、hCG+4-AP组的颗粒细胞增殖率分别为80.3%、68.2%,分别与空白组(100%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.01);hCG组(100.4%)高于空白组,但差异无统计学意义(P>0.05).(3)培养24 h后颗粒细胞的凋亡率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)活性,4-AP组分别为(40±5)%和0.049 ±0.009,均高于空白组[(17±4)%和0.029±0.008],hCG+4-AP组[(25±4)%和0.039±0.008]也均高于hCG组[(15 ±3)%和0.022 ±0.007],差异均有统计学意义(P<0.01).结论 4-AP能够抑制卵巢黄素化颗粒细胞和经hCG诱导的颗粒细胞的孕酮分泌,町能与其抑制增殖、促进凋亡有关.Kv在卵巢黄素化颗粒细胞分泌、增殖及凋亡过程中起重要的作用.
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妊娠期糖尿病患者磺脲类药物受体1基因多态性的研究
目的探讨与妊娠期糖尿病(GDM)遗传易感性相关的磺脲类药物受体1(SUR1)基因型以及SUR1不同基因型与体重指数(BMI)、胰岛素分泌水平之间的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法,检测GDM患者35例(GDM组)、2型糖尿病的女性住院患者35例(T2DM组)、正常健康孕妇35例(正常对照组)的SUR1基因型,包括24内含子(c和t等位基因,cc、ct和tt基因型)与31外显子(A和G等位基因,AA、AG和GG基因型);用放射免疫法和葡萄糖氧化酶法测定GDM组患者空腹血糖、空腹胰岛素(INS0)水平和口服75 g葡萄糖后2 h胰岛素(INS120)水平.结果 (1)GDM组、T2DM组c等位基因频率(分别为70.0%、71.4%)均明显高于正常对照组的(52.9%),2组分别与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)GDM组、T2DM组A等位基因频率(分别为41.4%、44.3%)均明显高于正常对照组的(24.3%),2组分别与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)GDM组24内含子cc基因型患者BMI[(29.2±5.6) kg/m2]、INS0[(14.9±8.7) mU/L]、INS120[(40.2±12.1) mU/L]均显著高于ct基因型患者[BMI (25.2±4.6) kg/m2、INS0 (10.1±6.2) mU/L、INS120 (32.7±10.5) mU/L]及tt基因型患者[BMI (24.2±1.7) kg/m2、INS0 (10.0±2.3) mU/L、INS120 (28.8±8.3) mU/L],分别与ct及tt型比较,差异均有统计学意义(P<0.05),稳态模型的胰岛素抵抗指数(3.9±2.5)显著高于ct基因型患者(2.6±1.8),与ct型比较,差异有统计学意义(P<0.05).(4)GDM组31外显子AA基因型患者INS0[(15.4±3.2) mU/L]显著高于AG、GG基因型患者[分别为(12.1±4.5)、(11.5±4.8) mU/L],分别与AG及GG型比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 SUR1 24内含子等位基因c及31外显子等位基因A可能为GDM及T2DM的易感基因;SUR1 24内含子cc基因型及31外显子AA基因型可能在高胰岛素血症形成中起一定的作用.
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子宫腺肌病子宫平滑肌细胞中钾离子通道mRNA的表达及雌、孕激素对其的影响
目的 探索体外培养子宫腺肌病(AM)子宫平滑肌细胞钾离子通道的表达情况及雌、孕激素对其的调节作用.方法 选择2009年9月至2010年3月在北京协和医院行手术治疗的AM患者22例(AM组),以同期宫颈上皮内瘤变Ⅲ级切除子宫者12例作为对照组,应用逆转录PCR技术检测体外培养的子宫平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道α亚基(BKCaα)、电压依赖性钾离子通道4.3(Kv4.3)mRNA的表达及对不同浓度雌、孕激素作用的反应性.结果 AM组子宫平滑肌细胞BKCa α和Kv4.3 mRNA的表达量(分别为4.43±2.05、4.52± 1.97)显著高于对照组(分别为0.83±0.25、0.86±0.19),分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).10.0 nmol/L 17β-雌二醇使AM组子宫平滑肌细胞BKCaαmRNA表达量(0.56±0.27)显著下降,与未用药(1.01±0.35)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);0.1、1.0 nmol/L浓度的17β-雌二醇使对照组子宫平滑肌细胞Kv4.3 mRNA表达量明显下降(分别为0.17±0.10、0.13±0.08),与未用药(0.55±0.29)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).0.1μmol/L孕酮使对照组子宫平滑肌细胞BKCaαmRNA表达量(0.44±0.24)和Kv4.3 mRNA表达量(1.29±0.51)明显升高(P＜0.05);而AM组使用不同浓度孕酮后BKCaα和Kv4.3 mRNA的表达量均无变化(P＞0.05).结论 AM子宫平滑肌细胞存在钾离子通道的异常表达,其受高浓度雌激素的调节并可能存在孕激素抵抗.
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4-氨基吡啶对卵巢上皮性癌细胞增殖的影响
目的 探讨4-氨基吡啶(4-AP)对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制作用.方法 应用RT-PCR技术分析SKOV3细胞膜上电压门控式钾离子通道(Kv)mRNA的表达;应用膜片钳记录4-AP对SKOV3细胞膜上电压门控式钾离子电流(IK)的抑制作用;应用流式细胞仪检测4-AP对SKOV3细胞增殖周期的影响;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法证实4-AP对SKOV3细胞增殖的抑制作用.以未加4-AP的SKOV3细胞为对照.结果 RT-PCR技术检测显示,SKOV3细胞表达Kv mRNA;膜片钳记录显示,5 mmol/L的4-AP可以降低IK值52.5%;流式细胞仪检测结果显示,应用5 mmol/L的4-AP作用72 h后,SKOV3细胞周期分布与对照相比,G0/G1期细胞由39.7 %增加到62.3%;S期和G2/M期细胞的比例下降,分别由57.3%、3.0%下降到36.2%、1.4%(P＜0.05);MTT比色法显示,0.1、1、5、10、15、20 mmol/L的4-AP均能抑制SKOV3细胞的增殖,抑制率分别为17.5%、35.0%、54.6%、69.1%、71.2%、72.8%,各浓度分别与对照比较,差异均有统计学意义(P＜0.01),且抑制程度与药物浓度呈正相关关系.结论 4-AP能够抑制SKOV3细胞的增殖,Kv在卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞的增殖过程中起着重要作用.
