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串联质谱方法在苯丙酮尿症的实验诊断应用
新生儿苯丙酮尿症筛查中苯丙氨酸(Phe):2-3mg/dl的轻度苯丙氨酸血症,有可能是假阳性,是暂时性高苯丙氨酸血症或者是正常儿高限值.长期随访增加了小儿家庭心理和经济负担,同时也增加了新筛随访的工作量,影响各项筛查数据准确网上直报.通过串联质谱方法分析苯丙氨酸/酪氨酸比值,判断苯丙氨酸转化率,排除轻度HPA中假阳性病例.
关键词： 串联质谱 苯丙酮尿症 苯丙氨酸/酪氨酸比值 假阳性 -
应用串联质谱法快速测定尿液中氯胺酮及其代谢物的研究
目的:应用串联质谱(CI离子源)法进行尿中氯胺酮及其代谢物的快速测定.方法:取尿液2～3 mL,加入固体碳酸钠少量和丙酸酐80 μL,超声5 min,加入醋酸甲酯2 mL,超声萃取10 min后离心(4000 r·min-1)3 min,取上层有机相转入事先加入无水硫酸钠的样品瓶(4 mL容量)中,供GC-MS/MS测定.结果:本方法不仅适用于尿中氯胺酮原药的检验,同时满足尿中去甲氯胺酮、脱氢去甲氯胺酮的检验,回收率达90%以上,低检出浓度为:5×10-8g·L-1,GC-MS/MS的低检出限为0.05 ng.结论:本方法可满足确证48 h以内是否吸食过氯胺酮.
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超高效液相色谱-串联质谱法检测中成药中添加格列本脲、格列吡嗪
目的:建立快速、准确、高灵敏度的检测中成药降糖制剂中非法添加格列本脲、格列吡嗪的分析方法.方法:采用C18(50 mm×2.1 mm,1.7 μm)柱分离,以乙腈-0.01 mol·L-1乙酸铵(0.1%乙酸)缓冲溶液梯度洗脱,流速0.3 mL·nin-1,以多反应检测(MRM)方式进行检测.用于定量分析的二级碎片离子分别为m/z 321(格列吡嗪)和m/z 369(格列本脲).结果:格列吡嗪和格列本脲的线性范围分别为4.98～498 ng·mL-1和4.96～496 ng·mL-1.结论:此方法选择性强,灵敏度高,可作为中成药中非法添加格列本脲、格列吡嗪的分析检测方法.
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质谱能量分辨曲线法区分氧化脂类前列腺素异构体
目的:利用能量分辨曲线建立有效区分氧化脂类的质谱方法,为氧化脂类在细胞信号传导过程中机理的研究提供高灵敏、高效的异构体区分手段,特别是在没有对照品的情况下可以迅速地区分出氧化脂类位置异构体.方法:对照品经甲醇溶解,0.22 μm滤膜过滤后上机分析.采用电喷雾电离源负离子电离模式,喷雾电压2.6 kV,鞘气(N2)流量400 L·h-1,辅助气(N2)流量1 Arbs,离子传输毛细管温度250℃,扫描采用二级质谱子离子扫描模式,碰撞能量5～25 eV.结果:4对氧化脂类异构体PGB2和PGA2,PGE1和PGD1,5(R)-HETE、12 (S)-HETE和15 (S)-HETE,9 (S)-HODE和13 (S)-HODE不同碰撞能量下母离子与碎片离子绘制出能量分辨曲线.其中3对异构体PGE1和PGD1,9(S)-HODE和13(S)-HODE,5(R)-HETE、12(S)-HETE和15 (S)-H ETE)结构上的主要区别在于羟基位点不同,结果表明羟基位点离末端羧基位点较远,则在能量分辨曲线中表现为离子能量曲线变化趋势较小,化合物较稳定;而异构体(PGA2和PGB2)在结构上的主要区别是双键位置不同,在能量分辨曲线上可以观察到共轭体系的存在使得化合物相对稳定.并通过海带中存在的4种氧化脂类进行了验证,经稳定性试验分析,这4对氧化脂类日内、日间RSD小于7％.结论:本研究有效区分了前列腺素B2(PGB2)、前列腺素A2(PGA2)、前列腺素E1(PGE1)、前列腺素D1(PGD1)等9个氧化脂类成分,质谱能量分辨曲线法适用于氧化脂类位置异构体快速区分.
