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以CⅡTA-pⅠ作为树突状细胞特异启动子构建腺病毒双表达载体
目的构建CⅡTA-pⅠ启动子特异调控的鼠TGF-β1和PLP-Ig重组双表达载体,以期达到在树突状细胞中特异表达. 方法从鼠外周血单个核细胞克隆CⅡTA-pⅠ启动子,从ConA刺激的小鼠脾单个核细胞和WT-1杂交瘤细胞克隆TGF-β1基因和Ig重链Fc基因;体外经IRES序列连接后,通过穿梭载体与腺病毒载体骨架连接,鉴定后在HEK293包装.从小鼠骨髓造血细胞培养树突状细胞.流式细胞仪检测树突状细胞CD80、CD54和Ⅰ-Ad的表达,鉴定树突状细胞的成熟度和纯度.病毒转染后,采用ELISA方法鉴定该病毒在树突状细胞中TGF-β1基因的表达水平;Western blot鉴定PLP-Ig的表达. 结果该双表达重组腺病毒载体经测序、限制性内切酶分析、PCR等鉴定,与预期结果一致;病毒感染树突状细胞的培养上清液和细胞分别经ELISA和Western blot检测证实TGF-β1和PLP-Ig得到了独立表达,在HEK293细胞中则无表达,并随树突状细胞的成熟,表达量逐渐增高. 结论以CⅡTA-pⅠ作为树突状细胞特异启动子构建的重组腺病毒双表达载体,在树突状细胞中得到了特异、独立的表达,为靶向树突状细胞表达功能基因进行基因治疗奠定了基础.
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N-乙酰半胱氨酸对特发性肺间质纤维化患者PDGF、TGF-β和VCAM-1水平及肺纤维化程度的影响
目的：探讨N-乙酰半胱氨酸（ NAC）对特发性肺间质纤维化患者血小板源生长因子（ PDGF）、转化生长因子β（TGF-β）、血管细胞黏附分子（VCAM-1）水平及肺纤维化程度的影响。方法将90例特发性肺间质纤维化患者随机分为观察组（60例）和对照组（30例），对照组单用糖皮质激素口服治疗，观察组在对照组治疗基础上加用NAC，疗程6个月。观察两组患者治疗前后血浆Ⅲ型胶原（Ⅲ-C）、IV型胶原（ IV-C）、透明质酸（ HA）、PDGF、TNF-β及VCAM-1水平变化。结果治疗6个月后，观察组血浆III-C、IV-C、HA、PDGF、TGF--β及VCAM-1水平明显低于对照组（ P ﹤0.01），TGF-β与PDGF和VCAM-1均呈正相关（ r =0.674，P =0.027；r =0.745，P =0.027）。结论NAC联合激素治疗特发性肺间质纤维化可显著降低参与肺间质纤维化发病过程的PDGF、TGF-β及VCAM-1水平。
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溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织中LRG1、TGF-β和Smad2表达水平及临床意义
目的 研究溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜组织中富亮氨酸 α2糖蛋白1(LRG1)、转化生长因子 β(TGF-β)和Smad2表达水平及临床意义.方法 前瞻性采集2016年3月至2017年11月接受诊治的85例UC患者病变显著的肠黏膜组织为研究组,同时期单发息肉切除后行结肠镜复查正常的52例健康者正常肠黏膜组织为对照组.采用免疫组织化学染色法分别检测肠黏膜组织中LRG1、TGF-β和Smad2表达水平.分析UC患者黏膜组织中LRG1、TGF-β和Smad2表达与病情分期、内镜分级的关系.活动期不同病情程度黏膜组织中LRG1、TGF-β和Smad2表达水平.UC患者黏膜组织中TGF-β表达与LRG1、Smad2表达的相关性.结果 研究组肠黏膜组织中LRG1、TGF-β阳性表达率显著高于对照组(P<0.05),Smad2阳性表达率显著低于对照组(P<0.05);LRG1、TGF-β主要在正常黏膜组织细胞质中表达,在UC黏膜组织细胞质和细胞核中均有明显表达,Smad2主要在正常黏膜组织细胞质和细胞膜上表达,在UC黏膜组织细胞质中表达;活动期UC患者肠黏膜中LRG1、TGF-β 阳性表达率显著高于缓解期患者(P<0.05),Smad2阳性表达率显著低于缓解期患者(P<0.05);肠黏膜中LRG1、TGF-β阳性表达率随UC患者内镜分级增高呈上升趋势(P<0.05),Smad2阳性表达率随UC患者内镜分级增高呈下降趋势(P<0.05);活动期UC患者肠黏膜LRG1、TGF-β阳性表达率随病情加重呈上升趋势(P<0.05),Smad2阳性表达率随病情加重呈下降趋势(P<0.05);UC患者肠黏膜组织中TGF-β表达与LRG1呈正相关关系(r=0.632,P=0.000),与Smad2呈负相关关系(r=-0.650,P=0.000).结论 UC患者结肠黏膜组织中LRG1、TGF-β 表达量显著增加,Smad2表达量显著降低,与患者病情严重程度有关,可能在UC发病及病情发展过程中起重要作用.
