首页 > 文献资料
-
γ射线照射对IER5基因mRNA表达的影响
目的 应用实时PCR技术分析60Co γ射线照射正常人淋巴母细胞(AHH1)、宫颈癌细胞(HeLa)与接种人肿瘤细胞的裸鼠后IER5基因表达的影响.方法 对于离体培养的AHH1、HeLa与BALB/c-nu裸鼠,按照不同剂量(0.5、2、4、6、10、15 Gy)与照射后不同时间点(2、4、8、12、24 h)进行分组进行提取mRNA、反转录与IER5基因表达量测试.结果 在相同条件下AHH1对照射比HeLa更灵敏,其表达量的峰值对应的剂量比HeLa的要低.对于AHH1细胞,对2 Gy低剂量的照射反应比10 Gy的高剂量反应要快,而HeLa细胞,对于2 Gy的低剂量与10 Gy的高剂量的照射反应没有太大差异,在照射后2 h都出现基因表达的大值.此外,人肝肿瘤的IER5基因对照射比较敏感,而人肺与脑肿瘤的IER5基因不敏感.结论 IER5基因有可能成为宫颈癌与肝肿瘤新的辐射损伤生物分子的一个标记物,对肝肿瘤放疗具有潜在的应用价值.
-
宫颈癌细胞辐射敏感性与IER5基因的关系
[目的]通过RNA干扰技术致基因沉默和基因过表达的方法研究IER5基因与宫颈癌SiHa细胞系辐射敏感性的相关性,探讨IER5基因不同表达的细胞系对辐射敏感性的差异.[方法]构建IER5沉默及过表达的真核表达载体,转染细胞并筛选出稳定表达的细胞系,经Western Blot和Real-time PCR鉴定成功.观察IER5基因不同表达的3种细胞系的形态;对细胞系进行4Gy的辐射后使用CCK-8检测细胞生长曲线;对细胞系进行10Gy的辐射后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;对细胞系进行4Gy的辐射后使用流式细胞仪检测不同时间点细胞周期的情况.[结果] IER5基因沉默使SiHa细胞略有增大,照射后的细胞增殖速度加快;而其过表达可使SiHa细胞缩小呈圆形,并且细胞增殖速度有所减慢.IER5沉默导致辐射诱导的SiHa细胞凋亡率降低,过表达可促进辐射诱导的SiHa细胞凋亡,其凋亡在照射后48h为显著.照射后细胞周期的G2-M期阻滞效应随IER5表达含量的降低而升高,IER5基因沉默促进细胞的增殖分裂.[结论]IER5基因与宫颈癌SiHa细胞的增殖、凋亡和细胞周期的变化及对辐射的反应有明显相关性,IER5基因可能可提高宫颈癌细胞对放射的敏感性.
-
辐射介导下HeLa细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系
目的:探索辐射介导下HeLa细胞中Cdc25B与IER5蛋白表达的关系.方法:用4Gyγ射线分别照射正常HeLa细胞和IER5-siRNA-HeLa细胞,收集照射后0、0.5、2、4、8、12、16、24、36 h的细胞样本,并设未照射细胞为对照组.采用qPCR法检测照射后Cdc25B mRNA的表达;Western blot检测细胞内IER5和Cdc25B蛋白的表达;流式细胞术检测照射后G2期细胞周期阻滞情况.结果:qPCR结果显示,照射后0.5～24 h内,与对照组相比,正常HeLa细胞内Cdc25B mRNA在0.5 h先下降2h再上升之后再下降,差异均有统计学意义(P均＜0.05);在IER5-siRNA-HeLa细胞内Cdc25B mRNA在0.5 h先下降后再上升,差异均有统计学意义(P均＜0.05,2h组除外).Western blot结果显示,照射后0.5～24 h内,与对照组相比,正常HeLa细胞内Cdc25B蛋白从2h开始上升8h开始下降,差异有统计学意义(P均＜0.01);IER5-siRNA-HeLa细胞内Cdc25B蛋白从0.5 h开始下降8h开始逐渐上升,差异有统计学意义(P均＜0.01,24 h除外).照射后0～36 h内,与对照组相比,正常HeLa细胞与IER5-siRNA-HeLa细胞的IER5蛋白表达水平分别在照后8h与0h后开始出现明显上升,差异均具有统计学意义(P均＜0.05);而Cdc25B蛋白表达水分别在照射后8h与0h后开始出现下降,差异均具有统计学意义(P均＜0.05),正常HeLa细胞与IER5-siRNA-HeLa细胞中Cdc25B蛋白与IER5蛋白的表达分别从8h与0h后开始呈现负相关关系(r分别为-0.740和-0.669,P均＜0.01),当两种细胞中Cdc25B蛋白表达量下降时,G2期细胞周期阻滞比例升高(P＜0.05).结论:辐射介导下HeLa细胞中Cdc25B蛋白表达变化是由Cdc25B mRNA变化引起的,并且Cdc25B与IER5蛋白表达呈负相关关系.
