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野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞药物敏感性的影响
目的研究野生型INK4a/ARF基因共转染对人肺腺癌A549细胞药物敏感性的影响.方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3-p16INK4a和pcDNA3-p14ARF同时导入该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞系中,确定其编码的蛋白p16INK4a和p14ARF稳定表达;在设立空白组和空质粒转染组的情况下,用5种不同作用机制的常用肺癌化疗药物(阿霉素、顺铂、拓朴替康、诺维本和紫杉醇)作用于转染前后的细胞,利用MTT法测定各种不同药物的50%抑制浓度(IC50),并测定在该浓度作用下转染细胞的凋亡指数.结果转染INK4a/ARF基因后,A549细胞对阿霉素和顺铂的IC50值显著降低(P<0.05),而拓朴替康、诺维本和紫杉醇的IC50值无明显变化(P>0.05);阿霉素和顺铂诱导的凋亡指数也明显高于其他3种药物.结论恢复p16INK4a和p14ARF蛋白的表达可改变A549细胞对部分化疗药物的敏感性.
关键词： 癌 非小细胞肺 INK4a/ARF基因 转染 微生物敏感性试验 -
INK4a/ARF基因与妇科肿瘤
细胞周期调控以及细胞凋亡与肿瘤的发生、发展密切相关,是现今肿瘤分子生物学研究的热点问题之一,其中癌基因和抑癌基因对细胞周期及凋亡通路调节的失控是细胞癌变的重要原因.INK4a/ARF(Inhibitor of Cyclin-Dependent Kinase 4a-Alternative Reading Frame)基因是新近发现的一种抑癌基因,它包含两个重叠的基因:p16INK4a和 p14ARF[1],通过干扰Rb蛋白和p53的功能,导致细胞周期调节紊乱和凋亡反应阻抑.INK4a/ARF基因与肿瘤的发生、发展有一定的相关性,它与妇科肿瘤之间的关系已倍受关注.
关键词： INK4a/ARF基因 妇科肿瘤 -
ARF蛋白--p53蛋白的重要调控因子
ARF蛋白是INK4a基因位点编码产物之一.ARF能抑制MDM2介导的p53降解和p53转录下调,某些癌基因和调节因子能通过ARF蛋白调节p53蛋白的功能,从而对细胞周期进程产生影响.在黑色素瘤、血液系统肿瘤、肺癌、肠道肿瘤中均发现有ARF的突变或缺失,ARF蛋白在肿瘤发生发展中可能有重要作用.
关键词： INK4a/ARF基因 ARF蛋白 P53蛋白 细胞周期 凋亡 -
野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞生物学行为的影响
背景与目的INK4a/ARF基因是重要的细胞周期调控基因,其表达产物p16INK4a和p14ARF蛋白分别在Rb和p53通路中发挥重要调节作用.本研究将野生型INK4a/ARF基因同时转染到该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞中,研究其对该细胞生物学行为的影响.方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3-p16INK4a和pcDNA3-p14ARF同时导入A549细胞系中,确定所编码蛋白p16INK4a和p14ARF稳定表达;在设立空白组和空质粒转染组的情况下,进行了转染前后细胞生长曲线、克隆形成率、周期分布、凋亡指数等指标的检测和分析.结果转染INK4a/ARF基因后的细胞G2/G1期比例为59.9%,与未转染(51.2%)及空质粒转染(50.3%)细胞相比差异显著(P值分别为0.043和0.025),同时S期和G2/M期的比例下降;转染后细胞克隆形成率为63%,未转染细胞和空质粒转染细胞分别为85%和87%(P值均＜0.01),凋亡指数明显增加,转染INK4a/ARF基因后的细胞凋亡率为8.0%,另两种细胞均为2.7%,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论阳离子脂质体可以有效地将INK4a/ARF基因导入A549细胞,并可以抑制A549细胞的生长,促进凋亡作用的增强,为将来肺癌的基因治疗提供了实验依据.
关键词： 非小细胞肺癌 INK4a/ARF基因 转染 细胞周期 -
肺鳞癌INK4a/ARF基因启动子甲基化研究
目的分析肺鳞癌(SCC)及其周围正常肺组织INK4a、ARF基因启动子甲基化改变情况.方法收集外科手术切除标本SCC标本17例,同时选取周围正常肺组织作为对照,运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对癌组织及其周围正常肺组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测.结果17例SCC组织,13例INK4a扩增阳性,2例ARF扩增阳性;对应的正常肺组织,1例INK4a扩增阳性,1例ARF扩增阳性.卡方检验,INK4a在肺癌组织和正常肺组织之间差异有显著性,ARF在肺癌组织和正常肺组织之间差异无显著性.结论INF4a基因启动子甲基化是SCC的一个普遍性事件,参与SCC的形成过程,可作为SCC的分子诊断标志之一,而ARF基因甲基化在SCC则是一个相对罕见性事件.
关键词： 肺鳞癌 INK4a/ARF基因 甲基化 甲基化特异性PCR