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转化生长因子β对老年高血压肾病诊断价值的临床研究
目的：分析转化生长因子β（TGF -β）对老年高血压肾病诊断价值。方法收集2013年1月至2015年1月接受诊疗的老年55例高血压肾病患者的临床资料，并列为观察组。另纳入无肾功能损害的51例老年高血压患者作为对照组。分析两组患者外周血 TGF -β及相关因子水平的改变，及与肾功能的关系。结果观察组患者 C 反应蛋白（CRP）、TGF -β及尿微量白蛋白（mAlb）水平均显著高于对照组，差异均具有统计学意义（ P <0.05）。Pearson 相关性检验显示，观察组 TGF -β与 mAlb 及 CRP 均呈现显著正相关关系，差异具有统计学意义（ P <0.05）。ROC 曲线分析显示，以59.15μg/ L 为截点值，TGF -β诊断高血压肾病的敏感度为90.91%，特异度为90.20%，优于 CRP。结论老年高血压肾病患者外周血 TGF -β水平显著升高，且与肾功能受损程度呈正相关，具有一定辅助诊断价值。
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血清转化生长因子β1的表达在系统性红斑狼疮发病中的意义
目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血转化生长因子β1(TGFβ1)的表达水平,初步探索TGFβ1在SLE发病中的作用及意义.方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA) 检测52例SLE患者和20例健康人血清TGFβ1 水平,并结合临床资料进行分析.结果活动组SLE患者血清TGFβ1表达明显低于正常对照组(685.8±397.3 pg/ ml vs 1354.3±174.0 pg/ ml,P<0.01),亦低于稳定组患者(685.8±397.3pg/ml vs 1454.0±180.9 pg/ ml,P<0.01);而稳定组患者和正常对照组之间无差别(P>0.05);SLE患者血清TGFβ1表达量与其疾病活动度SLEDAI积分成负相关(r=-0.64,P=0.002),与血小板数量和血红蛋白量成正相关(r分别为0.67和0.45,P分别为0.001和0.047),与其它实验室指标如24h尿蛋白定量、抗ds-DNA量等无明显相关性.结论活动性SLE患者血清TGFβ1的表达减少,提示TGFβ1在SLE的发病中起一定作用,并对判断病情活动度可能有一定临床意义.
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骨骼肌纤维化的细胞与分子机制研究进展
骨骼肌是具有完全再生能力的组织，在急性创伤性损害后骨骼肌多能完成再生修复。当出现慢性退行性病变如进行性肌营养不良和反复肌纤维损伤时，骨骼肌修复过程常伴随着纤维化的发生。通过近十余年来对骨骼肌纤维化机制的研究，发现多种细胞和系列调控分子参与该过程，特别是肌卫星细胞来源的肌成纤维细胞等相关细胞和转化生长因子β(TGF-β)等促纤维化发展的生长因子。本文就骨骼肌纤维化的细胞分子机制及相关拮抗策略进行综述。
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转化生长因子β与增生性瘢痕
深Ⅱ°以上的烧伤创面,外伤后延期愈合的创面均可伴不同程度的瘢痕增生和挛缩.增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)是临床上常见的皮肤纤维增生性疾病,严重影响深度烧伤患者的功能康复.目前的治疗方法主要是外科手术、加压、浅层放射、激素、中草药等,但效果均不甚满意[1].
