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克白合剂质量标准提升研究
目的 完善并提升克白合剂的质量标准.方法 以黄芪甲苷作为指标成分建立薄层色谱鉴别法.采用HPLC建立补骨脂素、异补骨脂素的含量测定方法,对10批克白合剂进行定性定量检测,拟定克白合剂质量标准草案.结果 薄层色谱斑点清晰,分离度好;补骨脂素在1.41～45.20 μg·mL-1(r=1.0000)、异补骨脂素在1.30～41.40 μg·mL-1(r=1.0000)内与峰面积呈良好的线性关系.补骨脂素和异补骨脂素的平均回收率分别为98.1％,98.3％,RSD分别为0.6％,0.6％(n=6).结论 从克白合剂10批样品数据综合分析,建议克白合剂每1 mL含补骨脂和异补骨脂素的总量≥38.0 μg,质量标准体系的提升为临床用药提供了更可靠的质量保证.
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中药补骨脂薄层分离条件的选择
目的:以少量的实验选择、分离补骨脂展开剂的种类以及比例搭配.方法:依据介电常数ε及文献常用的展开剂,采用U5(53)表以均匀设计布点.结果:以较快的速度获得补骨脂有效成分的分离条件.结论:该方法是有效、可行的,它省时、省材、快速.
关键词： 补骨脂素类/分离和提纯 补骨脂素 异补骨脂素 均匀设计 薄层 -
HPLC法测定骨康片中补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的 建立HPLE法测定骨康片中补骨脂素和异补骨脂素的含量.方法 采用高效液相法.色谱条件:流动相为甲醇-乙腈-0.03%磷酸溶液(15:25:60),检测波长为245 nm.结果 补骨脂素进样浓度在2.212～19.90μg·mL-1,异补骨脂素进样浓度在2.458～22.122μg·mL-1范围内,线性关系良好.结论 本法简便、准确,重现性好,可用于骨康片的含量测定.
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生发酊制备工艺研究
目的 考察生发酊的制备工艺并验证.方法 以补骨脂素、异补骨脂素总量为指标,对生发酊提取工艺中浸渍溶剂用量进行考察,并进行制剂工艺验证.结果 结合生产实际生发酊的佳制备工艺是加6倍量75％乙醇浸渍七日.结论 优选的制备工艺可行.
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异补骨脂素防护人晶状体上皮细胞的凋亡
目的:探讨异补骨脂素(ISR)对氧化损伤的人晶状体上皮细胞(HLEC-B3)凋亡有无抑制作用.方法:本研究在终浓度300μmol/L H_2O_2培养液中复制HLEC-B3凋亡模型,并以雌二醇(E_2)作为阳性对照,在透射电子显微镜下观察HLEC-B_3超微结构的改变,采用FCM法检测HLEC-B_3凋亡率及线粒体膜电位的变化.结果:超微结构研究显示,H_2O_2组绝大多数HLEC-B_3发生凋亡,并呈凋亡各期改变的全过程;E_2、ISR组仅少数HLEC-B_3发生凋亡,并多为早期或中期的轻微改变.FCM结果显示:H_2O_2组HLEC凋亡率显著高于空白对照组;E_2和ISR组凋亡率均低于H_2O_2组(P<0.01).H_2O_2,组线粒体跨膜电位比对照组显著下降;E_2组和ISR组的线粒体跨膜电位均比H_2O_2组升高(P<0.01).结论:ISR可减轻实验性氧化损伤的HLEC-B2凋亡程度,为寻求防治老年性白内障的药物提供实验依据.
