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大鼠慢性高眼压模型视神经磷酸化tau蛋白的表达及其意义
目的 探讨磷酸化tau蛋白在正常大鼠及慢性高眼压模型视神经的表达及意义.设计 实验研究.研究对象 Sprague-Dawley(SD)大鼠43只.方法 适应性驯养3天,连续测量3天眼压,计算正常值范围,剔除平均眼压高于或低于正常值者,40只大鼠用于高眼压模型制作.右眼为实验眼,左眼为对照眼.结扎实验眼4条巩膜上静脉建立慢性高眼压模型,其中14只在实验过程中死亡,5只眼压始终不升,余下21只术后眼压升高,将其按随机数字表法分为高眼压7天组(10只)和高眼压14天组(11只).Tono-pen XL眼压计测量术前、术后即刻、3、7、14天麻醉状态下的眼压.术后7天和14天摘取实验眼和对照眼的眼球(带视神经约0.5 cm),行冰冻切片,免疫组织化学染色检测视神经tau[pS396]的表达,激光共聚焦显微镜采集图像,Image pro plus 6.0图像分析软件对图像进行分析.主要指标 眼压,磷酸化tau蛋白的表达(积分光密度).结果 实验眼的平均眼压在术后即刻达到高峰,约为术前的2倍,术后3天约为术前的1.5倍,维持1周后缓慢下降,且与对照眼的眼压比较有显著性差异(P＜0.01).实验眼和对照眼的视神经均存在tau[pS396]的表达,术后7天、14天实验眼较对照眼表达显著增多(P＜0.01)并伴有异常聚集现象,实验眼术后14天较术后7天表达减少(P＜0.05).结论 异常过度磷酸化的tau蛋白可能参与了慢性高眼压视网膜神经节细胞轴突的损害过程,青光眼可能具有与神经退行性疾病相似的神经细胞损害机制.(眼科,2011,20:367-372)
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益精杞菊地黄颗粒对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响
目的 观察益精杞菊地黄颗粒对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的影响.方法 选用健康雄性的SD大鼠60只,随机分为5组,空白组、模型组、高剂量中药组、中剂量中药组、低剂量中药组,每组各12只.除空白组,其余4组均采用烧灼巩膜上静脉法,建立慢性高眼压模型.干预1个月后,分别采用眼压测量观察眼压变化,HE染色观察视网膜病理学改变,Tunel法检测RGCs凋亡情况.结果 (1)眼压测量:造模后大鼠眼压明显高于造模前和空白组眼压水平,差异有统计学意义(P<0.01),模型组与各中药组比较无统计学意义(P>0.05).用药后1个月,模型组及各中药组与造模前、空白组比较有统计学意义(P<0.01),而与造模后用药前比较,无统计学意义(P>0.05),但各中药组眼压有所下降.各用药组间比较均无统计学意义(P>0.05),与模型组比较均无统计学意义(P>0.05).(2)HE染色显示,与空白组不同,模型组损伤明显;中剂量中药组较模型组损伤改善.模型组RGCs层细胞数量较正常组显著减少(P<0.01);高、中剂量中药组细胞数量高于模型组(P<0.01);低剂量中药组与模型组比较无统计学意义(P﹥0.05).(3)Tunel检测显示,各治疗组RGCs层细胞凋亡较模型组减少,中剂量中药组细胞凋亡少.空白组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01),中剂量中药组凋亡率较模型组有统计学意义(P<0.01),高、低剂量中药组凋亡率与模型组比较,无统计学意义(P>0.05).结论 益精杞菊地黄颗粒剂对慢性高眼压大鼠RGCs的凋亡有明显的保护作用.
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慢性高眼压兔模型的实验研究
目的 建立与临床相近的慢性高眼压兔模型.方法 依据兔眼与人眼巩膜系数不同,推算人眼眼压计进行兔眼测量时实际眼压与所测数值间比率关系后,对20只前房分别注射卡渡姆及糜蛋白酶组兔眼眼压升高情况进行对比分析.结果 卡波姆组造模成功率90%,眼压高达51.6mmHg,高眼压状态持续30余天.糜蛋白酶组:造模成功率30%,眼压高达32mmHg,高眼压状态平均持续约20天.结论 前房注射卡波姆是一种有效的慢性高眼压兔造模方法.进行高眼压造模前,均应针对所实验动物进行眼压的矫正,以避免实验偏差.
