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β-1,3-葡聚糖酶及其抗真菌作用
β-1,3-葡聚糖酶属PR-2类蛋白,能催化真菌细胞壁的重要成分--β-1,3-葡聚糖的水解,水解的寡糖产物是植物防御反应的重要激发子.β-1,3-葡聚糖酶可被多种生物因子和非生物因子诱导产生.本文对β-1,3-葡聚糖酶的分类,诱导及其抗真菌作用进行了简要介绍.
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内生真菌对台湾金线莲栽培及酶活性的影响
目的:研究在野外盆栽条件下内生真菌对台湾金线莲的影响.方法:组培苗移栽1年后收获,统计成活率,称鲜重和干重,同时测定几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶活性.结果:接菌的台湾金线莲成活率达100%.对台湾金线莲鲜重的增加有极显著差异,对干重的增加有显著差异,且接菌后4种酶活性均高于对照组.结论:在台湾金线莲的家栽过程中可利用内生真菌提高成活率.
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β-1,4-半乳糖苷键在星形胶质细胞瘤中的表达特征
目的研究β-1,4-半乳糖苷键在各型人脑星形胶质细胞瘤中的表达变化特征.方法分别提取人正常脑及星形胶质细胞瘤蛋白质,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),考马斯亮蓝(CBB)染色.并利用特异识别β-1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素-Ⅰ(RCA-Ⅰ),经letin blot和组织化学方法分析β-1,4-半乳糖苷键在各型人脑星形胶质细胞瘤中的表达变化和表达定位.结果CBB染色结果显示,人正常脑及星形胶质细胞瘤的蛋白质组成相似.RCA-Ⅰ letin blot显示:脑星形胶质细胞瘤组织半乳糖基化较正常脑组织有升高趋势,并且有一61 kD的蛋白在胶质瘤组织中被半乳糖基化.组织化学方法表明:β-1,4-半乳糖苷键散在表达于正常脑组织和各级胶质瘤组织中,随着肿瘤分级增高,表达β-1,4-半乳糖苷键的细胞增多:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ平均RCA-Ⅰ染色阳性率分别为15%、21%、28%和41%,而正常脑组织平均RCA-Ⅰ染色阳性率为8%. 结论β-1,4-半乳糖苷键的表达与人脑星形胶质细胞瘤恶性程度密切相关,为分析β-1,4-半乳糖苷键及其相关糖基转移酶在恶性胶质瘤中的发病和诊治意义奠定基础.
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蛋白激酶C在脂多糖诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ表达中的作用
目的 研究蛋白激酶c(PKC)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)表达的调节作用,以及对内皮细胞骨架结构改变及其黏附能力的影响.方法 分别用PKC激动剂或几种不同类型的PKC抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)30 min,LPS刺激HUVECs 4 h后,RT-PCR、Western blot方法 检测β-1,4一GalT-Ⅰ表达变化,细胞荧光染色观察β-1,4-GalT-Ⅰ催化的糖链表达变化及细胞骨架结构的改变,通过内皮-单核细胞黏附试验观察HUVECs黏附能力的改变.结果 几种不同类型的PKC抑制剂均能不同程度地抑制LPS刺激HUVECs引起的β-1,4-GalT-Ⅰ表达的上调,PKC激动剂能够使上调的β-1,4-GalT-Ⅰ的表达进一步增加;在HUVECs中β-1,4-GalT-Ⅰ与细胞骨架有共同定位,PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮细胞骨架蛋白的重构和β-1,4-GalT-Ⅰ细胞内的再分布;PKC抑制剂显著抑制LPS诱导的内皮-单核细胞黏附能力的上调.结论 PKC可能参与调节LPS诱导的HUVECs β-1,4-GalT-Ⅰ的表达,可能多种类型的PKC参与了这一调节过程;PKC可能通过对β-1,4-GalT-Ⅰ的调节进而影响炎症过程中内皮细胞骨架蛋白的重构及内皮细胞与单核细胞的黏附能力.
