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牙周炎患者正畸治疗过程中龈沟液及血清中多项白介素、PGE2、sICAM-1及PAK5水平的变化研究
目的:探讨牙周炎患者正畸治疗过程中龈沟液及血清中多项白介素、PGE2、sICAM-1及PAK5水平的变化情况.方法:选取2009年1月～2011年10月于本院进行正畸治疗的37例牙周炎患者为观察组,同期进行正畸治疗的37例健康人为对照组,将其治疗前及治疗后3、7、14d的龈沟液及血清IL-1β、IL-5、IL-8、PGE2、sICAM-1及PAK5水平进行检测及比较.结果:两组患者上述指标均呈现先升后降,且观察组治疗前及治疗后3、7d均高于对照组,经比较,P均＜0.05,均有显著性差异.结论:牙周炎患者正畸治疗过程中龈沟液及血清中多项白介素、PGE2、sICAM-1及PAK5水平呈现先升后降的趋势,可以有效反应患者的应激变化情况.
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GATA1不同激酶活性突变体质粒的构建及蛋白表达和亚细胞定位
目的 采用大引物法构建GATA1不同激酶活性突变体GATA1 S161A S187A(死型)和GATA1 S161D S187D(激活型)真核表达载体,并证实其融合蛋白在细胞内的表达及定位,旨在进一步探讨其生物学功能和潜在肿瘤治疗靶点.方法 以GFP-GATA1WT为模板,采用大引物法扩增S161A S187A、S161D S187D突变体片段,双酶切克隆至pEGFP-C1表达载体中,将重组质粒转染至HEK293中,经免疫印迹鉴定融合蛋白的表达.结果 用大引物PCR法成功构建GATA1不同激酶活性突变体的真核表达载体pEGFP-GATA1 S161A S187A和pEGFP-GATA1 S161D S187D,验证了其融合蛋白表达.共聚焦激光显微镜技术显示,融合蛋白主要定位于细胞核内.结论 利用大引物法成功构建GATA1不同激酶活性突变体真核表达载体,并为进一步进行该突变体的结构和功能研究奠定了基础.
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miR-489通过打靶PAK5抑制黑色素瘤的迁移
目的 探讨miR-489对黑色素瘤迁移的抑制作用.方法 通过Transwell实验检测miR-489对黑色素瘤迁移的影响;荧光素酶报告基因实验检测A375细胞中miR-489对PAK5的靶向作用;进一步通过Western blotting以及实时PCR检测miR-489对于A375细胞中PAK5的影响.结果 Transwell实验发现miR-489过表达后可以显著抑制A375细胞的迁移,当miR-489受到抑制后,A375细胞的迁移受到促进.荧光素酶报告基因实验证明,miR-489可以直接作用于PAK5.Western blotting和实时PCR检测发现,过表达miR-489可以抑制A375细胞中PAK5蛋白的表达;当miR-489受到抑制后蛋白表达有所增加.结论 miR-489可以通过打靶PAK5抑制黑色素瘤细胞的迁移.
