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超声波辅助提取穿山龙中薯蓣皂苷元的实验研究
目的:研究一种测定穿山龙中薯蓣皂苷元时快速提取薯蓣皂苷元的新方法--超声辅助水解原位萃取法.方法:对影响提取率的重要因素进行了考察,以期建立佳提取条件.结果:样品在料液比为1:15(g:mL)条件下,用浓硫酸-异丙醇-水(8:22:70)溶液在90℃下超声辅助回流2h,获得佳的提取率.结论:超声辅助水解原位萃取法省时、操作简便、重现性好.
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HPLC法测定地奥心血康胶囊中薯蓣皂苷元的含量
目的:建立地奥心血康的准确定量质控方法.方法:采用高效液相色谱法测定地奥心血康中主要成分薯蓣皂苷的含量.结果:地奥心血康中薯蓣皂苷进样量在0.165～3.389 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为98.2%,RSD=1.7%.结论:该方法操作简单、方便、重现性好,用于控制地奥心血康的含量,可信度高.
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不同产地百合中皂苷含量的比较研究
目的:比较不同产地百合中皂苷的含量.方法:采用高效液相色谱法.结果:以薯蓣皂苷元来计,湖南龙山、湖南龙回、兰州、江苏宜兴、江西皂苷含量分别为0.279%,0.246%,0.104%,0.184%,0.171%.结论:不同产地百合中皂苷的含量具有较大差异,其中以湖南龙山的含量高.
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薯蓣皂苷元对昆明鼠的亚慢性毒性实验＊
目的：评估薯蓣皂苷元对小鼠的亚慢性毒性作用。方法：采用随机数字表法将80只小鼠分为0（对照）、100、200、400 mg·kg-1共4组，每天灌胃1次，连续给药90天，评估薯蓣皂苷元对小鼠的亚慢性毒性作用。观察指标包括小鼠体质量、毛色、饮食、粪便情况等，检测指标包括血常规分析、血液生化检查和病理学检查。结果：与对照组相比，雄性药物组小鼠体质量略减轻。血液学和病理学检查并无明显异常。结论：薯蓣皂苷元亚慢性毒性无可见不良效应剂量水平大于400 mg·kg-1，口服给药较为安全。
关键词： 薯蓣皂苷元 穿山龙 亚慢性毒性 无可见不良效应剂量水平 -
薯蓣皂苷元对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞极化状态的影响
目的 探讨薯蓣皂苷元(diosgenin)对脂多糖(LPS)诱导下BV2小胶质细胞极化状态的影响.方法 将BV2细胞根据不同的处理方法分为对照组,LPS组,LPS+薯蓣皂苷元组.使用MTT法检测BV2细胞的增殖能力,使用ELISA法检测BV2细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素10(IL-10)水平,使用实时荧光定量(RT-PCR)法检测BV2细胞IL-10,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及精氨酸酶(Arg-1)mRNA水平.结果 使用不同浓度的薯蓣皂苷元处理BV2细胞后,各浓度的薯蓣皂苷元对BV2细胞的增殖影响无统计学意义(P>0.05),而加入LPS刺激后,发现25 μg/ml薯蓣皂苷元为适浓度,且其佳作用时间点为24 h(P<0.05);薯蓣皂苷元可以抑制在LPS诱导下BV2细胞TNF-α水平以及iNOS表达,同时提高IL-10水平以及Arg-1表达(P<0.05).结论薯蓣皂苷元可以通过抑制M1型小胶质细胞极化以及促进M2型小胶质细胞极化进而发挥抗炎的作用.
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HPLC-ELSD测定穿山龙中薯蓣皂苷元
目的:建立高效液相色谱蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量,并与2005年版<中国药典>方法紫外检测器(DAD)测定的结果进行比较.方法:Agilent EclipseXDB-C(18)柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相甲醇水(95:5),柱温40℃;ELSD检测器漂移管温度为70℃,载气压力367.5 Pa,Gain7,Filterl;进样量10 μL.结果:薯蓣皂苷元在2.60～20.8 μg线性关系良好(r=0.999 94),平均回收率为97.3%,RSD 1.94%.结论:该方法简便,灵敏,准确性高,可作为穿山龙中薯蓣皂苷元含量测定的方法;与DAD相比,该法所得图谱基线平整,检测灵敏度高.样品分离度好,测得样品含量偏高.
