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褐藻素通过内质网途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究
目的 探讨褐藻素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其分子机制.方法 以四甲基偶氮唑蓝法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期及细胞内游离钙的变化,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-4、caspase-7、caspase-9、Bcl-2、Bax、细胞色素C的表达.结果 褐藻素剂量依赖性的抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、升高细胞内游离钙含量,阻滞细胞周期于Go/G1期并诱导其凋亡;上调Bax并下调Bcl-2;诱导caspase-4、caspase-7、caspase-9、钙蛋白酶的活化及细胞色素C的释放.结论 褐藻素通过Ca2+/钙蛋白酶/caspase-4途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡.
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褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响
目的:探讨褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响.方法:将HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养HSC-T6细胞.采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对HSC-T6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达.结果:与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内(15 ～ 75 μmol/L)内能显著抑制HSC-T6细胞的活力(P＜0.01),呈剂量和时间依赖性.流式细胞术结果显示,24 h后高浓度(60 μmol/L)组对HSC-T6细胞周期影响的效果显著(P＜0.01),G1期比例显著下降(P＜0.01),G2期和S期的比例显著升高(P＜0.01),48 h后低浓度(15 μmol/L)和中浓度(30 μmol/L)组对HSC-T6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性(P＜0.05);低、中、高浓度组早期凋亡率和总凋亡率都显著升高,呈剂量依赖性(P＜0.05).蛋白印迹法实验结果表明,低、中、高浓度组Bax的蛋白表达显著上调,中、高浓度组Bcl-2的蛋白表达显著下调(P＜0.05).结论:褐藻素可以通过使细胞周期阻滞于S期和G2期而抑制HSC-T6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而诱导HSC-T6细胞凋亡.
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褐藻素诱导人宫颈癌HeLa细胞的自噬作用机制研究
目的：研究褐藻素诱导人宫颈癌HeLa细胞的自噬作用机制。方法：1、10、20、40、80μmol/L褐藻素培养HeLa细胞48 h后，MTT法测定细胞活力并计算抑制率。0（空白对照）、10、20、40μmol/L褐藻素培养HeLa细胞48 h后，流式细胞仪测定细胞周期与凋亡率；通过吖啶橙染色与Lyso-Tracker Red染色、HeLa-GFP-LC3细胞测试法在荧光显微镜下观察细胞自噬状态；Western blot法检测细胞自噬流量与相关蛋白的表达。结果：10、20、40、80μmol/L褐藻素培养细胞48 h后对细胞生长有明显抑制作用。10、20、40μmol/L褐藻素培养细胞48 h后可将细胞阻滞于G0/G1期，但对细胞凋亡无明显影响；40μmol/L褐藻素培养细胞48 h后细胞自噬程度加重；与空白对照比较，40μmol/L褐藻素可促进LC3Ⅰ转化为LC3Ⅱ以及Beclin-1、PTEN、p21的表达，但抑制p-Akt、p-p70S6K、p-mTOR、Cyclin D1、CDKZ表达。自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA，5 mmol/L）预处理可逆转褐藻素诱导的HeLa细胞自噬作用；U0126可部分逆转褐藻素诱导的HeLa细胞自噬作用。结论：褐藻素可通过抑制Akt信号通路以及激活MEK/ERK信号通路诱导HeLa细胞自噬。
关键词： 褐藻素 细胞周期 自噬 蛋白激酶B MEK/ERK信号通路 人宫颈癌HeLa细胞