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蒺藜总皂苷对慢性高眼压兔血液流变学影响的实验研究
目的 探讨蒺藜总皂苷对慢性高眼压兔血液流变学的影响.方法 将24只健康新西兰白兔随机分为正常对照组(A组),高眼压模型空白组(B组),高眼压模型灯盏细辛(EBHM)治疗组(C组),高眼压模型蒺藜总皂苷(GSTF)治疗组(D组),以20 g/L甲基纤维素前房注射建立兔慢性眼高压模型,灯盏细辛(EBHM)治疗组实验兔每日耳缘静脉推注灯盏细辛注射液(4.5 mg/kg),蒺藜总皂苷(GSTT)治疗组实验兔每日耳缘静脉推注蒺藜总皂苷针剂(5 mg/kg),连续用药28 d.观察各组眼压及血液流变学指标的变化.结果 观察期内,高眼压模型兔眼的眼压维持在32～39 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa).造模前各组实验兔的全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原、红细胞压积差异无统计学意义(P＞0.05)；模型兔持续高眼压状态28 d后,B组的全血黏度、血浆黏度明显高于A组、C组、D组(P＜0.05),C组、D组的全血黏度、血浆黏度值接近(P＞0.05),但略高于A组(P＜0.05).各组纤维蛋白原、红细胞压积的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 蒺藜总皂苷对模型动物的血液流变学指标具有明显改善作用.
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青光安Ⅱ号方对慢性高眼压大鼠视网膜热休克蛋白的影响
目的 通过建立慢性高眼压(EIOP)大鼠模型,观察青光安Ⅱ号方对慢性EIOP大鼠视网膜热休克蛋白(HSP)的影响.方法 将40只SD大鼠随机抽取6只作为空白组,其余均采用烧灼巩膜表浅静脉法建立大鼠慢性高眼压模型,监测造模后大鼠的眼压,使其维持在25 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)以上持续8周视为造模成功.将造模成功的大鼠按随机数字表法分为5组,每组6只,分别为:模型组、青光安Ⅱ号方低、中、高剂量组、益脉康组,并开始灌胃.灌胃后14 d、28 d分别处死大鼠,光镜下观察各组视网膜形态学改变,Western blot检测HSP27、HSP60、HSP70的表达.结果 Western blot:三种HSP在正常视网膜中均有表达;在EIOP模型中,三种HSP在视网膜中的表达均上升,差异有统计学意义(P<0.05).灌胃后14 d:青光安Ⅱ号方低、中、高剂量组、益脉康组大鼠的视网膜HSP27、HSP6及HSP70的表达均增多,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中,HSP27的表达,青光安Ⅱ号方高剂量组效果优于益脉康组,差异有统计学意义(P<0.05);HSP60及HSP70的表达各灌药组比较,差异无统计学意义(P>0.05).灌胃后28 d:各灌药组HSP表达量与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中,青光安Ⅱ号方高剂量组效果优于益脉康组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 (1)烧灼巩膜表浅静脉法建立大鼠EIOP模型成功率较高,眼压能有效的维持在高眼压状态;(2)EIOP大鼠视网膜中HSP27,HSP60,HSP70的表达均会应激性增多;(3)与模型组比较,青光安Ⅱ号方能促进实验性EIOP大鼠HSP27、HSP60、HSP70的表达;(4)通过实验观察初步说明青光安Ⅱ号方高剂量组对慢性高眼压大鼠视神经的保护作用优于益脉康分散片.
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银杏叶注射液对兔慢性高眼压模型视网膜神经节细胞的保护作用
目的 探讨银杏叶注射液对兔慢性高眼压模型视网膜神经节细胞的保护作用.方法 采用2 %α-糜蛋白酶注入家兔眼后房,造成实验性慢性高眼压.将造模成功的30只家兔随机分为三组,每组10只,分别给予以下治疗:静脉注射银杏叶注射液(银杏叶组)、银杏叶联合噻吗心安组(联合用药组)、不做任何治疗(模型对照组).30天后各组分别进行视网膜神经节细胞凋亡检测正常节细胞计数和光镜观察视网膜各层病理改变和电镜观察神经节细胞超微结构的变化.结果 每组均可观察到染色的阳性细胞,正常节细胞计数从多至少依次为联合用药组、银杏叶组和模型对照组(P＜0.001),光镜下模型对照组视网膜各层结构紊乱,联合用药组视网膜各层组织完整.结论 高眼压能导致视网膜神经节细胞发生凋亡,而银杏叶注射液能阻止其凋亡的发生,对视网膜神经节细胞有一定的保护作用.