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HPLC法测定痛风宁微丸中薯蓣皂苷元的含量
目的:建立痛风宁微丸中薯蓣皂苷元的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定痛风宁微丸中薯蓣皂苷元的含量.色谱法分析条件为Agilenttc-C18柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),流动相乙腈-水溶液(10:90),流速1.0 mL· min-1,柱温17℃,检测波长203 nm.结果:薯蓣皂苷元量在1.000 ～5.000μg与峰面积呈良好的线性关系r＝0.999 7,平均回收率101.95％,RSD 0.08％.结论:本方法简便可行、结果准确可靠,重复性好,可作为痛风宁微丸中薯蓣皂苷元的含量测定方法.
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复方必清片的提取工艺优选
目的:优选复方必清片的提取工艺.方法:在单因素试验基础上,以薯蓣皂苷元、秋水仙碱含量和浸膏得率的综合评分为指标,通过正交试验优选菝葜等7味药材的乙醇提取工艺;以总多酚含量和浸膏得率为综合评价指标,通过正交试验优选余甘子等5味药材的水提取工艺.采用HPLC测定薯蓣皂苷元和秋水仙碱的含量,色谱条件为Cosmosil C18色谱柱(4.6mm × 250 mm,5μm),柱温35℃,流速1.0 mL·min-1,进样量10 μL,检测波长分别为203,350 nm,流动相分别为甲醇-水(90∶ 10),甲醇-水(37∶63);采用紫外分光光度法测定总多酚含量.结果:菝葜等7味药材的佳提取工艺为加10倍量70％乙醇提取2次,每次1.=h;余甘子等5味药材的佳提取工艺为加10倍量水提取3次,每次1.=h.结论:优选的提取工艺稳定可行,为复方必清片的质量控制提供实验依据.
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护肾康片质量标准研究
目的:探讨护肾康片质量控制方法.方法:用薄层层析法(TLc法)鉴别其中绵萆薢、白花蛇舌草.用高效液相色谱法(HPLC法)测定绵萆薢中薯蓣皂苷元含量、白花蛇舌草中齐墩果酸含量.色谱条件为lichrospher C18柱,流动相分别为甲醇.0.1%磷酸(92:8),甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(87:13:0.04:0.02),检测波长为201 nm,205 nm.结论:所用方法可用于护肾康片质量控制.
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运用细胞代谢组学策略探究薯蓣皂苷元的抗肿瘤作用机制
目的:应用基于UPLC-MS/MS的细胞代谢组学研究策略,从肿瘤细胞整体层面探究薯蓣皂苷元的抗肿瘤作用机制.方法:采用噻唑蓝法考察薯蓣皂苷元对12种肿瘤细胞的抑制作用,获得相应的半抑制浓度(IC50),检测分析薯蓣皂苷元干预48 h后细胞内的代谢物,采用化学计量学和多维数据统计方法比较干预后的细胞与空白组细胞代谢物的差异,并分析其代谢通路.结果:在薯蓣皂苷元的干预下,细胞内共有11种代谢物发生了显著变化,主要涉及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,氨酰-tRNA的生物合成,谷氨酰胺和谷氨酸代谢,嘌呤代谢,精氨酸和脯氨酸代谢5条代谢通路;薯蓣皂苷元对于不同细胞系的抑制作用差异显著.结论:该研究丰富了薯蓣皂苷元的体外抗肿瘤谱,在体外细胞水平和代谢通路上提供了该药物抗肿瘤作用的可能机制,为薯蓣皂苷元的后续肿瘤药理学研究提供实验依据.
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商品天冬等级与其活性物质含量的相关性分析
目的:测定不同等级天冬药材中醇溶性浸出物和活性物质总皂苷、总多糖的含量,分析天冬商品等级与醇溶性浸出物、活性物质含量之间的相关性,考察商品天冬等级划分方法的合理性.方法:根据2015年版《中国药典》测定不同商品等级天冬药材醇溶性浸出物含量;采用紫外-可见分光光度法测定37份不同等级天冬中总皂苷含量,检测波长408 nm;采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量,检测波长490 nm;运用相关分析和线性回归分析天冬药材醇溶性浸出物、总皂苷及总多糖含量与商品等级间的相关性.结果:不同等级天冬药材醇溶性浸出物和总皂苷含量有显著性差异(P＜0.05),一等品与三等品比较天冬总多糖含量具显著性差异(P＜0.05),其余各等级间总多糖含量差异无显著性.在相关性分析中,天冬商品等级与醇溶性浸出物、总皂苷含量呈极显著正相关关系(P＜0.01),与总多糖含量呈显著正相关关系(P＜0.05).结论:商品天冬以药材中部直径为主要标准的分级方法能体现天冬醇溶性浸出物和内在活性物质总皂苷含量,传统等级划分方法仍具有合理性;天冬药材建议以测定总皂苷含量为主,醇溶性浸出物和总多糖含量作为辅助质量评价指标.