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p21活化激酶5在骨肉瘤组织中的表达及临床意义
背景与目的：p21活化激酶5(p21-activated kinase 5，PAK5)为PAKs家族中新近发现的成员，在细胞骨架重组，细胞生长、增殖、分化，基因转录及细胞凋亡等一系列的细胞功能中发挥重要作用。近来有研究发现PAK5参与了胃癌、肠癌等恶性肿瘤的发生发展过程。本研究旨在探讨PAK5在人骨肉瘤组织中的表达及其与骨肉瘤患者预后的关系。方法：应用免疫组化方法检测92例骨肉瘤活检样本石蜡组织中PAK5蛋白的表达，33例骨巨细胞瘤样本作为阴性对照，并分析PAK5表达与骨肉瘤患者临床参数及生存之间的关系。结果：骨肉瘤组织中PAK5蛋白表达阳性率为71.7%(66/92)，骨巨细胞瘤中未见PAK5表达(0/33)。PAK5表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型、局部复发等无关，而与Enneking分期、肿瘤坏死率和肺转移相关，且PAK5高表达能降低化疗的有效率。单因素分析表明，肿瘤大小、Enneking分期、局部复发、肺转移及PAK5表达水平是影响骨肉瘤患者预后的因素。多因素分析显示，PAK5表达水平(P=0.001)及肺转移(P=0.015)是影响骨肉瘤预后相关的独立的重要因素。结论：PAK5表达水平与Enneking分期、肿瘤坏死率和肺转移相关；PAK5的表达可作为骨肉瘤预后预测的指标；PAK5高表达能降低化疗的有效率。
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PAK5和P-gp与上皮性卵巢癌相关性的临床研究
目的：研究PAK5和P-gp与EOC临床因素的相关性，为预测上皮性卵巢癌（EOC）进展及患者预后提供指导。方法回顾分析自2013年1月至2015年6月接受手术治疗且经病理确诊为EOC的患者，回顾整理患者的病理类型、FIGO分期、细胞分化和化疗耐药等临床资料，并用免疫组织化学方法测定EOC中PAK5和P-gp的表达量，分析PAK5和P-gp在EOC组织中的表达情况及与临床资料的关系。结果在EOC患者组织中，单因素分析，PAK5的阳性率在FIGO分期晚期组高于FIGO早期组，细胞低分化组高于中高分化组（P均<0.01）。PAK5与病理类型阳性率无明显差异（P>0.05）。P-gp的阳性率在FIGO分期晚期组高于FIGO早期组，细胞低分化组高于中高分化组（P均<0.01）。PAK5与病理类型阳性率无明显差异（P>0.05）。PAK5阳性率在耐药组高于敏感组，差异有统计学意义（P<0.05）。P-gp阳性率在耐药组高于敏感组，差异有统计学意义（P<0.001）。结论 PAK5和P-gp在EOC组织中均呈高表达，PAK5和P-gp阳性表达量与FIGO分期、细胞分化不良和化疗耐药有关，对预测上皮性卵巢癌疾病发展及患者预后有重要意义。
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PAK5在胃癌演化过程中的表达研究
目的 探讨PAK5在不同胃癌演化阶段胃黏膜组织中的表达情况.方法 选取于本院进行胃镜检查的患者124例,其中非萎缩性胃炎(NAG)组患者17例,慢性萎缩性胃炎(CAG)伴完全性小肠上皮化生(CIM)组24例,CAG伴不完全性小肠上皮化生(IIM)组15例,CAG伴完全性结肠上皮化生(CCIM)组26例,CAG伴不完全性结肠上皮化生(ICIM)组11例,不典型增生(DYS)组15例以及胃癌(GC)组16例.采用免疫组化(IHC)和蛋白质印记(Westem blot)检测PAK5在各组胃粘膜中的表达情况.结果 7组间PAK5表达及平均光密度差异有统计学意义(P＜0.01);相关性分析结果显示,IHC PAK5表达的平均光密度与疾病演化呈正相关(P＜0.01),Western blot PAK5表达与疾病演化呈正相关(P＜0.01).结论 PAK5在不同胃癌演化阶段存在表达差异,其表达的升高可能与胃癌的演化密切相关.
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大肠癌演化过程中PAK5的表达及临床意义
目的：研究PAK5在大肠癌演化过程中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法，检测PAK5基因分别在正常肠黏膜组织98例、增生性息肉40例、PJS息肉9例、腺瘤38例、大肠癌原发灶106例和转移灶25例中的表达水平。结果PAK5在正常肠黏膜、息肉、腺瘤、大肠癌原发灶及转移灶中表达依次增强（P＜0.0001）；在Dukes A-D期的大肠癌组织中，PAK5的表达水平也逐渐增强（P＜0.01）；在由高至低分化的大肠癌组织中，PAK5的表达也逐渐增强（P＜0.01）。结论PAK5参与大肠癌的演化过程，可能与大肠癌的发生与转移机制有关。
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抗P-21激活的磷酸化蛋白激酶5多克隆抗体的制备及其在牙胚细胞研究中的应用
目的克隆PAK5-N端基因并诱导其表达,进行多克隆抗体制备,为研究其在牙胚细胞中的生物学功能奠定基础.方法根据人全长PAK5 cDNA序列,设计引物;利用PCR技术,以PAK5全长cDNA为模板扩增PAK5-N端基因,将扩增产物克隆至pGEX-4T-1载体中,经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切后进行重组质粒鉴定,DNA测序.以硫代半乳糖苷诱导其在大肠杆菌BL21中表达.利用GST融合蛋白纯化系统进行蛋白纯化,通过免疫家兔制备多克隆抗体,并在牙胚细胞中进行了初步研究.结果和结论成功克隆了PAK5-N端基因,在E.coli中表达了PAK5-NT,并纯化了GST融合蛋白,制备了PAK5特异性抗体.Westernblotting表明PAK5在牙胚细胞中过度表达,为其在口腔细胞中的生物学功能研究提供了依据.
