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尿纤溶酶原激活物和整合素在甲状腺癌组织中的表达
目的 研究尿纤溶酶原激活物(uPA)和整合素β4(integrinβ4)在甲状腺乳头状癌组织中的不同表达,总结其发生、发展及侵袭规律和对临床的指导意义.方法 采用免疫组化SP法检测36例甲状腺乳头状癌和30例良性甲状腺肿瘤组织及腺瘤旁正常甲状腺组织中uPA和integrinβ4表达,从良恶性、临床分期、淋巴结转移等不同方面分别进行对照分析,比较其有无差异.结果 甲状腺瘤组织的uPA和integrinβ4表达高于腺瘤旁正常甲状腺组织(P＜0.05),甲状腺乳头状癌组织中uPA和integrinβ4表达明显高于良性甲状腺肿瘤(P＜0.05),且和临床分期相关.周围淋巴结转移组的uPA和integrinβ4表达明显高于无转移组(P＜0.05).甲状腺乳头状癌组织中uPA和integrinβ4表达也有一定相关性.结论 甲状腺乳头状癌组织中uPA和integnnβ4表达可能对甲状腺乳头状癌的侵袭程度、淋巴结转移情况及预后估计等有一定的参考价值.
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慢病毒介导β4整合素shRNA对人非小细胞肺癌H460SM细胞皮下移植瘤生长的影响
目的:研究慢病毒介导的β4整合素(integrinβ4,ITGB4) shRNA对人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:采用实时荧光定量-PCR (real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法检测ITGB4在不同人NSCLC细胞中的表达水平；慢病毒介导ITGB4 shRNA抑制NSCLC H460SM细胞中ITGB4的表达,再用RFQ-PCR和蛋白质印迹法检测ITGB4的表达水平,评价基因沉默效率；裸鼠随机分为3组,皮下分别接种H460SM-NS细胞(对照组)、稳定表达ITGB4 shRNA的H460SM-68和H460SM-71细胞.每隔1d测量裸鼠体质量和肿瘤大小,比较各组裸鼠肿瘤生长情况.处死裸鼠,剥离肿瘤,测量肿瘤大小和质量.结果:ITGB4在大多数人NSCLC细胞中均有表达,其中大细胞肺癌H460SM和NCI-H460细胞中ITGB4表达量明显高于NCI-H661细胞(P＜0.01),H460SM细胞中ITGB4表达水平明显高于亲本NCI-H460细胞(P＜0.01):ITGB4 shRNA转染组细胞中ITGB4的表达水平明显低于阴性对照组细胞(P＜0.01); ITGB4 shRNA转染组皮下移植瘤生长速度明显低于阴性对照组(P＜0.01).结论:ITGB4表达可能与人NSCLC细胞的致瘤、侵袭、转移的表型有关；抑制ITGB4的表达,可以抑制人NSCLC细胞H460SM裸鼠皮下移植瘤的生长.
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屋尘螨和卵蛋白对小鼠气道上皮粘附分子整合素β4和细胞间粘附分子-1表达的影响
为了探明不同变应原与气道粘附分子之间的关系,本研究采用屋尘螨(house dust mite,HDM)和卵蛋白(ovalbumin,OVA)分别致敏BABL/c小鼠,采用Buxco小动物肺功能分析系统观察气道的反应性,计数外周血白细胞数目,肺部HE染色观察气道的病理改变,利用免疫组织化学技术检测气道上皮粘附分子整合素β4 (integrin β4,ITGB4)和细胞间粘附分子-1(inter-cellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达.结果显示,与对照组比较,HDM组和OVA组小鼠外周血白细胞数目明显增加,肺部炎症细胞浸润,气道上皮ITGB4表达下调,而ICAM-1表达上调.然而,OVA组小鼠气道上皮ICAM-1的表达上调较HDM组更为明显,炎症细胞的浸润也更严重.采用siRNA沉默16HBE人支气管上皮细胞株ITGB4的表达后,ICAM-1的表达上调.以上结果均提示,变应原能够通过改变气道粘附分子谱来影响肺内炎症反应.