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兔眼慢性高眼压模型视网膜损害相关基因的克隆及筛选
目的构建慢性高眼压条件下兔眼视网膜组织差异表达基因的消减cDNA文库并鉴定、克隆及筛选与慢性高眼压视网膜损害相关的基因表达片段.方法于兔眼前房注射1%甲基纤维素每周1次,连续5周,制作慢性高眼压模型.提取实验组和对照组兔眼视网膜组织总RNA及纯化mRNA.采用原位杂交技术,进行视网膜组织差异表达基因抑制性消减文库的构建及初步的基因筛选.对一个上调的cDNA片段用地高辛标记,采用原位杂交的方法在实验组和对照组的视网膜中进行相关基因片段的细胞定位.结果成功构建慢性高眼压条件下兔眼视网膜损害相关基因的抑制性消减cDNA文库,经基因片段测序及同源性检索,得到有效基因序列16个,经NCBI-BLAST信息途径分析,发现高度同源序列(同源性>98%)2个.其中一个编号F9基因片段与Ras家族基因相似,原位杂交结果确定其大量表达于实验组视网膜神经节细胞及内核层细胞中,而对照组视网膜组织未表达.结论慢性高眼压条件下视网膜组织基因表达失调,F9片段在慢性高眼压视网膜损害过程中表达明显增高.建立慢性高眼压条件下视网膜损害相关基因的抑制性消减cDNA文库,可为今后青光眼视神经损害机制及视神经保护的研究奠定基础.
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Nogo-66蛋白的免疫原性研究
慢性高眼压导致的视网膜神经节细胞的损伤与中枢神经系统慢性变性的典型损伤反应过程相同,即损伤的视网膜神经节细胞介导r细胞内环境免疫损伤过程,导致进一步的神经细胞损伤.通过增强T淋巴细胞介导的免疫反应能够保护处于"边缘性损伤"的视网膜神经节细胞[1-2].
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米诺环素对兔慢性高眼压视网膜功能的影响
目的 研究米诺环素(minocycline)对兔慢性高眼压视网膜神经节细胞(retinal ganglial cells,RGC)损伤的保护作用.方法 成年健康色素兔30只随机分为A、B、C三组,每组各10只.A组为空白组;B组为模型组;C组为给药组.选B、C组右眼作高眼压模型,每眼抽取房水0.1 ml,随后注射0.3%复方卡波姆溶液0.1 ml.C组给予米诺环素(minocycline)口服给药,50 mg/kg/24 h,连续30 d.用Schiotz眼压计测量并记录眼压,一周一次.30 d时,A、B、C组右眼均行光学相干眼底断层扫描(OCT)检测视神经纤维层厚度.SPSS13.0统计学分析软件对结果进行统计学分析.结果 眼压测量结果统计分析显示:B、C组眼压符合慢性高眼压造模标准,且差异无统计学意义(P>0.05),B、C组眼压较A组高,且差异有统计学意义(P<0.05).OCT所检测视神经纤维层厚度测量结果统计分析显示:视神经纤维层厚度由薄到厚B
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慢性高眼压动物模型视网膜中睫状神经生长因子及其受体的表达
目的 观察慢性高眼压动物模型视网膜中CNTF 及CNTFRα的定位及表达变化.方法 选取健康新西兰大白兔为实验对象建立兔慢性高眼压模型.选取造模成功的24 只(48 眼)兔慢性高眼压眼,随机分为4 组慢性高眼压模型组,每组6 只(12 眼),分别存活7、14、21、28d.另设正常兔6 只(12 眼)为假手术对照组(简称对照组).免疫组织化学染色方法测定兔视网膜中CNTF 及CNTFRα的定位及表达变化.结果 在对照组中,RGCs 层均有大量的CNTF 及CNTFα存在,在其它各层也存在散在颗粒状分布的CNTF 及CNTFRα.慢性高眼压损伤后,CNTF 及CNTFRα在视网膜各层显著增加,并呈弥漫性分布,造模后7、14d 与正常对照组比较相差非常显著(P<0.01).在造模后7d,是CNTF 及CNTFRα在视网膜各层表达的高峰,在造模后28d 两者的表达均显著高于正常对照组(CNTF:P<0.05;CNTFR:P<0.05).结论 慢性高眼压损伤导致视网膜CNTF 和CNTFRα表达量的增加和分布的改变.
关键词： 慢性高眼压 视网膜 睫状神经营养因子 睫状神经营养因子受体 -
三子平降散治疗慢性青光眼的临床及实验研究
三子平降散是本院老专家张广庆教授根据中医理论、结合现代医学知识和自己多年的临床实践研制的治疗早、中期慢性青光眼的有疗方剂.本课题通过临床和实验探讨三子平降散对慢性高眼压作用的效果、规律,对视功能的改善情况,以及对慢性高眼压下视网膜超微结构的改善作用,并对三子平降散降眼压机制进行探讨.结果显示:三子平降散(汤)具有泻肺平肝、利水化瘀的功效,临床和实验均证实对慢性高眼压有较明显降低眼内压的作用,降低眼压具有积累效应,服用时间越长效果愈显著,其降低眼压的作用机制是减少房水生成量;此外,三子平降散可以促进眼部的血液循环,改善视网膜、视神经的血液供应,减轻视网膜及视神经组织损伤,对视功能具有很好的保护作用,并可改善部分患者的视功能.