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亲水液相色谱-质谱联用法测定河豚子中的河豚毒素
目的:建立河豚子中河豚毒素的亲水液相色谱三重四极杆质谱联用(LC-MS/MS)定量检测方法.方法:样品经匀浆,超声,乙腈沉淀离心后取上清液进样测定.色谱柱为Innovation HP Amide柱(100 mm ×3.0 mm,5μm)；流动相为乙腈-0.3％甲酸(体积比为70∶30)；流速为0.5 mL·min-1;柱温为30℃；进样量5μL.以正离子多反应监测(MRM)方式进行定量分析,用于监测的离子对为[M+H] +320.1→162.1.结果:河豚毒素的线性范围为0.0313～2.00 μg·mL-1,r=0.9999;检测限(S/N=3)为0.30 ng·mL-1,即3.0 pg；加样回收率在95.9％～ 102.7％之间.结论:本法简单、快速,灵敏度高,重复性好,适用于河豚子中河豚毒素的定量测定.
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HILIC-MS/MS法测定人尿中内源性糖类化合物浓度
目的:利用亲水色谱-质谱联用技术对人尿中15个内源性糖类化合物进行快速测定.方法:分别对色谱条件、质谱条件和样品前处理方法进行优化,终以含内标的甲醇-乙腈(50∶50,v/v)为沉淀剂,按体积比5∶1加入到尿液中除杂,以含10 mmol·L-1醋酸铵的水-乙腈(95∶5,v/v)和含10 mmol·L-1醋酸铵的乙腈-水(95∶5,v/v)为流动相,梯度洗脱,样品经ACQUITY UPLC BEH Amide(2.1 mm× 100 mm,1.7μm)色谱柱分离,在多反应监测(MRM)模式下,采用电喷雾离子化源、负离子扫描模式进行定量分析.结果:人尿中糖类物质线性关系良好,大部分糖类物质r＞0.99,低检测限在0.075～30 nmol·L-1之间;日内、日间精密度范围分别为2.5％～7.6％和3.3％～7.3％,均小于15％;回收率范围为85.5％～ 115％;大部分化合物的基质效应在80％～ 120％之内,样品上清液4 ℃稳定性好,72 h内浓度变化范围为93.1％～106％,终测得20例健康人尿液中各糖的含量分别为(平均值±标准误差):楝二糖(2 668.1±134.4) nmol·L-1,蔗糖(5 070.6±277.6) nmol· L-1,麦芽糖(15 214.5±442.5)nmol· L-1,麦芽三糖(849.7±42.6)nmol· L-1,葡萄糖(173 965.0±4 918.9) nmol· L-1,果糖(22 172.5±1 463.6) nmol· L-1,棉子糖(292.1±17.6) nmol·L-1,肌苷(2 083.5±93.4) nmol·L-1,腺苷(2 645.5±78.2) nmol·L-1,甘露糖醇(83 925.0±3 938.6) nmol·L-1,赤藓糖醇(375 805.0±12 094.6) nmol· L-1,阿拉伯糖醇(192 921.1±5 689.2) nmol·L-1,麦芽四糖、木糖和核糖均低于定量限(分别低于60、600和3 000 nmol·L-1).结论:该方法能快速测定人尿液中15个内源性糖类化合物含量,对代谢组学后期的靶标验证、代谢机理研究等具有重要意义.