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短波紫外线照射对创伤局部转化生长因子β表达的影响
目的研究不同剂量短波紫外线(UVC)照射对伤口肉芽组织中转化生长因子β(TGF-β)表达的影响.方法 UVC 15 mJ/cm2,15s/d和60 mJ/cm2,60s/d分别照射大鼠背部伤口3d,采用免疫组化和原位杂交的方法观察伤口肉芽组织中TGF-β的表达.结果致伤后照射7天时,15 mJ/cm2 照射组TGF-β在mRNA水平与蛋白水平的表达均高于60 mJ/cm2 照射组和对照组(P＜0.05);照射21天时,60 mJ/cm2 照射组TGF-β mRNA表达高于15 mJ/cm2 照射组和对照组(P＜0.05).结论在伤口愈合早期15 mJ/cm2 UVC照射能促进TGF-β的表达,有利于组织修复;愈合晚期,60 mJ/cm2照射使TGF-β的表达有逐渐增高的趋势.
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关节腔注射臭氧对兔膝骨性关节炎滑膜组织的影响
目的:观察臭氧关节腔注射治疗后,兔膝骨性关节炎模型中滑膜的病理改变及其一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)和转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)的变化,进一步探讨臭氧治疗骨性关节炎的作用.方法:将24只成年新西兰兔随机分为正常组、模型组、假治疗组、臭氧治疗组.造模成功后,臭氧治疗组关节腔注射40 μg/ml臭氧(1 ml)治疗,每周一次,连续两周,假治疗组予以等量空气对照.比较四组膝关节滑膜厚度及病理改变、滑膜组织中NOS和TGF-β阳性细胞的表达水平.结果:1.各组与正常组比较滑膜厚度均显著增高(P＜0.01),假治疗组与模型组无差别,臭氧治疗组较模型组滑膜厚度降低(P＜0.05).2.正常组滑膜上皮细胞呈单层、扁平、立方状分布,未见细胞增生,滑膜组织结构正常；模型组滑膜组织正常结构破坏,细胞重度增生,排列混乱,大量炎性细胞侵润,血管增生充血；假治疗组滑膜炎症无明显改善；臭氧治疗组滑膜组织结构改善,炎症细胞减少.3.各组与正常组比较滑膜中NOS表达增高(P＜0.05),TGF-β表达降低(P＜0.05),假治疗组与模型组无差别,臭氧治疗组较模型组NOS表达降低(P＜0.05),TGF-β表达增高(P＜0.05).结论:关节腔注射40 μg/ml臭氧(1 ml)可以明显减轻滑膜炎症,抑制滑膜中NOS的表达,促进TGF-β的生成,可能是臭氧治疗骨性关节炎的机制之一.
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TGF-β与HPV及宫颈癌的关系研究
人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)可引起多种皮肤粘膜增生性疾病,该病毒编码的两种蛋白E6、E7对细胞永生化很重要.大量研究已确定了HPV的基因产物E6、E7癌蛋白的致癌性.全世界95%的宫颈癌标本中均发现HPV.HPV感染是宫颈癌发生的主要的危险因素.