关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-Ⅰ 蛋白激酶C 内皮细胞 脂多糖 -
β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ在CD4+TH细胞中的表达及对其黏附能力的影响
目的 研究β-1,4-半乳糖基转移酶Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferaseⅠ,β-1,4-GalT Ⅰ)在CD4+TH中的表达与定位以及β-1,4-GalTⅠ对CD4+ TH细胞黏附能力的影响.方法 采用免疫磁珠阳性分选法分离纯化CD4+ TH细胞,通过RT-PCR、荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定CD4+TH细胞中β-1,4-GalTⅠ的表达与定位;分别用rhIL-2、rhIL-12、rhIL-4等细胞因子组合诱导CD4+ TH细胞活化分化,通过半定量RT-PCR、FCM检测CD4+ TH细胞中β-1,4-GalTⅠ的表达变化,运用层黏连蛋白结合实验比较CD4+ TH细胞黏附能力的改变;用α-乳清蛋白干扰CD4+ TH细胞表面β-1,4-GalTⅠ的活性及底物特异性,用层黏连蛋白结合实验分析其对CD4+ TH细胞黏附能力的影响.结果 CD4+ TH细胞表面和细胞浆内表达长型和短型β-1,4-GalTⅠ;rhlL-2活化的CD4+ TH细胞长型β-1,4-GalT ⅠmRNA平及细胞膜表面β-1,4-GalTⅠ表达水平、细胞黏附能力均高于未经活化的CD4+ TH细胞,rhIL-2+rhIL-12诱导培养的CD4+ TH细胞增强更明显;CD4+ TH细胞长型β-1,4-GalTⅠ mRNA水平及细胞膜表面β-1,4-GalTⅠ表达水平均与CD4+ TH细胞黏附能力呈正相关;α-乳清蛋白干扰后CD4+ TH细胞黏附能力降低.结论 β-1,4-GalTⅠ在CD4+ TH细胞中表达,且与细胞黏附能力密切相关,提示β-1,4-GalTⅠ可能在CD4+ TH细胞的黏附过程中发挥重要作用.
关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶Ⅰ CD4+辅助性T细胞 细胞黏附 -
半合成β-1,4-葡聚糖硫酸钠的抗凝血特性
目的研究半合成β-1,4-葡聚糖硫酸钠(Na-MCS)的抗凝血效果和作用机制.方法采用凝固分析法、以肝素为阳性对照进行抗凝血效果的评价,再通过发色底物法对凝血因子进行抑制分析,揭示Na-MCS的抗凝血作用机制.结果0.6μg·mL-1Na-MCS即可显著延长APTT和TT,但在更高浓度下对PT影响仍不大,使正常人血浆的APTT延长1倍的Na-MCS剂量为0.7μg·mL,低于活性为150 u·mg-1的肝素.结论在一定浓度范围内,Na-MCS的抗凝血活性与肝素相当,Na-MCS通过抗凝血酶AT-Ⅲ的调节作用来抑制凝血因子Ⅱa和Xa的活性,从而产生抗凝血作用.
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微生物来源的抗真菌抗生素研究进展
新的微生物来源的抗真菌抗生素不断涌现。本文就近2年来研究及开发或进行临床试验的化合物，依据它们作用的靶向部位不同，按真菌细胞膜、细胞壁以及蛋白质合成3类进行概述。
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内生真菌对福建金线莲栽培及酶活性的影响
目的 研究在野外盆栽条件下内生真菌AR-18对福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)生长发育的影响.方法 福建金线莲组培苗接菌移栽于草炭土或蛭石基质中,1年后收获,观察苗的生长势,统计成活率,称鲜重和干重,同时测定β-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活性.结果 在草炭土和蛭石基质上,接菌的福建金线莲苗成活率均达100%;真菌对福建金线莲鲜重的增加有极显著促进作用(P<0.01),分别为对照组的1.77和1.83倍;真菌对福建金线莲干重的增加有显著促进作用(P<0.05),分别为对照组的1.13和1.28倍.接菌后4种酶活性均高于对照组.结论 在福建金线莲的家栽过程中可利用内生真菌提高成活率和产量.
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基因枪转化双价防卫基因获得抗立枯病白术
目的 通过基因工程育种获得抗病转基因白术株系.方法 在已建立的高效白术茎尖再生体系基础上,利用基因枪介导法转化水稻几丁质酶基因(RCH10)和苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因(AGLU),对所获得的转基因株系进行PCR分析、GUS染色以及抗病性检测.结果 获得了25个PCR检测阳性的转基因株系,其中5个株系对白术立枯病抗性增强.结论 利用转基因技术获得抗病新株系,可以缩短抗病品种育种年限,同时拓宽了白术抗病育种的基因库.
