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人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区甲基化状态的研究
目的:探讨6种人食管鳞癌细胞株KYSE150,KYSE510,TE13,EC9706,CaEs17和EC109中RIZ1基因启动子区的甲基化状态；观察特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对存在甲基化的细胞株RIZ1基因的转录调控作用及其对该细胞生长增殖的影响.方法:甲基化特异PCR(MSP)法检测6种人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区的甲基化状态；实时定量PCR法检测5-Aza-CdR处理前后RIZ1基因启动子区CpG岛高度甲基化的人食管鳞癌细胞株TE13中RIZ1 mRNA表达量的变化；MTT 法检测5-Aza-CdR对TE13细胞生长增殖的影响.结果:(1)6种人食管鳞癌细胞株中TE13,CaEs17,EC109三株细胞RIZ1基因启动子区存在甲基化；(2)5-Aza-CdR处理细胞株TE13后,RIZ1 mRNA表达量上调；(3)5-Aza-CdR能抑制TE13的生长增殖,并随时间的延长和浓度的增加抑制作用变明显.结论:启动子区CpG岛高度甲基化是人食管鳞癌细胞株TE13 RIZ1基因表达沉默的重要原因；5-Aza-CdR能使TE13 RIZ1 mRNA表达上调；并能抑制TE13细胞的生长增殖,并呈时间和浓度依赖性.
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5-Aza-CdR上调裸鼠胶质瘤SLC22A18基因的表达及其对胶质瘤的抑制作用
目的 探讨去甲基化药物5-杂氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胶质瘤U251细胞SLC22A 18表达及对肿瘤生长的影响.方法 皮下接种法建立胶质瘤U251细胞裸鼠种植瘤模型,随机分为实验组(12只)和对照组(12只).实验组裸鼠皮下注射5-Aza-CdR,对照组裸鼠皮下注射等量PBS.4周后处死裸鼠,观察胶质瘤的生长情况,用逆转录PCR技术及免疫组织化学技术检测SLC22A18 mRNA及蛋白的表达.结果 用药4周后,对照组SLC22A 18 mRNA表达极低(0.132±0.056),而实验组表达明显增强(0.552±0.124),两者相差显著(P＜0.01)；对照组几乎检测不到SLC22A18蛋白表达,而实验组可检测到SLC22A18蛋白明显表达；用药4周后实验组肿瘤的体积为(982.52±415.45)mm3,对照组为(1 468.56±642.34)mm3,两者相差显著(P＜0.05).结论 5-Aza-CdR能上调裸鼠皮下种植胶质瘤U251细胞的SLC22A 18表达,抑制胶质瘤的生长,其机制可能为5-Aza-CdR使甲基化的SLC22A18启动子去甲基化表达,恢复SLC22A 18的表达,从而抑制胶质瘤生长.
关键词： 胶质瘤 U251细胞 SLC22A 18基因 表达 5-杂氮-2’-脱氧胞苷 去甲基化 裸鼠 -
5-Aza-CdR对食管鳞癌甲基化基因的影响
目的 探讨5-aza-CdR对食管鳞癌甲基化基因的影响.方法 应用人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片,荧光双交换法检测5-aza-CdR干预的食管鳞癌细胞Eca-109与正常培养的Eca-109细胞中的差异表达基因,并进行生物信息学分析.结果 经统计学分析,共筛选获得384个差异表达基因,其中303个基因表达上调,81个基因表达下调；差异基因的功能涉及信号转导、物质合成代谢、细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡、DNA转录、DNA复制、DNA修复、氧化还原、物质运输、免疫反应等；上调表达基因中有138个基因分别含有1～5个CpG岛序列,占总上调基因的45.54％.结论 5-aza-CdR可以影响食管鳞癌细胞中基因异常的甲基化修饰,调控肿瘤细胞的异常凋亡和分化,为进一步研究食管鳞癌致病分子机制,提供表观遗传学的依据.
关键词： 食管鳞癌 Eca-109细胞系 5-杂氮-2’-脱氧胞苷 基因芯片