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质谱技术检测羊水代谢物对丙酸血症进行产前诊断
目的 探讨串联质谱及气相色谱质谱技术检测羊水中的酰基肉碱及有机酸用于丙酸血症(propionic acidemia,PA)产前诊断的诊断价值.方法 收集2010年-2016年40例于上海交通大学医学院附属新华医院进行产前诊断且生育过PA患儿的孕妇作为PA母亲组.从同期进行常规产前诊断孕妇中随机选取40例作为对照组.2组孕妇均于妊娠16～20周进行羊膜腔穿刺术抽取羊水.采用串联质谱检测羊水丙酰肉碱(propionylcarnitine,C3)、乙酰肉碱(acetylcarnitine,C2)水平,采用气相色谱质谱检测羊水甲基枸橼酸、3-羟基丙酸水平,部分羊水细胞进行基因检测.结果 PA母亲组4例孕妇羊水C3[9.53(6.06～11.45) μmol/L]、C3/C2[1.03(0.62～1.43)]、甲基枸橼酸[3.15(2.05～4.58) mmol/mol肌酐]水平均高于对照组[1.14(0.52～3.40)μmol/L,0.11 (0.05～0.22),0.00(0.00～0.34) mmol/mol肌酐],提示胎儿为PA阳性患儿,检出率为10％;其中3例进行了基因突变检测均检测到突变位点.3-羟基丙酸在对照组与阳性组之间差异无统计学意义.结论 PA孕妇再生PA患儿的几率为10％左右,可利用串联质谱及气相色谱质谱技术检测羊水中的C3、甲基枸橼酸水平,对先证者为PA的孕妇进行产前诊断.
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石家庄市区省直幼儿园单纯性肥胖儿童全血氨基酸水平调查分析
目的 研究石家庄市区省直幼儿园儿童单纯性肥胖发生率及单纯性肥胖儿童全血11种氨基酸水平,探讨全血氨基酸水平与儿童肥胖的关系,为临床诊断和治疗干预提供科学依据.方法 对省直幼儿园全体3～6岁3516例儿童进行体检,随机选出54名单纯性肥胖儿童做为观察组,按照一比一配对原则选出54名正常体重儿童作为对照组,采用串联质谱法对以上儿童进行全血氨基酸测定,利用SPSS11.0统计软件包进行数据处理.结果 观察组患儿的全血氨基酸水平与对照组存在差异,其中丙氨酸(ALa)、缬氨酸(Val)、鸟氨酸(Orn)、亮氨酸(Leu)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);甘氨酸(Gly)、精氨酸(Arg)、瓜氨酸(Cit)、脯氨酸(Pro),两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 单纯性肥胖儿童多数全血氨基酸水平高于正常体重儿童,动态监测血氨基酸水平,可以为临床医生对单纯性肥胖儿童进行干预提供科学依据.
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幼儿园单纯性肥胖儿童全血肉碱水平调查分析
目的 研究石家庄市区省直幼儿园儿童单纯性肥胖发生率及单纯性肥胖儿童全血31种肉碱水平, 探讨全血肉碱水平与儿童肥胖的关系, 为临床诊断和治疗干预提供科学依据.方法 对省直幼儿园全体3～6岁3516例儿童进行体检, 随机选出54例单纯性肥胖儿童做为观察组, 按照1∶1配对原则选出54名正常体重儿童作为对照组, 采用串联质谱法对以上儿童进行全血肉碱测定, 利用SPSS11.0统计软件包进行数据处理.