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异补骨脂素不同时间给药对大鼠肝脏功能和转运体的影响
目的 探讨补骨脂活性成分异补骨脂素不同时间灌胃给药对大鼠肝脏功能和胆汁酸转运体的影响.方法 SD大鼠随机分为对照组、异补骨脂素60 mg·kg-1灌胃给药1 d组、3 d组以及7 d组.实验结束后,检测大鼠的体质量和肝重;试剂盒检测大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBA、TC、TG、TBIL的含量;real-time PCR法检测大鼠肝脏组织中胆汁酸转运体BSEP、NTCP、MRP2、MRP4、MDR1、ABCG5、ABCG8、OSTα 的水平.结果 与对照组相比,异补骨脂素能明显增加肝脏的重量,不同给药时间均能引起肝脏系数的增加;异补骨脂素给药后,大鼠血清中ALT、AST、TBA、TG、TBIL的含量明显增加,ALP没有明显变化,TC明显降低,且AST的水平在异补骨脂素灌胃给药1 d之后即有明显升高;异补骨脂素灌胃给药后,肝脏中BSEP、NTCP、MRP2、MDR1、AB-CG5、ABCG8、OSTαmRNA的水平明显下降,MRP4 mRNA的水平没有明显变化.结论 异补骨脂素灌胃给药1～3 d即造成肝脏的损伤作用,其作用机制可能与干扰胆汁酸转运体有关.
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异补骨脂素抑制MRP2、MRP3所致的HepG2细胞内胆汁酸蓄积和毒性
目的：观察异补骨脂素体外对HepG2细胞毒性和细胞内胆汁酸浓度的影响,并考察其对胆汁酸合成转运的影响。方法不同浓度异补骨脂素在HepG2细胞作用24 h, MTT法检测细胞存活,并检查细胞内胆汁酸浓度。常规TRIzol法提取RNA,real time PCR检测细胞中转运体BSEP、MRP2、 MRP3、 OATP2、 NTCP、 OSTα,合成酶 CYP7A1、CYP27A1和受体 FXR、PXR 的 mRNA 转录水平。结果HepG2细胞存活率随着异补骨脂素浓度升高而剂量依赖性的降低,异补骨脂素作用24 h的IC50为118.1μmol·L-1。100、400μmol·L-1异补骨脂素可使细胞内胆汁酸浓度明显升高。异补骨脂素在25μmol·L-1时就可使MRP2、MRP3、CYP7A1明显降低,当浓度增大到100μmol · L-1时, OATP2、OSTα、CYP27A1、FXR、PXR 也明显升高,但 BSEP、NTCP差异无显著性。结论异补骨脂素可引起HepG2细胞内胆汁酸升高和细胞毒性,其机制可能与抑制 MRP2、MRP3有关。
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补骨脂素与异补骨脂素对乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟影响的比较研究
目的 比较研究中药补骨脂中两种重要组分--补骨脂素与异补骨脂素对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)分化成熟的影响.方法 取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法培养ROB,每3天换液1次,铺满80%皿底后传代培养.以1×10-5mol·L-1的补骨脂素和异补骨脂素对ROB的分化成熟进行药物干预,比较补骨脂素组、异补骨脂素组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR检测IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的基因表达情况.Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量.结果 补骨脂素和异补骨脂素均可促进ROB的分化成熟,具体表现在明显提高ROB的ALP活性,促进钙盐的沉积以及骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的mRNA水平,增强Ⅰ型胶原的蛋白表达,但异补骨脂素的活性明显高于补骨脂素.结论 异补骨脂素促进ROB分化成熟的活性明显高于补骨脂素,提示异补骨脂素是中药补骨脂发挥抗骨质疏松活性的主要有效成分,具有开发为抗骨质疏松新药的潜力.
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异补骨脂素的植物雌激素作用及其机制的探讨
目的 利用雌激素受体(estrogenic receptor,ER)阳性乳腺癌T47D细胞和ER阴性乳腺癌MDA-MB231细胞观察异补骨脂素(isopsoralen)的雌激素样作用,并探讨其可能的作用靶点和机制.方法 以ER拮抗剂ICI182,780为工具药,采用MTT细胞增殖实验观察异补骨脂素对T47D和MDA-MB231细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测细胞周期分布的变化.同时,利用实时荧光定量PCR法及流式细胞术检测异补骨脂素对T47D细胞pS2 mRNA及蛋白表达情况的影响.结果 1×10-6 mol·L-1和1×10-7 mol·L-1异补骨脂素能够促进T47D细胞增殖,提高细胞分裂增殖指数,且该作用可被ICI182,780所拮抗;1×10-6 mol·L-1和1×10-7 mol·L-1异补骨脂素对MDA-MB231细胞增殖无影响.PCR及流式蛋白检测结果显示:1×10-6 mol·L-1和1×10-7 mol·L-1异补骨脂素可使pS2 mRNA和蛋白表达增加,同时加入ICI182,780可部分拮抗异补骨脂素对pS2表达的诱导和促进作用.结论 异补骨脂素具有植物雌激素作用,该效应可通过作用于靶细胞雌激素受体途径实现.
