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糖尿病性视网膜病变药物治疗进展-PKCβ抑制剂
β型蛋白激酶c(PKCβ)的活化在糖尿病性视网膜病变的发生和发展过程中起着关键作用.PKCβ抑制剂LY333531对视网膜正常代谢影响很小,它能有效阻止与糖尿病性视网膜病变有关的病理变化,包括视网膜渗漏及新生血管形成.Ⅰ期临床试验显示人体能耐受LY333531的治疗剂量.药代动力学预试验结果显示该药对缓解早期糖尿病性视网膜病变所致血管功能异常有明显效果.PKCβ抑制剂可延缓甚至可能逆转糖尿病性视网膜病变的过程,为早期药物治疗糖尿病性视网膜病变带来了新希望.
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PKC-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏NADPH氧化酶与SOD蛋白表达的影响
目的 研究蛋白激酶C(protein kinase,PKC)-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的影响.方法 24只SD雄性大鼠(240～260 g),采用抽签法随机分为正常对照组(normal control,NC)、糖尿病组(diabetes mellitus,DM)及LY333531(LY)治疗组.LY组灌胃给予PKC-β抑制剂LY333531[1 mg/(kg·d)]治疗4周后测量血糖、肾质量/体质量、24 h 尿蛋白、内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr)、游离15-F2t-Isoprostane、总抗氧化浓度及SOD活性.Western blotting分析NADPH氧化酶亚基P22phox与P67phox,SOD亚型Cu/Zn-SOD与Mn-SOD蛋白改变.结果 与NC组比较,DM组血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、Ccr、血浆与肾脏中15-F2t-Isoprostane、血浆总抗氧化浓度及P22phox与P67phox表达明显增加,而肾脏总抗氧化物浓度、血浆与肾脏SOD活性、Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达明显减少 (P<0.05).LY333531除对血糖与Mn-SOD的表达无显著影响外,均能显著逆转上述变化.结论 LY333531通过抑制糖尿病肾脏NADPH氧化酶的活化与表达,及促进Cu/Zn-SOD的表达而恢复SOD活性,以减少早期糖尿病肾脏的氧化损伤,从而发挥其保护肾脏作用.
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PKCβ2途径抑制药物LY333531延缓高糖诱导心肌纤维化的实验研究
目的 观察高糖对心脏成纤维细胞增殖及活化的影响及PKCβ2途径抑制剂LY333531的干预作用.方法 将大鼠心脏成纤维细胞在正常糖或高糖环境下培养,检测两组细胞的增殖数量、胶原蛋白的合成及PKCβ2蛋白的表达,并检测使用LY333531干预后心脏成纤维细胞增殖及活化指标的变化.结果 高糖可使PKCβ2蛋白表达增加,并能增加心脏成纤维细胞的增殖及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的合成,LY333531阻断PKCβ2途径后可减少成纤维细胞增殖的数量及减少胶原蛋白的合成.结论 LY333531作为干预药物抑制PKCβ2途径可以在一定程度上延缓高糖诱导的心肌纤维化过程.
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PKC βⅡ特异性抑制剂LY333531减缓心肌梗死后心肌纤维化
目的:探讨蛋白激酶CβⅡ(PKCβⅡ)特异性抑制剂LY333531对心梗后大鼠心功能和心肌纤维化的保护作用.方法:利用左冠状动脉降支(LAD)结扎制备大鼠心梗模型,将手术4周后出现心衰的大鼠分为模型组(MF+NS)和治疗组(MF+LY333531),分别给予生理盐水和LY333531(10 mg/kg/d)处理6周,检测各组大鼠体重和各项心功能指标,利用HE染色观察各组大鼠心肌组织形态变化,利用天狼星红染色观察心肌组织胶原沉积情况.结果:相对于模型组,LY333531处理组大鼠左心室缩短率(FS)明显改善(从21％到35％).HE染色显示LY333531能够部分逆转心衰大鼠心室壁肥厚和心肌细胞宽度,天狼星红染色显示治疗组胶原蛋白沉积降低150％.结论:使用LY333531选择性抑制PKCβⅡ能够改善心梗后心力衰竭模型大鼠心脏功能和抑制心肌纤维化.
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PKCβ抑制剂LY333531对大鼠糖尿病模型肾脏巨噬细胞浸润的影响
探讨PKCβ抑制剂LY333531对大鼠糖尿病模型肾组织巨噬细胞浸润的影响.建立STZ诱导的大鼠糖尿病模型,随机分对照组、模型组与LY333531给药组,每组10只.8周后检测24 h尿白蛋白排泄率(AER)及肾组织PKC活性;PAS染色观察肾小球病理形态学指标;应用免疫组化方法检测肾组织ED-1及MCP-1、ICAM-1表达.结果:(1)模型组大鼠肾重、肾重/体重、AER及肾小球面积、肾小球容量、系膜区面积明显高于对照组(P<0.05,P<0.01),LY333531给药组这些改变明显减轻(P<0.05);(2)LY333531给药组肾组织细胞膜、细胞浆PKC活性明显低于模型组(P<0.05);(3)模型组肾小球ED-1阳性细胞数及MCP-1、ICAM-1表达明显高于对照组,LY333531给药组肾小球ED-1阳性细胞数及MCP-1、ICAM-1表达明显低于模型组(P<0.05).表明LY333531对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织巨噬细胞浸润有关.