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糖皮质激素性青光眼的预防与护理
糖皮质激素以其显著的抗炎作用被广泛应用于眼部各种炎症和免疫性疾病的治疗.尤其是近年来屈光手术的增加,使糖皮质激素诱发的青光眼病人呈现增加趋势,其中不少病人由于原发病症状的掩盖,或无症状的慢性高眼压等多种原因,造成青光眼的误诊和漏诊,导致视功能的严重损害.因此预防或减少糖皮质激素性青光眼的发生,防止其对视功能的进行性损害是临床医务人员或病人的迫切要求.我院1998年至今收治33例糖皮质激素性青光眼病人,现报告如下.
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慢性高眼压动物模型的研究进展
实验性高眼压动物模型主要用于青光眼的发病机制、降眼压药疗效观察和视神经损害的机制及治疗方面的研究.按照持续时间不同,将高眼压动物模型分为急性和慢性两种,本文将近年来常用的慢性青光眼动物模型作一综述.
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缺氧诱导因子1α在慢性高眼压下大鼠视网膜中的表达
目的 了解缺氧诱导因子1((hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在实验性慢性高眼压大鼠视网膜中的表达并探讨其在青光眼视网膜损伤中的作用.方法 60只大鼠随机分为假手术对照组;高眼压3d组;高眼压7d组;高眼压14d组;高眼压21d组;高眼压28d组.浅层巩膜静脉烧灼法制成慢性高眼压模型,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法和蛋白印迹法(Western-blot)研究HIF-1在慢性高眼压下不同时段视网膜中的表达情况.结果 HIF-1αmRNA和蛋白在高眼压的视网膜表达较正常视网膜明显提高(P＜0.05).高眼压后7天达到高峰,可维持28天.结论 HIF-1参与了慢性高眼压的视网膜的损伤的信号转导过程,为青光眼视神经损伤的缺氧学说提供了直接证据.
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前房不同部位注射复方卡波姆诱导兔慢性青光眼模型的实验研究
目的 通过评价前房不同部位注射复方卡波姆建立兔慢性青光眼模型的效果,探讨此模型的佳注药部位.方法 将20只兔随机分为模型Ⅰ、Ⅱ组,右眼为模型眼,分别用复方卡波姆制作慢性高眼压模型.模型Ⅰ组将复方卡波姆缓慢注射在前房瞳孔区,模型Ⅱ组缓慢注入周边房角.左眼为对照眼,前房内均注入生理盐水.兔眼在造模前测量3日眼压值作为基础眼压,造模后2次/d测量,仔细观察眼压的变化规律及持续时间,并对诱发的高眼压模型观察8周.直接检眼镜观察视盘凹陷,光镜观察视网膜的组织形态学改变,视网膜各层组织厚度变化并进行图像分析,评价2组模型的造模效果.结果 Ⅰ组平均眼压(27.2±1.2)mmHg,持续时间为25～53d,Ⅱ组平均眼压(39.6±2.4)mmHg,持续时间为22～28d.光镜下显示模型眼视乳头凹陷均扩大和加深,2组视网膜神经纤维层均变薄,Ⅱ组比Ⅰ组变薄更明显,两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 复方卡波姆诱导兔慢性青光眼模型时注射在前房瞳孔区比周边房角所建立的模型效果更理想,更易于控制和实用.
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针刺对慢性高眼压兔视网膜NO和Glu含量的影响
目的:观察针刺对眼压已控制的慢性高眼压兔模型视网膜一氧化氮和谷氨酸含量的影响,探讨针刺青光眼视神经保护作用的机理.方法:将50只大耳白兔随机分为正常组10只和实验组40只,实验组通过前房注射复方卡波姆溶液造成实验性青光眼模型,高眼压持续28天后,通过滤过性手术使眼压恢复正常,根据1个月平均眼压分层随机分为模型、针刺、电针、神经营养剂4组,分别给予相应处理1个月后,测定兔视网膜一氧化氮(NO)、谷氨酸(Glu)含量.结果:实验结束时各组动物视网膜NO、Gh含量出现显著差异,针刺组视网膜NO、Glu含量明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01).电针组、神经营养剂组NO含量较模型组为低,但差异无统计学意义(P＞0.05).电针组Glu含量明显低于模型组(P＜0.05).结论:针刺能明显降低高眼压状态后兔视网膜NO、Glu含量,可能是针刺视神经保护作用的机制之一.