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整合素β4研究进展
整合素又名整联蛋白,是一种介导细胞与其外环境如细胞外基质之间连接的跨膜受体.整合素β4因其特殊的结构,发挥着诸多功能:与整合素α6亚单位组成α6β4,参与构成半桥粒;介导细胞与细胞外基质相互作用、细胞与细胞间相互作用;介导细胞的增殖与存活,迁移和侵袭;通过激活多条信号通路参与各种疾病进程.本文将对整合素β4的结构组成、生理功能及其在呼吸系统、肿瘤、神经系统等相关疾病中的作用进行综述.
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不同分子亚型乳腺浸润性导管癌组织中Integrinβ4、S100A4的表达及意义
目的 探讨不同分子亚型乳腺浸润性导管癌组织中整合素β4(Integrinβ4)、S100钙结合蛋白A4(S100A4)的表达及意义.方法 以2008年2月-2013年1月217例乳腺浸润性导管癌患者为研究对象,免疫组织化学法检测各癌组织中Integrinβ4、S100A4的表达情况,并分析其与分子分型的关系.结果 不同分子亚型乳腺浸润性导管癌的肿瘤原发灶、淋巴结转移情况及组织学分级差异具有统计学意义(P＜0.05).Integrinβ4在Luminal A型、Luminal B型(HER2-)、Luminal B型(HER2+)、Erb-B2过表达型、基底样型中的阳性表达率分别为17.39％、5.88％、6.06％、65.96％、67.86％;S100A4阳性率分别为26.09％、29.41％、27.27％、72.34％、71.43％.Integrinβ4蛋白表达在各型中的阳性表达均有显著差异,S100A4蛋白在LuminalA型、Erb-B2过表达型及基底样型中均有显著差异(P＜0.05或P＜0.01).结论 Integrinβ4、S100A4在Erb-B2过表达型、基底样型乳腺浸润性导管癌中高度表达,可能与肿瘤细胞浸润和转移有关.
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甲状腺乳头状癌的生长模式与临床病理特征及整合素β4表达的相关性
目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)生长模式与肿瘤临床病理特征的相关性,并分析整合素β4的表达水平与PTC生长模式间的关系.方法 59例经典型PTC依据其生长模式,分为膨胀型、局部浸润型及弥漫浸润型3组;分析其与肿瘤大小、腺外浸润、淋巴结转移及BRAFV600E突变等因素的关系;免疫组化半定量评价3组间整合素β4的表达状况.结果 (1)经典型PTC中,局部浸润型模式常见(64%,38/59),弥漫浸润型次之(24%,14/59),膨胀型少见(12%,7/59).(2)PTC浸润性生长模式与肿瘤腺外浸润密切相关(χ2=12.58,P<0.05).弥漫浸润型腺外浸润的比例高(93%,13/14),局部浸润型居中(57%,20/35),膨胀型少见(14%,1/7).(3)整合素β4表达水平与PTC生长模式(F=20.07,P<0.05)及腺外浸润(t=2.57,P<0.05)均密切相关.β4在弥漫浸润型和局部浸润型外周区的表达高于膨胀型(P<0.05)与局部浸润型中心区(P<0.05);膨胀型与局部浸润型中心区相比,β4表达无差异(P>0.05).(4)与3种生长模式相对应的淋巴结转移灶内的癌组织,彼此间β4的表达水平差异无显著(χ2=0.344,P>0.05).转移性肿瘤组织β4的表达强度与膨胀型及局部浸润型中心区的水平相当,但明显低于弥漫浸润型与局部浸润型外周区的水平.结论 (1)PTC浸润性生长方式与肿瘤的高腺外浸润密切相关,特别是弥漫浸润型PTC,具有更强的腺外侵袭性.建议病理报告中列入PTC生长模式的描述,以提示其生物学行为.(2)整合素β4高表达参与/介导了PTC的间质浸润,并可能是衔接肿瘤浸润性生长模式与高侵袭生物行为间的重要分子机制.(3)PTC生长模式与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移及BRAFV600E突变等因素无统计学相关.