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PAK5对大肠癌细胞黏附及迁移的影响
目的 研究PAK5对大肠癌细胞黏附以及迁移的影响.方法 采用基因转染上调PAK5在LST细胞中的表达水平,以及RNA干扰下调PAK5在SW480细胞中的表达水平,采用细胞黏附以及迁徙实验检测PAK5的黏附、迁徙能力;结果采用基因转染上调PAK5在LST 细胞株中的表达水平后,细胞-基质黏附能力减弱,迁徙能力增强;相反,采用RNA干扰敲低PAK5在SW480细胞株中的表达水平后,细胞-基质黏附能力增强,迁徙能力减弱.结论 PAK5通过减弱细胞-基质黏附,增强大肠癌细胞的迁徙能力.
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下调PAK5抑制紫杉醇诱导卵巢癌细胞自噬现象的研究
目的 初步探讨下调PAK5的表达对化疗药物紫杉醇诱导CAOV-3卵巢癌细胞发生自噬和凋亡的影响.方法 通过RT-qPCR检测PAK5在卵巢癌细胞中的mRNA表达情况.在CAOV-3卵巢癌细胞中通过下调PAK5表达后,CCK8实验检测紫杉醇对肿瘤细胞毒性改变,流式细胞术检测细胞凋亡率的改变,以及免疫印迹法检测自噬相关蛋白LC3B的表达变化.结果 PAK5在不同卵巢癌细胞中高表达;在CAOV-3卵巢癌细胞中,与阴性对照siRNA组比较,PAK5 siRNA组中无论是PAK5的mRNA水平还是蛋白表达水平均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);随着紫杉醇浓度的逐渐递增,紫杉醇对CAOV-3卵巢癌细胞毒性逐渐增加,而下调PAK5表达后,紫杉醇对卵巢癌细胞毒性增加更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05);在紫杉醇处理的CAOV-3卵巢癌细胞中,下调PAK5的表达后可明显增加细胞的凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05);在紫杉醇处理的CAOV-3卵巢癌细胞中,下调PAK5的表达后可减少自噬相关蛋白LC3B蛋白的表达.结论 PAK5过表达于不同的卵巢癌细胞中,下调PAK5基因可以促使自噬相关蛋白LC3B表达减弱,可能是通过抑制CAOV-3卵巢癌细胞发生自噬,促进细胞凋亡,从而提高了CAOV-3卵巢癌细胞对紫杉醇化疗的敏感性,减少紫杉醇获得性耐药的发生.
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PAK5调控的信号通路在癌症中的研究进展
小G蛋白Rho家族的下游靶蛋白-p21活化激酶(p21-activated kinases,PAKs),属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,可与Rac1和Cdc42结合,在进化上高度保守,可被多种胞外信号活化.PAK5是PAKs家族中发现晚、研究甚少的成员.PAK5在细胞骨架重组、细胞生长、增殖、分化、基因转录及细胞凋亡等功能中具有重要作用.研读文献可知,在神经源性肿瘤、胃肠道肿瘤及卵巢上皮癌等中均存在PAK5过表达.本文就PAK5与肿瘤的关系及其对细胞骨架调节、细胞增殖和抗凋亡等信号通路的调控机制做一综述.