结果 观察组患儿的全血肉碱水平存在不平衡, 其中血游离肉碱 (CO) 、乙酰肉碱 (C2) 、丙酰肉碱 (C3) 、3-羟基异戊酰肉碱 (C5-OH) 、异戊酰肉碱 (C5) 、异戊烯酰肉碱 (C5:1) 、辛烯酰肉碱 (C8:1) 、葵二烯酰肉碱 (C10:2) 、3-羟基-十四碳酰肉碱 (C14OH) 、十六碳酰肉碱 (C16) 、十六碳烯酰肉碱 (C16:1) 、18碳烯酰肉碱 (C18:1) 、18碳二烯酰肉碱 (C18:2) 高于对照组, 差异有统计学意义 (P＜0.05);丙二酰肉碱 (C3DC) 、丁酰肉碱 (C4) 、戊二酰肉碱 (C5DC) 、已酰肉碱 (C6) 、已二酰肉碱 (C6DC) 、辛酰肉碱 (C8) 、葵酰肉碱 (C10) 、葵烯酰肉碱 (C10:2) 、十二碳酰肉碱 (C12) 、十二碳烯酰肉碱 (C12:1) 、十四碳酰肉碱 (C14) 、十四碳烯酰肉碱 (C14:1) 、十四碳二烯酰肉碱 (C14:2) 、3-羟基-十六碳酰肉碱 (C16OH) 、3-羟基-十六碳烯酰肉碱 (C16:1 OH) 、18碳酰肉碱 (C18) 、3-羟基-十八碳酰肉碱 (C18OH) 、3-羟基-十八碳烯酰肉碱 (C18:1 OH), 两组间差异均无统计学意义 (P均>0.05) .结论 单纯性肥胖儿童多种全血肉碱水平高于正常体重儿童, 动态监测肥胖儿童血肉碱水平, 可以为临床医生对单纯性肥胖儿童进行干预提供科学依据.
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串联质谱—新生儿疾病筛查技术的发展趋势
新生儿疾病筛查经过几十年的不断发展,筛查病种逐步增多,筛查技术也不断提高.近年来串联质谱技术在我国也不断得到开展和应用,在遗传代谢病的筛查研究中取得了不错的进展,大大促进了我国新生儿疾病筛查的发展.
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高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉中硝基呋喃类抗生素代谢物
用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS-MS)同时测定动物肌肉中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因的代谢物.盐酸水解组织中蛋白结合代谢物,同时加入2-硝基苯甲醛(2-NBA),37℃过夜衍生.上清液调pH值7.0后,用Oasis HLB固相萃取(SPE)柱净化.采用电喷雾电离(ESI),正离子,选择反应监测(SRM)模式检测.三离子原则,外标法定量.定量限(LOQ)5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)、3-氨基-2-唑烷基酮(AOZ)均为0.1ng/g,氨基脲(SEM)、1-氨基-乙内酰脲(AHD)均为0.5nng/g;检测限(LOD)AMOZ、AOZ均为0.05ng/g,SEM、AHD均为0.1 ng/g.在添加浓度0.5～10ng/g范围内,AMOZ回收率为65.4%～91.3%,SEM回收率为62.7%～94.6%,AHD回收率为63.9%～89.4%,AOZ回收率为67.8%～90.9%.相对标准偏差(RSD)均小于4.8%.
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UPLC/MS/MS测定动物组织中4种氟喹诺酮类药物残留量
本文建立了动物组织中4种氟喹诺酮类药物(恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星)同时检测的超高效液相色谱串联质谱法.采用乙腈提取样品中的药物,然后加入乙腈饱和正己烷脱脂、除杂,提取液浓缩、定容后进超高效液质联用仪(UPLC/MS/MS)检测,外标法定量.方法的回收率为75%～100%,相对标准偏差<10%,定量限为1μg/kg.