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HPLC法测定孕康糖浆中补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的 建立HPLC法测定孕康糖浆中补骨脂素和异补骨脂素含量的方法.方法 采用高效液相色谱法测定.色谱柱:Agilent C18柱,流动相:甲醇-水(40:60),流速:1.0 ml·min-1,检测波长:246 nm.结果 补骨脂素在0.0334～0.334 μg(r=0.9999),异补骨脂素在0.047 5～0.475 μg(r=0.999 9)之间线性关系良好;补骨脂素的平均回收率为98.31%,RSD=1.49%;异补骨脂素的平均回收率97.30%,RSD=1.18%.结论 试验表明,该方法操作简单,分离效果好,灵敏度高,可以用于孕康糖浆的质量控制.
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HPLC法测定丹芪和血片中补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的 建立HPLC法测定丹芪和血片中补骨脂素和异补骨脂素的含量.方法 采用Sim-Pack C18柱,甲醇-水(45: 55)为流动相,柱温25℃,流速1 ml·min-1,检测波长为247 nm.结果 补骨脂素和异补骨脂素分别在5.65～56.5 mg ·L-1,4.52～45.2 mg ·L-1范围内线形关系良好,相关系数分别为r补骨脂素=0.999 8,r异补骨脂素=0.999 6.两组份的回收率分别为补骨脂素99.42%, RSD=1.64%;异补骨脂素98.68%,RSD=2.31%.结论 本法可同时测定补骨脂素和异补骨脂素,方法简便、准确、可作为制剂的定量分析方法.
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HPLC法测定补肾宝颗粒中补脂素和异补脂素的含量
目的利用HPLC测定补肾宝颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量.方法色谱条件:色谱柱:C18柱;流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(40∶ 60),检测波长:245 nm.结果测得补骨脂素在0.2100～1.0500 μg (r=0.999 6)、异补骨脂素在0.2084～1.0420 μg (r=0.999 7)范围内呈线性.平均回收率分别为96.72% (RSD=1.79%)和96.91%(RSD=1.34%).结论该法操作简便,结果准确无干扰,可作为补肾宝颗粒的质控方法.
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高效液相色谱法测定复方补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的测定复方补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量.方法采用YWGC18色谱柱(4.6 mm×200 mm),流动相为54%甲醇(含1%冰醋酸溶液),流速为0.7 ml/min,检测波长为295 nm.结果补骨脂素和异补骨脂素保留时间分别为9.165 min和10.082 min,标准曲线的线性范围均为20～200 mg/l(补骨脂素r＝0.9999;异补骨脂素r＝0.9993).补骨脂素和异补骨脂素中的高、中、低、三种浓度溶液的日间和日内变异均小于10.0%,加样回收＞90%.测定复方补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量分别为2.058、2.270、2.201 mg/ml和1.665、1.617、1.609 mg/ml.结论本法简便、快速重现性好,可用于复方补骨脂酊制剂质量控制的含量测定方法.
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异补骨脂素对氧化损伤的HLEC线粒体超微结构的影响
目的 观察异补骨脂素对氧化损伤的HLEC线粒体超微结构的影响. 方法 实验分正常对照组、H2O2组、E2组、ISR组,密度梯度离心法分离出HLEC线粒体,透射电镜观察HLEC线粒体超微结构. 结果 正常对照组线粒体双层膜结构完整,嵴结构完整,线粒体几乎未受损伤;H2O2组线粒体双层膜结构不完整,嵴结构断裂消失,线粒体受损伤;E2组、ISR组线粒体双层膜结构稍完整,嵴结构断裂,线粒体受损伤,但较H2O2组情况好. 结论 异补骨脂素对H2O2诱导氧化损伤的HLEC线粒体超微结构有保护作用.
