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醛固酮自分泌环在高糖致人系膜细胞损伤中的作用
目的 研究高糖环境下人系膜细胞(HMC)中醛固酮自分泌环及活性氧(ROS)、癌胚纤连蛋白(FN)表达水平的变化,进一步探讨醛固酮白分泌环与ROS、癌胚FN mRNA表达的关系.方法 常规培养HMC,取对数生长期细胞分为5组:正糖组(5mmol/L D-葡萄糖),渗透压对照组(5mmol/L D-葡萄糖+20mmol/L L-葡萄糖),正糖+依普利酮组(5mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮),高糖组(25mmol/L D-葡萄糖),高糖+依普利酮组(25mmol/L D-葡萄糖+ 10 μmol/L依普利酮).采用RT-PCR法检测醛固酮合酶(CYP11B2)、11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ(11 β HSD2)、癌胚FN mRNA表达水平,Western blotting检测CYP11B2蛋白表达水平,放射免疫法分析细胞培养液中醛固酮水平,通过激光共聚焦显微镜观察盐皮质激素受体(MR)蛋白表达及转位情况,荧光显微镜和荧光酶标仪检测细胞内ROS水平.结果 与正糖组比较,高糖组HMC细胞CYP11B2 mRNA及蛋白表达上调,ROS和癌胚FN mRNA表达亦上调,培养液中醛固酮浓度升高(P＜0.05).高糖可促进MR蛋白发生核转位,定量分析显示高糖组胞质/胞核荧光强度比值较正糖组降低30％(P＜0.05).与高糖组比较,高糖+依普利酮组ROS及癌胚FNmRNA表达下调(P＜0.05).结论 高糖负荷可通过激活HMC局部醛固酮自分泌环而导致HMC损伤.
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反义转化生长因子β1表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞增殖活性的影响
目的:构建反义TGFβ1基因,探讨阻断肿瘤细胞TGFβ1自分泌环对细胞增殖活性的影响.方法:采用RT-PCR获取人TGFβ1 cDNA后,构建反义TGFβ1表达载体pcDNA3-TGFβ1(-).将pcDNA3-TGFβ1(-)转染骨肉瘤细胞MG-63,采用流式细胞仪检测阻断TGFβ1自分泌环对肿瘤细胞增殖活性的影响.结果:pcDNA3-TGFβ1(-)转染骨肉瘤细胞后,反义基因转染细胞MG-TGFβ1(-)的G0/G1期细胞从56.2%和60.1%增至71.6%,S期细胞从19.1%和17.8%降至12.9%,细胞增殖活性明显降低.结论:通过阻断TGFβ1自分泌环以降低骨肉瘤细胞表达的TGFβ1,可以明显抑制肿瘤细胞增殖活性.进一步的深入研究,必将为骨肉瘤疗效的提高开辟新的研究方向.
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神经生长因子的促乳腺癌生长效应及信号传导机制研究进展
神经生长因子(NGF)是神经营养因子家族成员之一,能维持神经细胞的存活和正常功能[1],促进受损神经细胞再生[2]、修复[3].近来证明它是乳腺癌进展的重要生物学基础.在乳腺癌细胞中,NGF高表达,并通过"自分泌环"产生的一系列的信号传导,表现出促进肿瘤生长的生物学效应[4,5].现就神经生长因子及受体、对乳腺癌的生物学效应以及信号传导机制做出综述.