关键词： 乳头状病毒 人 转化生长因子β 宫颈肿瘤/病毒学 宫颈上皮内瘤样病变/病毒学 -
肝细胞生长素在体外对大鼠肾小球系膜细胞生物活性的影响
目的观察低分子肝细胞生长素(HPN)对炎症因子刺激下的大鼠肾小球系膜细胞增殖及产生TGFβ的影响.方法用3H-TdR掺入法检测肾小球系膜细胞(GMC)增殖变化,用ELISA法检测肾小球系膜细胞培养上清中TGFβ的水平.结果在无IL-1β存在时,浓度为400u/孔的低分子肝细胞生长素对常规培养的系膜细胞增殖有明显抑制作用(P<0.01),而对TGFβ的产生无影响;但它对IL-1β刺激下的大鼠系膜细胞增殖和TGFβ产生均有明显抑制作用(均P<0.01).低分子肝细胞生长素在100u/孔浓度时无上述作用.结论高剂量HPN可抑制体外培养的大鼠系膜细胞增殖,降低IL-1β刺激系膜细胞产生TGFβ.低分子肝细胞生长素无种属特异性和组织特异性.
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TGF-β/Smads信号通路与胰腺纤维化
胰腺星状细胞（PSC）是胰腺纤维化发生发展的关键细胞，转化生长因子β（TGF-β）是促进PSC活化以及细胞外基质合成的主要因子。TGF-β/Smads信号转导通路在PSC活化、进而在胰腺纤维化形成中具有重要的作用，本文着重就TGF-β/Smads信号转导通路在胰腺纤维化中的分子机制做一综述。
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调节性T细胞与系统性硬化症的关系
系统性硬化症(SSc)是一种自身免疫性疾病,具有高亲和力的抗体,并与其他自身免疫性疾病可能存在重合,如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等.自身免疫性疾病是由于机体自身免疫耐受损坏所致.调节性T细胞(Treg细胞)在免疫耐受的维持和免疫应答的调节中起着至关重要的作用.近有些研究表明,SSc患者Treg细胞比例增加.然而,有一些研究报道,SSc患者Treg细胞均减少.这相反的结果导致我们很难理解Treg细胞在SSc发病中的作用.因此,本文将对Treg细胞与SSc之间的关系进行综述.
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寻常型银屑病患者外周血Th17/Treg细胞免疫失衡的研究
目的：探讨寻常型银屑病患者外周血Th17细胞与Treg细胞的数量以及相关细胞因子的表达水平，分析Th17/Treg细胞免疫失衡在银屑病发病机制中的作用及与疾病严重程度的相关性，进一步阐述银屑病的发病机制。方法选取92例寻常型银屑病患者作为试验组，同时选60例健康查体者作为正常对照组，采用流式细胞术检测患者及正常人外周血Th17细胞和Treg细胞比例，采用ELISA法检测患者及正常人血清中 IL-17、IL-23、TGF-β的含量，同时以皮损面积和严重程度（PASI）评分评价银屑病病情的严重程度。结果寻常型银屑病患者外周血Th17百分比、IL-17和IL-23水平均明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P值均＜0.01），Th17/Treg比值和IL-17/TGF-β比值也明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）；而银屑病患者外周血Treg百分比及血清中TGF-β水平显著低于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。进行期Th17/Treg比值高于稳定期，Treg百分比低于稳定期，差异有统计学意义（P＜0.01）。银屑病患者Th17细胞百分比、Th17/Treg比值、IL-17/TGF-β比值、 IL-17和IL-23水平与PASI评分呈显著正相关（P＜0.01），而Treg细胞百分比、TGF-β水平与PASI评分呈显著负相关（P＜0.01）。Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg比值、IL-17/TGF-β比值、IL-17、IL-23和TGF-β与病程均无相关性（P＞0.05）。结论 Th17/Treg细胞免疫失衡可能在寻常型银屑病的发病机制中发挥重要作用，可望通过调节患者外周血Th17/Treg细胞失衡及相关细胞因子而达到治疗银屑病的目的。