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整合素β4在人唇黏膜和颊黏膜的表达差异及其意义
目的:探讨整合素β4在人唇黏膜和颊黏膜基底膜区的表达水平,并分析其与上皮钉突的形态和丰度间的关系.方法:分别选择6例正常唇黏膜和6例正常颊黏膜,通过HE染色和免疫组化,观察两种黏膜上皮钉突的形态和丰度以及整合素β4在上皮基底膜区的染色程度.结果:HE染色显示唇黏膜的上皮钉突长度短,粗细不均,分布密集;颊黏膜的上皮钉突的形态结构不明显,分布较稀疏.免疫组化染色显示整合素β4在唇黏膜的基底膜区表现为棕黄色;整合素β4在颊黏膜的基底膜区着色较浅,未见明显特征.上皮钉突在唇黏膜的形态和丰度比在颊黏膜明显,整合素β4在唇黏膜的表达水平也高于在颊黏膜的表达水平.结论:整合素β4在唇黏膜和颊黏膜的基底膜区的表达水平有差异,初步推测整合素β4的表达水平与上皮钉突的形态和丰度有一定的对应关系.
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siRNA干扰整合素β4的表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响
目的 采用RNA干扰(Small interference RNA,siRNA)技术抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞中整合素β4 (integrin β4)基因表达,观察其对细胞侵袭和迁移能力的影响.方法 选用MDA-MB-231乳腺癌细胞为研究对象,应用siRNA技术沉默癌细胞Integrin β4 mRNA的表达,Real-time PCR和Western blotting方法分别检测未转染Integrin β4 siRNA的乳腺癌细胞组(简称空白对照组)及转染Integrin β4 siRNA的乳腺癌细胞组(简称Integrin β4 RNA干扰组)的Integrin β4 mRNA和蛋白表达水平;Transwell实验检测两组细胞的侵袭及迁移能力.结果 与空白对照组相比,Integrin β4 RNA干扰组Integrinβ4的mRNA及蛋白表达水平分别降低了86％(P＜0.01)和89％ (P＜0.01),细胞侵袭和迁移能力下降(P＜0.05).结论 应用siRNA干扰技术抑制Integrinβ4表达可使MDA-MB-231细胞迁移及侵袭能力降低,提示Integrinβ4在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用.
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卵巢上皮性肿瘤组织整合素β4表达水平的检测
目的:检测整合素β4在卵巢上皮性肿瘤中的表达水平,分析其作为卵巢肿瘤早期诊断靶标的可能性.方法:取不同病理类型卵巢上皮性肿瘤组织,Western blot 检测整合素β4的表达水平.结果:相对于正常组织,整合素β4在良性卵巢上皮性肿瘤组织中升高的程度较为轻微,在该组织交界性肿瘤中的升高较良性的明显,在恶性肿瘤中的表达上调十分明显;随着分化水平的下降,整合素β4的表达相应增高;在临床早期,整合素β4的表达就有所增高,而在有转移的临床分期中,整合素β4的表达显著增加.结论:整合素β4的表达程度可以作为该类恶性肿瘤的早期诊断标志物;表达水平可以作为临床预后诊断的分子候选物.