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薯蓣皂苷元对大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG/RANKL mRNA表达的影响
目的:研究薯蓣皂苷元对体外培养的大鼠成骨细胞增殖、分化及护骨素/核因子κB受体活化因子配基(OPG/RANKL)mRNA的影响,探讨薯蓣皂苷元预防与治疗骨质疏松的作用机制.方法:在体外培养的大鼠成骨细胞培养基中分别加入不同浓度的薯蓣皂苷元作用不同时间,用MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,检测成骨细胞内ALP活性分析药物对成骨细胞分化的影响,用半定量RT-PCR检测成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的表达量,分析药物对破骨细胞重要信号传导通路OPG/RANKL/RANK系统的影响.结果:3.64×10~(-8)-3.64×10~(-7)mol/L的薯蓣皂苷元作用于大鼠成骨细胞3d,可促进成骨细胞的增殖(P<0.01),上调成骨细胞内OPG/RANKL mRNA的比值(P<0.01);作用7d,可提高成骨细胞内ALP活性(P<0.05或P<0.01).结论:适量浓度薯蓣皂苷元可促进成骨细胞的增殖、分化及抑制破骨细胞的形成.
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基于NF-κB信号通路的薯蓣皂苷元抗骨肉瘤作用机制研究
目的:探讨薯蓣皂苷元抗骨肉瘤作用机制与NF-κB信号通路的关系.方法:建立移植人骨肉瘤荷瘤裸鼠模型,观察薯蓣皂苷元对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用.RT-PCR法、Envision法检测薯蓣皂苷元对荷瘤裸鼠NF-κB及Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的影响.结果:薯蓣皂苷元各剂量组对移植人骨肉瘤荷瘤裸鼠肿瘤生长具有明显抑制作用,平均抑瘤率达30％-60％.与对照组比较,薯蓣皂苷元明显抑制荷瘤裸鼠NF-κB的表达,降低Bcl-2的表达,增加Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达(P＜0.05),呈现出较好的量效关系.结论:薯蓣皂苷元诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是通过抑制NF-κB信号通路活化和调控NF-κB信号通路下游相关靶基因实现的,NF-κB信号通路及其关键环节是骨肉瘤潜在的治疗靶点.
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薯蓣皂苷元含药血清对IL-17和TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 NF-κB p65、AP-1的影响
目的:通过观察薯蓣皂苷元含药血清对白介素-17 (IL-17)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)联合诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364核转录因子-κB(NF-κB)p65及活化蛋白-1(AP-1)表达的影响,探讨薯蓣皂苷元抑制类风湿关节炎(RA)血管新生可能的信号转导通路作用机制.方法:实验分为空白对照组、RA细胞模型组、薯蓣皂苷元含药血清组与雷公藤含药血清组,应用TransAMTM NF-κB p65活性检测试剂盒检测NF-κB p65的DNA结合活性,应用EMSA方法检测AP-1的DNA结合活性.结果:与RA细胞模型组相比,薯蓣皂苷元含药血清组的NF-κB p65DNA结合活性显著降低(P＜0.01),薯蓣皂苷元含药血清组AP-1的DNA结合活性降低(P＜0.01).结论:薯蓣皂苷元含药血清可以抑制IL-17和TNF-α联合诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364细胞模型NF-κB p65、AP-1的DNA结合活性,从而起到抑制RA血管新生的作用.
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盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态研究
目的 研究盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态,确定适宜的采收期.方法 对不同采收期不同根茎中薯蓣皂苷元含量及含水量进行分析.结果 种根在6月上旬到10月中上旬之间,薯蓣皂苷元含量呈缓慢的上升趋势,10月下旬以后就急剧下降.新生根茎在6月上旬到8月中下旬之间薯蓣皂苷元含量呈上升趋势,然后逐步下降,到10月下旬同样明显下降;生长期内种根与新生根茎含水量变化趋势不同,而且薯蓣皂苷元含量与含水量无相关关系.结论 考虑到产量和薯蓣皂苷元含量两方面因素,10月中下旬采收盾叶薯蓣较为适宜.