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磺达肝癸钠二糖中间体的合成工艺研究
目的：设计并合成磺达肝癸钠的二糖中间体。方法以β-1,2,3,4,6-五乙酰基葡萄糖为起始原料，经硫化、苄基化、TEMPO氧化、溴化等反应得到葡萄糖醛酸供体E；以3,4,6-三乙酰-D-葡萄糖烯为起始原料，经碘化、叠氮化等反应得到内醚糖受体F；单糖供体E与受体F经偶联反应得到全保护二糖EF。结果合成了目标化合物，并利用1H-NMR和MS确证了结构；HPLC归一化法测得质量分数为99.01%，目标化合物的总收率为11.1%。结论磺达肝癸钠二糖中间体的合成可以为磺达肝癸钠和其他多糖的合成提供重要的中间体原料。
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细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-I在免疫突触形成中的作用
目的:研究细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)在免疫突触形成中的作用.方法:以抗CD3、CD28单克隆抗体活化Jurkat 细胞,应用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测分析β-1,4-GalT-I的表达变化,激光共聚焦显微镜观察β-1,4-GalT-I在Jurkat细胞活化前后的表达与定位;将Jurkat细胞与SEB负载的Raji细胞共培养以构建Jurkat-Raji细胞免疫突触,观察β-1,4-GalT-I在免疫突触中的定位.结果:β-1,4-GalT-I mRNA表达水平随着Jurkat 细胞的活化逐渐增高,在细胞活化后36小时达到高峰;活化后细胞表面β-1,4-GalT-I分子的表达较静止状态高;共聚焦显微镜显示在活化的Jurkat细胞表面及Jurkat-Raji细胞免疫突触部位β-1,4-GalT-I表达信号增强且其分布发生重排和簇集,且与CD3分子共定位,与CD28分子部分共定位.结论:Jurkat细胞表面的β-1,4-GalT-I分子参与了免疫突触的形成.
关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-I Jurkat细胞 免疫突触 -
β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在树突状细胞中的表达及作用
目的:观察β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)在人外周血来源的树突状细胞(Dendritic cells,DCs)中的表达与定位,研究其对DCs免疫功能的影响.方法:人外周血单核细胞经GM-CSF+IL-4+TNF-α诱导培养分化为DCs,采用RT-PCR、流式细胞术和激光共聚焦技术观察DCs中β-1,4-GalT-Ⅰ的表达与定位;通过细胞粘附试验分析β-1,4-GalT-Ⅰ表达与细胞粘附能力的关系.用α-乳清蛋白(α-lactalbumin,LA)作为细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ抑制剂,研究β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs细胞粘附以及与CD4+ Th细胞形成免疫突触过程中的作用.结果:在人外周血来源DCs细胞表面和细胞浆内可表达长型和短型β-1,4-GalT-Ⅰ;长型β-1,4-GalT-Ⅰ或细胞表面β-1,4-GalT-Ⅰ的表达水平与细胞粘附能力呈正相关;α-LA既可抑制DCs对层粘连蛋白的粘附,又可抑制DCs与CD4+Th形成免疫突触.结论:β-1,4-GalT-Ⅰ在DCs中表达,他们作为粘附分子参与细胞粘附和免疫突触形成.
关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-Ⅰ 树突状细胞 粘附分子 免疫突触 -
细胞表面β-1,4-GaIT-Ⅰ在T淋巴细胞活化中的作用
本文探讨细胞表面β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galaetosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GaIT-Ⅰ)在Jurkat细胞活化过程中的作用.采用植物凝集素(phytohemagglutinin,PHA)刺激Jurkat细胞.CCK-8法检测Jurkat细胞增殖;分别采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)技术、Western blot技术及流式细胞术检测活化过程中的不同时间点β-1,4-GaIT-Ⅰ在Jurkat细胞中的表达变化;采用免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦技术观察Jurkat细胞表面β-1,4-GaIT-Ⅰ的分布.Jurkat细胞经PHA刺激后增殖,在36 h达高峰;细胞表面β-1,4-GaIT-Ⅰ的mRNA表达量、蛋白表达量以及平均荧光表达强度均较未活化状态增高;Jurkat细胞表面β-1,4-GaIT-Ⅰ在未活化状态下的平均分布于细胞表面,活化后其发生重排和聚集.结果提示在T细胞活化过程中细胞表面β-1,4-GaIT-Ⅰ分子的表达增高且发生了分布变化.