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LY333531对糖尿病大鼠肾组织转化生长因子β1表达的调节作用
目的探讨LY333531对糖尿病大鼠肾组织转化生长因子β1(TGFβ1)表达的调节作用.方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,随机分对照组,糖尿病模型组及LY333531给药组(10 mg·kg-1·d-1,灌胃).8周后应用放射活性测定法检测肾组织细胞总蛋白激酶C(PKCt)、细胞浆PKC(PKCc)及细胞膜PKC(PKCm)活性,免疫组化方法检测肾组织TGFβ1表达.结果模型组肾组织PKCt活性、PKCc活性、PKCm活性及PKCm/PKCc明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01);LY333531给药组PKCt活性、PKCc活性、PKCm活性及PKCm/PKCc明显低于模型组(P＜0.05).模型组肾小球TGFβ1表达明显高于对照组(P＜0.01),LY333531对其有明显抑制作用(P＜0.05).结论LY333531对糖尿病肾脏有明显保护作用,机制可能与抑制肾组织TGFβ1过度表达有关.
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PKC抑制剂LY333531对大鼠糖尿病模型肾组织氧化应激的影响
目的探讨PKC抑制剂LY333531对大鼠糖尿病模型肾组织氧化应激的影响.方法建立单侧肾切除糖尿病模型,30只大鼠随机分成对照组、糖尿病模型组与糖尿病LY333531(10mg·kg-1·d-1,灌胃)给药组,每组10只.8周末观察体重、肾重、肾重/体重及24小时尿白蛋白排泄率(AER)变化,应用PAS染色观察肾组织病理变化,并检测肾组织与尿丙二醛(MDA)含量及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与谷光甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性.结果LY333531可明显抑制糖尿病大鼠肾重、肾重/体重、AER及肾小球面积(AG)、肾小球容量(VG)及系膜区面积(AM)的增加.与对照组相比,糖尿病模型组肾组织及尿MDA含量明显增加,肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性明显下降;与糖尿病模型组比较,LY333531给药组肾组织及尿MDA含量明显降低(P均＜0.05),肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性显著增高(P均＜0.05).结论LY333531对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激有关.
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蛋白激酶C-β抑制剂LY333531对早期糖尿病大鼠心脏抗氧化状态及NADPH氧化酶的影响
目的:探讨白蛋白激酶c-β抑制剂LY333531对早期糖尿病大鼠心脏抗氧化状态及NADPH氧化酶的影响.方法:24只SD雄性大鼠(240-260 g),随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)及糖尿病LY333531治疗组(LY).4周后试剂盒检测血浆及心肌组织中的15-F2t-Isoprostane与总抗氧化浓度,HE染色光镜观察心肌形态学变化.Western boLT分析NADPH氧化酶亚基P22phox、P67phox及gP91phox蛋白水平改变.结果:与NC组比较,DM组心肌组织结构紊乱,血浆与心肌组织中15-F2t-Isoprostane及总抗氧化浓度水平明显增加,P22phox与gP91phox蛋白表达水平明显上调,P67phox膜转位明显增强(P＜0.05).与DM组比较,LY组心肌组织结构趋于正常,血浆与心肌组织中15-F2t-Isoprostane及血浆总抗氧化浓度水平明显减少,P22phox蛋白表达水平明显下调,P67phox膜转位明显减弱(P＜0.05),但不能改变gP91phox表达水平.结论:LY333531通过抑制NADPH氧化酶表达的增加及活性的增强,减少糖尿病大鼠心肌组织的氧化损伤,从而发挥其心脏保护作用.
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灯盏花素与LY333531对糖尿病大鼠肾脏的保护作用
目的探讨灯盏花素与LY333531对糖尿病大鼠肾脏的保护作用.方法建立链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠糖尿病模型,随机分为对照组、模型组、灯盏花素组(20 mg·kg-1·d-1,灌胃)与LY333531组(10 mg·kg-1·d-1,灌胃).8周末检测肾组织及尿丙二醛(MDA)含量,肾组织抗氧化酶与蛋白激酶C(PKC)活性;观察肾小球病理形态及免疫组化变化.结果给药组大鼠肾重、肾重/体重、24 h尿白蛋白排泄率(AER)、肾小球面积、肾小球容量及系膜区面积均明显低于模型组(P＜0.05).模型组肾组织及尿MDA含量明显高于对照组(P＜0.01);肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-PX)活性明显低于对照组(P＜0.05,P＜0.01);两给药组这些变化明显缓解(P＜0.05).模型组肾组织PKC活性明显高于对照组(P＜0.01),两给药组肾组织PKC活性明显低于模型组(P＜0.05).模型组肾小球转化生长因子β1(TGF-β1)与结缔组织生长因子(CTGF)表达明显高于对照组(P＜0.01),两给药组这些改变明显减轻(P＜0.05).结论灯盏花素与LY333531对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织TGF-β1与CTGF过高表达有关.