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细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrin β4水解的影响
目的:研究细胞培养密度对MCF7乳腺癌细胞integrin β4水解机制.方法:常规培养高密度和低密度MCF7乳腺癌细胞,分别给予钙离子螯合剂和肝素处理,用Western blot检测不同培养密度MCF7细胞integrinβ4的水解情况;用Fluo-3 AM作为钙离子荧光探针,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子的分布.结果:Western blot检测结果显示,在低密度和高密度培养的MCF7细胞中,integrin β4的水解模式不同;在高浓度培养的细胞中,200 kD integrin β4片段产生增多;激光共聚焦扫描显微镜观察发现,低密度培养MCF7细胞中,钙离子的绿色荧光主要成团或颗粒状分布,而且与红色荧光有较多的重合,部分钙离子分布于细胞核内;在高密度培养的细胞中,钙离子在细胞质膜和细胞核中的定位较少;钙离子螯合剂BAPTA-AM处理可使200 kD integrin β4明显减少;10-6 mol/L的肝素能够减少MCF7细胞200 kD水解片段的增多,随着肝素浓度的增高,抑制效果有所增强;相对于BAPTA-AM,10-4mol/L肝素的抑制效应减弱.结论:高密度培养的MCF7细胞中,钙离子从钙库中释放,细胞外内流增多,激活calpain 2,导致200 kD integrinβ4水解片段增多.
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钙激活中性蛋白酶-2对整合素β4水解的影响
目的:观察乳腺癌细胞系MCF7细胞中,钙激活中性蛋白酶2(calpain-2)对整合素(integrin)β4水解的影响.方法:利用“短发夹”RNA(shRNA)和微小RNA (mirRNA)技术结合的calpain-2基因沉默(gene silen-cing)慢病毒质粒(GIPZ lentiviral shRNAmir)转染乳腺癌细胞株MCF7,嘌呤霉素筛选稳定沉默calpain-2基因的细胞株,细胞株传4代,用荧光显微镜观察转染效率,用蛋白质印迹(Westernblot)实验检测calpain-2基因沉默效率及integrin β4水解的情况.结果:嘌呤霉素筛选、细胞传4代,荧光显微镜下观察显示转染和筛选后,EGFP表达阳性的MCF7细胞的比例分别达到(95.6±2.6)％(空shRNAmir载体)、(97.1±1.7)％(Calpain-2 shRNAmir1)和(97.7±0.2)％(Calpain-2 shRNAmir 2),差异无统计学意义(P＞0.05);Western blot结果显示,基因沉默的MCF7细胞中calpain-2的表达被明显抑制,相对于空shRNAmir载体转染的MCF7细胞,差异有统计学意义(P＜0.01),calpain-2的表达下调到21.5％(Calpain-2 shRNAmir 1)和18.8％ (Calpain-2 shRNAmir 2),空shRNAmir载体转染的MCF7细胞中calpain-2的表达与未转染的MCF7细胞比较,差异无统计学意义(P＞0.05);比较cal-pain-2基因沉默和空shRNAmir载体转染的MCF7细胞,发现integrin β4均被水解,水解片段的分子量主要有200 kD、130和95 kD; calpain-2基因沉默后,calpain-2基因沉默MCF7细胞中200 kD的水解片段比空shRNAmir载体转染的MCF7细胞减少(P＜0.01).结论:在乳腺癌细胞MCF7中,calpain-2可能参与integrin β4的200 kD片段的形成,从而参与调整integrin β4的构象变化.
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雌二醇对三阴乳腺癌细胞integrin β4水解作用的影响
目的:研究三阴乳腺癌(TNBC) MDA-MB-231细胞中雌二醇对整合素(integrin)β4水解的促进作用.方法:常规培养MDA-MB-231细胞至指数增长期,分别给予17β-雌二醇、雌激素受体(ER)特异性阻断剂4-羟基他莫西芬(OHT)和G蛋白偶联受体30 (GPR30)特异性阻断剂G-15干预30 min,采用蛋白质印迹(Western blot)实验检测钙激活中性蛋白酶2(calpain 2)的表达和integrin β4水解的情况.结果:17β-estradiol在短时间内可促进MDA-MB-231细胞130和95kD integrin β4水解片段的产生,促进作用呈浓度依赖方式,而对calpain 2表达没有明显影响;4-OHT不能阻断17β-estradiol对integrin β4的水解作用,且其本身可促进integrin β4水解;G-15能阻断17β-estradiol对integrin β4的水解.结论:在TNBC MDA-MB-231细胞中,17β-estradiol可通过GPR30促进130和95kDintegrin β4水解片段的产生.