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HPLC法测定肠胃宁片中补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的 建立肠胃宁片中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Phenomenex ODS柱(4.6×250mm,5μm)分析柱,流动相为甲醇-水(45:55),检测波长为246nm,流速为1.0mL·min-1.柱温为30℃.结果 本法精密度高,稳定性好,补骨脂素进样量在0.109～0.544μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.18%,RSD=1.96%(n=9);异补骨脂素进样量在0.102～0.512μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999).平均加样回收率为98.86%,RSD=1.56%(n=9).结论 本方法简便,准确,重现性好,可作为该制剂的含量测定方法.
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HPLC法测定克癃胶囊中补骨脂素、异补骨脂素的含量
目的用HPLC法测定克癃胶囊中补骨脂素、异补骨脂素的含量.方法色谱条件:色谱柱:C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-水(60∶40),检测波长245nm.结果补骨脂素在0.0964～0.482μg,异补骨脂素在0.0868～0.434μg范围内呈良好线性关系.平均回收率分别为100.7%;98.9%,RSD分别为1.39%;2.11%.结论该方法准确可靠.
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高效液相色谱法测定复方补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量
目的测定复方补骨脂酊中补骨脂素和异补骨脂素的含量.方法高效液相色谱法.结果对样品未经分离,直接测定,补骨脂素和异补骨脂素的平均含量分别为1.451mg*ml-1和1.151 mg*ml-1,方法平均回收率分别为100.92%(RSD＝1.81%)和99.31%(RSD＝2.19%) .结论高效液相色谱法可作为该药控制指标之一.
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SFE-CGC法测定四神丸中主要成分的含量
目的建立超临界流体萃取(SFE)技术和毛细管气相色谱(CGC)非在线联用技术测定中成药四神丸中的主要成分.本文以SFE法样品前处理,采用含5%苯基硅氧烷交联毛细管柱,蒽作为内标进行定量试验.结果四神丸中的补骨脂素和异补骨脂素的含量分别为:补骨脂素0.89 mg/g,异补骨脂素1.03 mg/g,说明SFE-CGC法是四神丸质量控制的快速可靠、准确灵敏的方法.
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HPLC法测定复方补骨脂酊中3种成分的含量
目的 建立HPLC法测定复方补骨脂酊中补骨脂素、异补骨脂素和欧前胡素的含量.方法 色谱柱为Thermo Syncronis C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇,乙腈-0.7％磷酸梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长为300nm,柱温35℃.结果 补骨脂素、异补骨脂素和欧前胡素分别在4.0157 ～200.7846μg(r=1.0000)、4.0280～201.4000μg(r=1.0000)、0.7936～39.6806μg(r=1.0000)范围内线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为106.17％ (RSD =0.8％)、101.56％ (RSD=1.3％)、102.64％ (RSD=1.1％).结论 该法简单准确、重复性好,为复方补骨脂酊的质量控制提供了一种准确可靠的检测方法.
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RP-HPLC法测定男宝胶囊中补骨脂素和异补骨脂素含量
目的 建立一种可测定男宝胶囊中补骨脂素和异补骨脂素的RP-HPLC方法.方法 采用Shim-pack VP-ODS(250mm×4.6mm 5μm)为色谱柱；流动相为甲醇-水(45:55)；检测波长为246nm;流速为1.0mL·min-1；柱温为40℃；峰面积外标法定量；结果 本法补骨脂素在9.10×10-4μg～0.2742μg范围内呈良好的线性关系,(r=0.999 99),平均回收率为99.0％,RSD 1.57％；异补骨脂素在9.90×10-4μg～0.2970μg范围内呈良好的线性关系,(r=0.999 99),平均回收率为100.7％,RSD 1.76％.结论 本方法简便、快速、准确可靠,可作为该制剂的质控方法.