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PKC 抑制剂 LY333531对阿霉素肾病小鼠肾组织氧化应激的影响
目的：探讨PKC抑制剂LY333531对阿霉素肾病小鼠肾组织氧化应激的影响。方法建立小鼠阿霉素肾病模型，24只小鼠随机分成对照组、阿霉素肾病组和LY33353110 mg／（ kg· d）灌胃治疗组，每组8只。阿霉素肾病组和LY333531治疗组一次性尾静脉注射阿霉素（10 mg／kg），建立小鼠阿霉素肾病模型，对照组注射等量生理盐水；阿霉素注射后第5天、出现蛋白尿时，LY333531治疗组予LY33353110 mg／（ kg· d）灌胃，阿霉素肾病组和对照组予等量溶媒灌胃。2周时处死小鼠。处死前留取血尿标本检测尿蛋白、尿肌酐和血生化。观察肾脏病理，并检测肾组织和尿中丙二醛（ MDA）含量及肾组织超氧化物歧化酶（ SOD）、过氧化氢酶（ CAT）与谷胱甘肽过氧化物酶（ GSH－PX）活性。结果 LY333531可明显抑制阿霉素肾病小鼠尿蛋白排泄。与对照组相比，阿霉素肾病组肾组织及尿MDA含量明显增加（P＜0.05，P＜0.01），肾组织SOD、CAT、GSH－PX活性明显下降（P＜0.05，P＜0.01）；与阿霉素肾病组比较，LY333531治疗组肾组织及尿MDA含量明显降低（P＜0.05），肾组织SOD、CAT、GSH－PX活性显著增高（P＜0.05）。结论 LY333531对阿霉素肾病小鼠肾脏有明显保护作用，其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激有关。
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蛋白激酶CβⅡ(PKCβ2)抑制剂LY333531减少心肌梗死后心肌肥大细胞浸润
目的 探讨蛋白激酶CβⅡ(PKC β2)特异性抑制剂LY333531对心梗后心衰大鼠心肌组织中肥大细胞浸润的影响.方法 利用左冠状动脉降支(LAD)结扎制备大鼠心梗模型,将手术4周后出现心衰的大鼠分为对照组和LY333531治疗组,分别给予生理盐水和LY333531处理6周,同时设置假手术组.检测各组大鼠体质量和各项心功能指标,采用天狼星红染色观察心肌组织胶原沉积情况,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞密度,ELISA检测血清中组胺和白细胞介素4(IL-4)的含量.结果 与假手术组大鼠相比,手术后4周心衰大鼠(生理盐水组和LY333531组)左心室短轴缩短率(FS)显著减少,左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)以及左心室后壁厚度(PWT)明显增加;心肌组织可观察到胶原沉积、肥大细胞浸润,血清中组胺和IL-4的含量增加.与生理盐水对照组相比,经LY333531治疗6周后,FS、.LVESD以及PWT明显改善;但是LVEDD的改善无显著性差别,胶原蛋白沉积降低约50％,心肌组织肥大细胞数减少,血清中组胺和IL-4的含量降低.结论 使用LY333531选择性抑制PKCβ2能够通过抑制心肌炎症反应,改善心梗后心力衰竭模型大鼠心脏功能和抑制病理性心肌重塑.
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LY333531对高糖所致心肌微血管内皮细胞通透性上调的拮抗作用
目的:观察LY333531对高糖所致心肌微血管内皮细胞通透性上调的拮抗作用,并探讨其机制.方法:将分离培养并鉴定后的大鼠心肌微血管内皮细胞分为正常组,高糖组(葡萄糖浓度25 mmol/L),高糖(葡萄糖浓度25 mmol/L)+LY333531(10 μmol/L)组,高糖(葡萄糖浓度25 mmol/L)+生理盐水组,通过离体血管通透性检测试剂盒检测单层细胞通透性,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光和Western blot法检测PKCβⅡ的表达.结果:与正常组比较,高糖组单层细胞通透性明显上调(400.0±20.00 vs 223.3±25.17;P<0.01),凋亡率升高(55.00%±5.000% vs 2.333%±1.155%;P<0.01),PKCβⅡ的表达增加(0.4767±0.07506 vs 0.1733±0.02082;P<0.01);LY333531可明显降低PKCβⅡ的表达(0.2800±0.070 vs 0.4767±0.07506;P<0.01)并拮抗上述病理性通透功能上调(360±17.32 vs 400.0±20.00;P<0.05)和凋亡率升高(25.00%±5.000% vs 55.00%±5.000%;P<0.01),而生理盐水对细胞通透性、凋亡率和PKCβⅡ表达的影响不明显.结论:高糖损害心肌微血管内皮细胞的通透功能,LY333531可拮抗此损伤作用.