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质谱技术联合基因分析进行 β-酮硫解酶缺乏症的产前诊断
目的 采用质谱技术及基因分析技术,探讨 β-酮硫解酶缺乏症(β-ketothiolase deficiency,BKD)的产前诊断方法.方法 分析1例BKD患儿的临床特征、血尿串联质谱特点及基因检测结果.其母亲再次妊娠后,于妊娠17周抽取羊水,利用串联质谱检测羊水中异戊烯酰基肉碱(C5︰1)及3-羟基异戊酰基肉碱(C5-OH)水平,气相质谱检测羊水中2-甲基-3-羟基丁酸及甲基巴豆酰甘氨酸水平,羊水细胞进行基因检测,判断胎儿是否为BKD患儿.结果 先证者临床表现为反应差、呼吸困难、乏力等,代谢性酮症酸中毒急性发作死亡.其母亲再次妊娠,羊水C5︰1、C5-OH、2-甲基-3-羟基丁酸及甲基巴豆酰甘氨酸水平均正常,提示胎儿正常,出生后新生儿质谱血尿检测正常.其母亲第3次妊娠,羊水中C5︰1水平增高(0.26μmol/L),C5-OH正常;2-甲基-3-羟基丁酸增高(0.8 mmol/mol肌酐),甲基巴豆酰甘氨酸水平正常;羊水细胞ACAT1基因检测发现c.1124A>G(p.N375S)纯合错义突变,与先证者一致,提示此胎儿为BKD患儿.结论 质谱技术联合基因分析有助于BKD的产前诊断.
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串联质谱在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用价值
目的 分析临床上对新生儿是否患有遗传代谢性疾病进行筛查的过程中串联质谱的应用价值.方法 本次研究中,选取2016年5月-2017年5月期间入院进行常规筛查的200例儿童作为研究对象,对其进行足跟血样的采集,将采集得到的血液滴在采血专用的滤纸上,使用非衍生化多种氨基酸肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒对样本进行处理,采用串联质谱仪进行血片中的多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮浓度的分析工作.结果 经过对200例研究对象的血液标本进行分析后发现,3例标本的检测结果为阳性,占研究对象总数的1.5％,其中,1例研究对象患有异戊酸血症,2例研究对象患有甲基丙二酸尿症.结论 在对于新生儿的遗传代谢性疾病进行筛查的过程中,应用串联质谱技术具有良好的检测效果,其对于脂肪酸代谢的紊乱、有机酸代谢的紊乱以及氨基酸代谢的紊乱等造成的疾病都能很好地进行检测,在临床上具有良好的推广价值.
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串联质谱技术在宁夏新生儿遗传代谢病筛查中的初步应用分析
目的:应用串联质谱技术分析对宁夏地区新生儿遗传代谢病筛查情况.方法:收集2015年6月至2016年11月宁夏各县区出生的新生儿10816例,年龄为出生后24h至30d,采用串联质谱技术对血片中氨基酸、有机酸及脂肪酸的浓度进行检测.结果:共发现阳性病例9例,7例为PKU患儿;1例枫糖尿病患儿,1例戊二酸血症患儿.可疑阳性314例,占2.90%.并对失访因素进行调查分析,错号及停机为主要原因.结论:串联质谱技术在本地区处于初步应用阶段,其对于新生儿遗传代谢性疾病的筛查具有较高的敏感性与特异性,对于遗传代谢性疾病的早期筛查和诊断有重要的应用价值,弥补我区此技术筛查空白.
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小于胎龄儿干血滤纸游离肉碱分析
目的 探讨分析足月小于胎龄儿(smal for gestational age infant,SGA)游离肉碱特点.方法 在2014年6月——2016年12月期间,选取广东省惠州市第三人民医院45名足月小于胎龄儿(SGA组)和66名足月适于胎龄儿(appropriate for gestational age,AGA)(AGA组)作为研究对象,利用串联质谱技术对其足跟末梢的血液标本进行游离肉碱检测,对检测数据进行统计学分析.结果 利用正态性检验方法发现,游离肉碱数据呈偏态分布.SGA组游离肉碱中位数为19.01umol/L,第5至第95百分位数为12.28-34.68umol/L,AGA组游离肉碱中位数为21.03umol/L,第5至第95百分位数为15.29-40.31umol/L,两组间游离肉碱比较有统计学差异(Z=-2.228,P<0.05).结论 SGA的游离肉碱水平低于正常体重新生儿,可能与其宫外发育迟缓密切相关.因此,临床医师应加强对该群体患儿的干预及后期指导能力,促进其健康成长.