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针刺对眼压已控制的慢性高眼压兔视网膜保护作用的研究
目的:观察针刺对眼压已控制的慢性高眼压兔的保护作用.方法:以大耳白兔为实验动物,通过前房注射复方卡波姆溶液造成慢性高眼压模型,28天后通过滤过性手术使眼压恢复正常.分层随机分为模型组、针刺组、电针组、神经营养剂组,并设正常组.予针刺和电针治疗4周,观察其对各组兔视网膜形态学和视网膜节细胞(RGCs)计数的影响.结果:实验结束时各组动物出现显著差异,针刺组、电针组兔视网膜病理结构损伤较轻,视网膜节细胞(RGCs)数量明显高于模型组(P<0.05).结论:针刺能保护高眼压损害的视神经,作用主要表现为减轻视网膜结构损伤,减少视网膜神经节细胞的凋亡.
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小鼠慢性高眼压模型下视网膜神经节细胞的损伤
目的:通过巩膜外静脉烧烙术建立慢性高眼压模型,研究小鼠慢性高眼压状态下视网膜神经节细胞的凋亡情况.方法:取C57BL/6J小鼠30只.3只作为空白对照组,其余27只右眼为实验眼,左眼为对照眼.术前用iCare眼压计测量眼压,按巩膜外静脉烧烙法建立慢性高眼压模型,术后用iCare眼压计每日监测眼压.分剐取空白对照组6眼,术后1w、4 w造模成功的小鼠各8只16眼眼球,石蜡切片行Tunel法,荧光显微镜下采集图像.小鼠眼压的组间比较采用t检验.结果:给予巩膜外静脉烧烙术后1d、1w、4w小鼠慢性高眼压眼眼压(11.15±0.98、10.65±0.95、10.35±1.05)与对照眼(6.40±0.95、6.35±1.05、6.50±1.15)相比,差异有统计学意义(t=10.77～18.08,P＜0.001).Tunel法结果显示,正常小鼠空白对照组未见明显凋亡的视网膜神经节细胞.慢性高眼压组术后1w、4w可见Tunel阳性表达.而对照组术后1w及4w均未见Tunel阳性表达.结论:巩膜外静脉烧灼法能诱导出持续的肯定的小鼠慢性高眼压模型,慢性高眼压状态下小鼠视网膜神经节细胞发生凋亡,细胞凋亡是小鼠慢性高眼压状态下视网膜神经节细胞损伤的主要方式.
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高渗盐水诱导大鼠高眼压模型的建立和应用价值
采用高渗盐水注入到大鼠眼的房水流出途径诱导的大鼠慢性高眼压性青光眼模型是近年发展起来的新技术,本文就该模型的建立和应用进行了综述.
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慢性眼内压增高对大鼠视网膜Müller细胞钙通道电流的影响
目的 利用电生理方法,鉴定大鼠视网膜Müller细胞钙通道,进而研究慢性眼内压增高对Müller细胞钙通道电流的影响.方法 在急性分离的大鼠Müller细胞上,利用全细胞膜片钳的电压钳技术记录钙通道电流.采用结扎巩膜上静脉的方法制备大鼠高眼压模型.结果 当细胞外液中不含二价阳离子时,可以记录到电流幅度较大的钙通道介导的Na+电流.该电流可被L-型钙通道阻断剂nimodipine和T-型钙通道阻断剂mibefradil可逆地压抑到加药前的(39.8 ± 5.4)% (P<0.001)和(46.7 ± 8.7)% (P<0.001).与假手术组相比,高眼压术后1周、2周和4周的大鼠视网膜Müller细胞钙通道的电流幅度没有明显的变化.然而,电流成分分析发现,与对照组相比,高眼压大鼠Müller细胞的nimodipine敏感电流呈降低的趋势[1周:(70.9 ± 13.3)%;2周:(70.5 ± 21.9)%;4周:(69.2 ± 23.9)%],而mibefradil敏感的电流在高眼压术后1周和2周呈增高趋势[(157.5 ± 21.2)%和(158.6 ± 35.5)%],4周时趋于正常 (109.2 ± 37.9)%.结论 大鼠视网膜Müller细胞功能性表达L-型和T-型钙通道.慢性眼内压增高导致L-型钙通道电流减小,T-型钙通道电流增大,从而增加胞内钙,共同参与Müller细胞的去极化和激活.