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土壤酸碱度和质地对盾叶薯蓣品质的影响
目的探讨土壤酸碱度和质地对盾叶薯蓣薯蓣皂苷元含量的影响.方法采用HPLC法对生长在不同酸碱度和质地土壤上的盾叶薯蓣薯蓣皂苷元含量进行分析.结果不同质地土壤上的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量差异不明显,但以沙壤土上的薯蓣皂苷元含量较高;生长在酸性、中性和微碱性土壤中的盾叶薯蓣薯蓣皂苷元含量较高,碱性越强,薯蓣皂苷元含量越低.结论盾叶薯蓣虽然对土壤质地的要求并不敏感,但是对土壤酸碱性的要求相当严格,因此,盾叶薯蓣引种驯化前,土壤酸碱性的检测是一个不可忽略的因素.
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盾叶薯蓣离体培养体系的建立及薯蓣皂苷元含量分析
以盾叶薯蓣叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对盾叶薯蓣愈伤组织、不定芽及再生植株的影响,并对不同材料诱导获得的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行了分析.结果表明,诱导愈伤组织的适培养基为MS+BA2.0 mg·L-1+2:4D0.1mg·L-1;诱导不定芽及芽生长的培养基的适培养基为MS+BA0.1 mg·L-1(0.05mg·L-1)+病毒唑5 mg·L-1:诱导试管苗生根的适培养基为MS/2+IAA0.2mg·0-1+NAA0.2mg·L-1.相同外植体诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显;不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异明显.
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三峡库区栽培重楼属药用植物中薯蓣皂苷元含量测定
目的：建立高效液相色谱法测定重楼中薯蓣皂苷元含量，考察不同产地和不同品种重楼属药用植物中薯蓣皂苷元的含量。方法采用岛津Inertsil ODS-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5μm），以乙腈-水（92∶8）为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长203 nm，柱温30℃。结果不同产地、不同品种的重楼属药材中均含有薯蓣皂苷元，渝北区的长药隔重楼含量高（6.8137 mg/g），城口县的狭叶重楼含量次之（5.7584 mg/g），低的为石柱县的滇重楼（1.9522 mg/g），表明不同栽培品种重楼药材化学品质差异较大，可能与产地、品种及栽培技术等因素有关。结论非药典品种长药隔重楼、狭叶重楼含量超过中国药典收载品种，具有较大的药用价值。
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盾叶薯蓣航天诱变种子实生苗的生物学特性和有效成分测定
目的:筛选优质盾叶薯蓣种质资源,探讨卫星搭载对盾叶薯蓣变异效应.方法:利用返回式卫星搭载盾叶薯蓣种子进行空间诱变处理,对空间诱变后的2个居群盾叶薯蓣的种子活力、植株生长、染色体以及薯蓣皂苷元含量进行研究.结果:空间诱变后种子表现为萌发提前,但对种子发芽率影响不明显,出现非整倍体和染色体加倍现象,二年生根状茎鲜重和薯蓣皂苷元含量显著高于对照,但三年生根状茎增重变缓,同时薯蓣皂苷元含量均有不同程度下降.结论:卫星搭载对盾叶薯蓣的种子活力有一定的促进作用,同时改变了染色体结构,二年生根状茎鲜重和薯蓣皂苷元含量显著高于对照,提供了良好的选育材料,但三年生的根状茎鲜重增长变缓,薯蓣皂苷元有下降趋势,有待进一步研究.
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大鼠肠内菌对黄山药总皂苷代谢及代谢产物鉴定
目的:观察大鼠肠内菌离体对黄山药总皂苷(TSDP)的代谢及整体给予TSDP后吸收入血成分鉴定.方法:用薄层色谱 (TLC) 及电喷雾质谱 (ESI-MS)法检测离体肠内菌对TSDP的代谢产物.给大鼠ig TSDP 900 mg*kg-1,于给药后不同时间采集尿及血样品,用ESI-MS检测吸收入血成分.结果:TSDP容易被大鼠消化道菌群代谢,随着代谢时间的延长,出现了各种甾体皂苷的降解产物及终产物薯蓣皂苷元(Dio).整体实验表明,在大鼠血及尿中均发现分子量为 415.3(amu)的代谢产物,经ESI-MS二级质谱分析,上述分子量的单体化合物为Dio.结论:TSDP可被大鼠肠内菌代谢,大鼠ig TSDP后Dio被吸收入血中.