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CD90及TGF-β1在增生性瘢痕中的表达及意义
目的：探讨CD90及转化生长因子β1（TGF-β1）在增生性瘢痕中的表达及意义。方法（1）取手术切除的带有少量正常皮肤的瘢痕组织18例，将组织标本固定、石蜡包埋，组织切片HE染色证实临床诊断后，分为增生性瘢痕组（A组）、瘢痕交界处组（B组）及正常皮肤组（C组），每组各18例。（2）选取组织蜡块，根据HE染色、形态学观察确定典型病变部位，从每例标本中选取1个采样点，构建包括54点组织标本的芯片蜡块，阵列为9×6。（3）从芯片蜡块中切取2张切片，应用免疫组织化学方法对组织芯片进行染色，对2张组织芯片分别检测CD90、TGF-β1在增生性瘢痕、瘢痕交界处和正常皮肤组织中的表达水平，将所得结果进行统计学分析。结果（1）免疫组化结果显示CD90、TGF-β1在A组与B组中均有较高的阳性表达，两组相比无显著性差异（P＞0.05），而在C组中仅有少量的阳性表达，与A、B两组相比均有显著性差异（P＜0.05）。（2）统计学分析发现增生性瘢痕成纤维细胞CD90和TGF-β1的表达具有相关性。结论（1）在增生性瘢痕中，CD90阳性表达的成纤维细胞可能是瘢痕异常增生的特异表型。（2）增生性瘢痕中成纤维细胞 CD90和TGF-β1的表达具有相关性，其在瘢痕异常增生过程中可能存在一定的协同关系。
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转化生长因子βⅠ型受体多态性在结肠癌细胞侵袭迁移中的作用
目的 探讨转化生长因子βⅠ型受体多态性--TGF-βRⅠ*6A在结肠癌SW48和DLD-1细胞侵袭转移中的作用.方法 将TGF-βRⅠ*6A基因转染SW48和DLD-1细胞,MTT法检测TGF-βRⅠ*6A对结肠癌细胞增殖能力的影响;MatrigelTM侵袭试剂盒检测转染TGF-βRⅠ*6A后细胞侵袭迁移能力的变化.Western blot检测TGF-βRⅠ*6A在TGF-β1作用下,SW48细胞中ERK、磷酸化ERK、p38、磷酸化p38、Smad2和磷酸化Smad2基因的变化.结果 转染TGF-βRⅠ*6A的SW48细胞和DLD-1细胞,在TGF-β1(5 ng/ml)的作用下,其体外增殖、侵袭、迁移能力均增强.此外SW48细胞中磷酸化ERK、磷酸化p38表达增强,Smad2和磷酸化Smad表达无明显变化.结论 TGF-βRⅠ*6A在TGF-β1的作用下,能够增强SW48和DLD-1细胞的体外增殖、侵袭、迁移能力,可能与非Smad信号通路交联增强ERK、p38等基因的表达,从而促进结肠癌细胞侵袭迁移的作用有关.
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抗CD3单克隆抗体对人CD4+CD25+T淋巴细胞凋亡和自噬的影响
目的 观察抗CD3单克隆抗体对分离培养的人外周血CD4+CD25+T淋巴细胞自噬、凋亡及其分泌的代表性因子转化生长因子β(TGF-β)的影响.方法 采用密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离32例健康者外周血T淋巴细胞,磁性细胞分离器(MACS)分离得到CD4+CD25+T淋巴细胞,分别利用电镜及流式细胞仪观察、检测各组(抗CD3单克隆抗体1 mg/L组、IgG1同型抗体对照组)干预72 h后细胞的凋亡率、自噬率,用ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子TGF-β的水平.结果 抗CD3单克隆抗体组CD4+CD25+T淋巴细胞自噬率、凋亡率及TGF-β水平均增加(均P<0.01),凋亡率和自噬率之间无相关性(P>0.05).结论 抗CD3单克隆抗体可促进CD4+CD25+T淋巴细胞凋亡和自噬及TGF-β分泌,且自噬与凋亡间相互独立.
