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气相色谱法测定脂肪酶的活力
本文发展了一种以气相色谱检测脂肪酶活力的方法.以三丁酸甘油酯为底物,通过气相色谱对产物正丁酸进行定性定量分析.正丁酸在0.11～11.35 mmol·L-1内线性关系良好,回归方程为:y=45 464x-3 115.2,r=0.996 8.反应时间仅需5 min,适pH值和温度分别为7.5和32℃.低、中、高3个浓度正丁酸的回收率分别为90.3%,104.6%和89.4%;RSD分别为3.01%,4.50%和6.64%.通过实验测定出Km=0.25 mmol·mL-1,奥利司他的半数抑制浓度(IC50)为0.048 5 mg·mL-1.本方法具有反应体积小、操作简单、快速、灵敏等特点.
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三丁酸甘油酯对白血病细胞株HL-60体外作用的研究
目的 探讨三丁酸甘油酯(TB)对白血病细胞株HL-60细胞增殖的抑制作用,并对其作用机制进行初步探讨.方法 采用MTT法观察细胞增殖变化.应用免疫组化检测抑癌基因P16的表达.应用流式细胞仪观察细胞周期的改变.通过DNA电泳观察细胞凋亡.结果 TB可以抑制细胞增殖.1.0 mmol/L的TB作用72 h,有典型的DNA梯形条带.细胞周期阻滞在G0/G1期.结论 TB能抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调P16表达有关.
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三丁酸甘油酯对白血病细胞株和人实体瘤细胞株体外作用的比较
目的探讨三丁酸甘油酯(tributyrin,TB)对人急性髓系白血病HL-60细胞及胃癌细胞(SGC-7901)的增殖、细胞周期的调控及细胞凋亡的影响,并比较TB对HL-60细胞及SGC-7901的作用效果.方法用MTT法测定TB在不同浓度、不同时间的细胞增殖变化;应用免疫组化检测抑癌基因p16的表达;应用流式细胞仪观察细胞周期;通过DNA电泳观察细胞凋亡情况.结果TB可以抑制HL-60细胞及SGC-7901细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈依赖关系;1.0 mmol/L的TB对HL-60细胞作用72 h,有典型的DNA梯形条带.流式细胞仪分析证实TB使细胞周期阻滞在G0/G1期.结论TB对HL-60细胞的抑制作用更明显,其作用机制可能与上调Bmi-1基因上的p16INK4蛋白表达有关.
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三丁酸甘油酯对白血病细胞株和实体瘤细胞株的增殖抑制作用的研究
目的 探讨三丁酸甘油酯(TB)对人急性粒系白血病细胞株(HL-60)、红白血病细胞株(K562)以及人实体瘤细胞株胃癌细胞(SGC-7901)、鼻咽癌细胞(CNE)的增殖抑制作用.方法 利用台盼蓝拒染法、MTT比色法,观察TB对细胞增殖的影响,利用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期.采用免疫组化法检测抑癌基因P16的表达.结果 TB作用72 h后,HL-60、SGC-7901细胞阻滞在G0/G1期,K562细胞阻滞在G2/M期,并伴有分布于S期细胞明显下降.HL-60细胞、SGC-7901细胞的p16蛋白表达均有上调.结论 TB能抑制HL-60细胞株、K562细胞株、SGC-7901细胞株的细胞增殖,使HL-60、SGC-7901细胞株的p16蛋白表达上调,改变细胞周期而实现细胞增殖抑制.
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三丁酸甘油酯对K562 白血病细胞的体外作用
目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin, TB)对K562 白血病细胞增殖、凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制.方法用细胞计数及台盼兰拒染法观察TB对K562细胞增殖及活力的影响,通过细胞形态观察、流式细胞术分析观察TB对K562细胞体外诱导凋亡的情况,RT-PCR技术分析p21WAF1表达的改变.结果 (1)TB抑制K562细胞的增殖.(2)TB诱导K562白血病细胞的凋亡,影响细胞周期的进程,使细胞周期阻滞于G2/M期.(3)在TB引起的K562细胞增殖抑制及凋亡过程中,p21WAF1表达增加.结论 TB抑制K562白血病细胞的增殖并诱导凋亡,阻滞细胞周期进程于G2/M期,p21WAF1在此过程中发挥作用.