关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-Ⅰ 活化 T淋巴细胞 -
抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展
目的 综述抗真菌药物靶标及其抑制剂的研究进展.方法 本文结合自身研究工作,分析近5年文献,总结抗真菌药物靶标及其抑制剂的新进展.结果 β-1,3-葡聚糖合成酶、羊毛甾醇14α-去甲基化酶、N-肉豆蔻酰基转移酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶是目前研究为集中的抗真菌药靶,其抑制剂显示了良好的新药开发前景.结论 优化现有药物化学结构和发现全新作用机制的先导化合物,对研发新一代抗真菌药物具有重要意义.
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N-糖链合成相关β-1,4半乳糖基转移酶在人星形胶质细胞瘤中的表达
目的分析与N-糖链合成相关β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β1,4-galactosyltransferase Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)mRNA在正常脑组织和各级人星形胶质细胞瘤的表达变化.方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人星形胶质细胞瘤的表达存在.以扩增的3种同工酶cDNA片段作为探针进行标记,Northern blot分析其mRNA在正常脑组织和各级人星形胶质细胞瘤中的表达变化.结果RT-PCR检测到β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人星形胶质细胞瘤中的表达存在.northern blot发现β-1,4-GalT-Ⅱ、Ⅴ在正常脑组织中有表达,但β-1,4-GalT-Ⅱ的表达较低,而β-1,4-GalT-Ⅰ在正常脑组织中表达极低.β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在星形胶质细胞瘤中的表达显著高于正常脑组织.其中,β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ在各级胶质瘤中的表达没有明显差异.而β-1,4-GalT-Ⅴ的表达随胶质瘤分级的增高而增加.结论N-糖链合成相关的β-1,4-GalT-Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ在人脑星形胶质细胞瘤发生过程中的表达不同,尤其是β-1,4-GalT-Ⅴ的表达与人星型胶质瘤的恶性程度显著相关.
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鬼臼乙叉甙对SHG-44胶质瘤细胞表达β-1,4-半乳糖基转移酶V后粘附相关分子表达的影响
目的研究人脑星形胶质细胞瘤SHG-44细胞表达(β-1,4-半乳糖基转移酶V(beta-1,4-galactosyltransferase V,β-1,4-GalT V)后对化疗药物敏感性的影响,分析鬼臼乙叉甙(VP16)处理表达β-1,4-半乳糖基转移酶V的SHG-44细胞后其细胞粘附作用相关因子水平的变化.方法用120 μmol/L的VP16处理转染了正义、反义β-1,4-GalT V和空载体的SHG-44细胞24h后,采用western blot检测整合蛋白β1表达变化及局部粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的蛋白水平和FAK的酪氨酸磷酸化水平.结果在未经VP16处理的3株SHG-44细胞中,FAK的蛋白水平没有明显改变,而整合蛋白β1的蛋白表达在转正义β-1,4-GalT V的细胞中高;经VP16处理后,SHG-44细胞中整合蛋白β1的表达水平增高,FAK及其磷酸化水平下降.但整合蛋白β1,FAK及其磷酸化水平随细胞中β-1,4-GalT V表达水平不同而变化.结论VP16处理对表达不同水平的β-1,4-GalT V的SHG-44胶质瘤细胞的粘附影响有所不同,提示胶质瘤表达β-1,4-GalT V不仅与肿瘤的恶性行为有关,而且与肿瘤的化疗敏感性有关.