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蛋白酶体抑制剂MG132对早期糖尿病肾病大鼠Smad7表达的影响
目的 观察蛋白酶体抑制剂MG132对早期糖尿病肾病大鼠的治疗作用及其对肾脏中Smad7蛋白表达的影响.方法 将45只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=10);糖尿病模型组35只,用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型后30只纳入实验,分为糖尿病组(DC组,n=10),MG132高浓度组(MH组,n=10),MG132低浓度组(ML组,n=10).MH组与ML组给予MG132腹腔注射,NC组和DC组予以等量生理盐水腹腔注射,各组喂养至6周和8周时分别处死5只大鼠.处死前测量大鼠体重,心脏取血测空腹血糖.电镜观察肾脏超微结构变化,Western blot检测各组Smad7蛋白表达水平.结果 (1)各模型组较NC组体重明显减轻,空腹血糖显著升高(P<0.01);各模型组大鼠体重8周后较6周后减轻(P<0.05).MH组、ML组较DC组体重增加(P<0.05);但各模型组间空腹血糖无统计学差异(P>0.05).(2)电镜下各模型组均可见部分基底膜不规则增厚、足突间隙增宽或融合、内皮细胞水肿.以上改变MH组、ML组较DC组轻,MH组较ML组轻;各模型组8周病理改变与6周相比无明显减轻.(3)与NC组比较,DC组Smad7蛋白表达降低(P<0.01);与DC组比较,MH、ML组Smad7表达增加(P<0.05).MH组较ML组Smad7蛋白表达显著增加(P<0.05);随时间延长,8周与6周间差异愈加显著(P<0.05).结论 糖尿病肾病时Smad7泛素化降解增加;蛋白酶体抑制剂MG132可抑制Smad7的泛素化降解,增加Smad7蛋白表达.
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V5与兔放射性肺损伤发生相关性的实验研究
目的：建立放射性肺损伤兔动物模型，通过限定不同V5值，测定肺组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、转化生长因子β1（TGF-β1）的表达情况，考察其与放射性肺损伤发生的相关性。方法健康新西兰种大白兔30只，实验组25只，共5组，每组5只，分别设定V540%、50%、60%、70%、80%，对照组5只，假性照射，每只均进行CT模拟、靶区勾画、计划制作并进行照射，6 MV能量射线，3野调强适形放疗（IMRT），等中心照射，全肺剂量30 Gy/3F。观察至8周后解剖，分别进行HE染色、TGF-β1、TNF-α的检测。结果病理染色提示自V550%开始出现放射性肺炎病理学改变。所有实验组TGF-β1、TNF-α较对照组表达增强，且与V5正相关。TGF-β1表达情况：V540%组与70%、80%组有统计学差异（P＜0.05），但与50%、60%及对照组无统计学差异；除V540%外，所有实验组均与对照组有统计学差异（P＜0.05）。TNF-α表达情况：V580%与70%和对照组有统计学差异，其余各组两两间均无统计学差异。结论当V5控制在40%时可减少放射性肺损伤的发生，预测放射性肺损伤发生的V5“门槛值”在50%附近。
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兔颈动静脉瘘模型的影像学和病理学变化
目的：建立兔颈动静脉瘘模型，观察其影像学和病理学变化，探讨其作为介入治疗模型的可行性。方法30只新西兰大白兔随机分为三组：（1）对照组10只，解剖分离但不吻合兔左侧颈总动脉和颈外静脉；（2）实验Ⅰ组（2周）与实验Ⅱ组（4周）各10只，用显微技术吻合兔左侧颈总动脉和颈外静脉；对照组于术后4周，两实验组分别于术后2周及4周行数字减影血管造影（DSA）观察后，取颈外静脉做血管内皮生长因子（VEGF）及转化生长因子-β（TGF-β）的免疫组化染色及HE染色。结果与对照组相比，实验组造影显示颈外静脉扩张、增粗，产生盗血现象；与对照组相比，免疫组化染色显示实验组TGF-β阳性表达显著增多（P＜0.01），VEGF阳性表达轻度增多（P＞0.05）；与对照组相比，HE染色可见实验组颈外静脉内膜显著增厚（P＜0.01）。结论显微吻合兔颈总动脉-颈外静脉建立动静脉瘘模型，其影像学和病理学变化符合模拟硬脑膜动静脉瘘介入治疗模型的要求，可用于介入实验研究。