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β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ在先天性巨结肠的表达及意义
目的 观察β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)基因B4GALT1和蛋白在先天性巨结肠(HD)中的表达及其催化合成的β-1,4-半乳糖苷键(β-1,4-galactosylated carbohydrate,Galβ1-4GlcNAc)糖链在HD中的表达和分布,探讨它们与HD的发病关系及其意义.方法 运用RT-PCR和Western blot技术检测37例HD患儿狭窄段(无神经节细胞段)、移行段、正常段结肠肠壁组织和6例对照组肠套患儿中B4GALT1 mRNA和β-1,4-GalT-Ⅰ蛋白的表达,计算其相对量并进行比较分析.采用免疫组织化学方法观察肠壁内各层之间β-1,4-半乳糖苷键(利用特异性识别β-1,4-半乳糖苷键的蓖麻凝集素)的分布情况.结果 RT-PCR和Western blot结果显示B4GALT1基因及β-1,4-GalT-Ⅰ蛋白在狭窄段表达明显增高,从狭窄段到正常段逐渐减低,差异有统计学意义(P<0.05),HD扩张段和对照组肠段表达差异无统计学意义;免疫组化结果显示,特异识别β-1,4-半乳糖苷键糖链结构的蓖麻凝集素(RCA-Ⅰ)染色面积及染色强度从狭窄段到正常段依次减弱,差异有统计学意义(P<0.05),同样HD扩张段和对照组肠段RCA-Ⅰ的表达差异无统计学意义,两者呈正相关.结论 β-1,4-GalT-Ⅰ在HD狭窄段(无神经节细胞段)表达增高是内在的,它与HD的发生可能存在某种内在的联系.
关键词： β-1 4-半乳糖基转移酶-Ⅰ 蓖麻凝集素 先天性巨结肠 儿童 -
菊欧氏杆菌β-1,4-内切葡聚糖酶celY基因在大肠杆菌中的克隆、表达及活性分析
以菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增了该菌的β-1,4-内切葡聚糖酶celY基因及其调控元件并克隆至pUC19载体.测序结果经分析,该基因编码的蛋白序列与菊欧氏杆菌Ech586的β-1,4-内切葡聚糖酶同源性达到98％.将celY的开放阅读框基因插入到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌E.coli BL21( DE3),采用LB-CMC平板刚果红染色筛选含celY基因的转化子.12％ SDS-PAGE显示,重组菌经IPTG诱导后表达了目的蛋白,其相对分子质量与预期结果相符.CMCase活力测定显示重组pET-28a-celY阳性菌分泌到培养基中的CelY酶活力为84.4 U/L,周质中的酶活力为12.7 U/L.β-1,4-内切葡聚糖酶CelY工程菌的获得,为研究菊欧氏杆菌纤维素酶基因在菊欧氏杆菌同源转化中的表达及工程菌的酶学特性提供了重要的资料.
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菊欧氏杆菌β-1,4-内切葡聚糖酶celY基因在大肠杆菌中的克隆、表达及活性分析
以菊欧氏杆菌(Erwinia chrysanthemi)基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增了该菌的β-1,4-内切葡聚糖酶celY基因及其调控元件并克隆至pUC19载体.测序结果经分析,该基因编码的蛋白序列与菊欧氏杆菌Ech586的β-1,4-内切葡聚糖酶同源性达到98％.将celY的开放阅读框基因插入到表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌E.coli BL21( DE3),采用LB-CMC平板刚果红染色筛选含celY基因的转化子.12％ SDS-PAGE显示,重组菌经IPTG诱导后表达了目的蛋白,其相对分子质量与预期结果相符.CMCase活力测定显示重组pET-28a-celY阳性菌分泌到培养基中的CelY酶活力为84.4 U/L,周质中的酶活力为12.7 U/L.β-1,4-内切葡聚糖酶CelY工程菌的获得,为研究菊欧氏杆菌纤维素酶基因在菊欧氏杆菌同源转化中的表达及工程菌的酶学特性提供了重要的资料.
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根癌农杆菌介导β-1,4-半乳糖苷转移酶基因转化大豆及其转基因植株再生
以大豆下胚轴为外植体，通过根癌农杆菌介导转化法，建立起良好的转化系统，将人的β－1,4－半乳糖苷转移酶基因（hGT）导入大豆。经转化的外植体在添加100mg/L氨苄青霉素和50mg/L卡那霉素的选择培养基中可诱导出愈伤组织和芽再生，在1/2MS培养基上诱导生根，并培养成再生苗，获得了完整的抗性再生植株。进行Southern blot分子杂交鉴定，证实了外源基因hGT已稳定地整合到植物基因组中。
关键词： β-1 4-半乳糖苷转移酶基因 大豆下胚轴 根癌农杆菌介导法 转基因植株
