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实时荧光 PCR 技术和细菌培养法检测妊娠晚期孕妇定植B 群链球菌临床分析
目的：探讨应用实时荧光 PCR 技术和细菌培养法检测妊娠晚期孕妇定植 B 群链球菌（GBS）的敏感性。方法采集孕妇生殖道-直肠分泌物拭子2份，一份标本用普通细菌培养法、另一份用实时荧光 PCR 技术检测生殖道 GBS。比较两种方法的准确性、快速性。308例孕妇根据实时荧光 PCR 检测分为 GBS 阳性组与 GBS 阴性组，通过对比较分析 GBS 与发生胎膜早破的关系。结果将308例孕妇进行生殖道 GBS 检测，用普通细菌培养法进行培养有18例阳性，阳性率5．8％（18/308），实时荧光 PCR检测有29例阳性，阳性率9．4％（29/308）。在 PCR 检测 GBS 阳性组中，发生胎膜早破9例，发生率为31％。在 PCR 检测 GBS阴性组中，发生胎膜早破33例，发生率为11．83％。结论该次调查结果显示实时荧光 PCR 技术的阳性检出率明显高于细菌培养法，应用该法检测技术为 GBS 的快速诊断以及更加准确有效地进行抗菌药物预防提供了依据。
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TaqMan荧光探针技术检测不同血清型B群链球菌的方法建立及评价
目的 建立基于T aqM an荧光探针技术,对不同血清型B群链球菌(GBS)鉴定的分子方法,为后续研究多重荧光探针技术检测不同血清型GBS奠定基础.方法 根据不同血清型荚膜多糖(CPS)序列的差异设计引物和探针,用实时荧光定量PCR扩增CPS序列,建立不同血清型的GBS分型方法,从灵敏度、特异度及临床分离株检测等方面对该方法进行评价,并与胶乳凝集试验结果比较.结果 同一血清型GBS的DN A 的对数浓度与循环阈值(Ct)呈良好的线性相关,该方法的检测下限均为1 pg/μL,一种探针只能检测对应血清型的GBS.10株标准菌株的T aqM an荧光探针技术检测结果与胶乳凝集试验结果一致.结论 T aqM an荧光探针技术是一种简单、快速、具有较高灵敏度和特异度的检测GBS血清型的方法,对临床分离株的分型优于乳胶凝集试验.
关键词： TaqMan荧光探针 实时荧光定量聚合酶链反应 B群链球菌 -
B 群链球菌免疫层析法的建立及其临床应用
目的：建立一种B群链球菌（GBS ）的胶体金免疫层析检测方法，并进行临床应用评价。方法收集202例阴道分泌物标本，采用细菌分离培养法作为金标准对标本的GBS进行检测，同时采用以双抗体夹心法为基础研制出B群链球菌胶体金免疫层析试纸条检测作为对照，分析其灵敏度、特异度，计算Kappa值分析两种方法的一致性。结果免疫层析法检测GBS的敏感度为97．50％，特异度为97．54％；与细菌分离培养法的总符合率为97．52％，Kappa值为0．948。结论免疫层析法检测GBS具有较高的敏感度和特异度，且简便准确，对GBS的筛查和快速诊断具有重要的临床应用价值。
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危重症新生儿B群链球菌感染危险因素及实验室指标应用研究
目的：分析危重症新生儿B群链球菌（GBS ）感染危险因素，以及降钙素原（PC T ）和D‐二聚体（D‐D ）检测的临床应用价值。方法于2010年1月至2015年12月，对46例危重症GBS感染新生儿进行感染危险因素分析，并检测PC T和D‐D水平。结果危重症新生儿GBS感染与分娩方式、胎膜早破、出生体质量及孕妇产前GBS筛查有关（ P＜0．05）。PC T与D‐D水平与患儿病情严重程度密切相关（ P＜0．05）。结论有效干预和控制新生儿GBS感染相关危险因素，可减少和避免感染的发生。PC T、D‐D水平检测可用于患儿病情评估和疗效评价，具有一定的临床应用价值。
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不同方法检测B群链球菌效果评价
目的：分析显色肉汤法、金标免疫层析法（简称金标法）、乳胶凝集法在孕妇B群链球菌（GBS ）定植筛查中的应用效果。方法同时采用细菌培养法、显色肉汤法、金标法、乳胶凝集法对1300例孕35～37周孕妇阴道下端或肛周拭子进行GBS筛查。以细菌培养法作为金标准方法，评价显色肉汤法、金标法、乳胶凝集法的诊断性实验性能。结果显色肉汤法检出率为12．8％、金标法为11．5％、乳胶凝集法为12．1％、细菌培养法为12．0％，不同方法检出率比较差异无统计学意义（ P＞0．05）。显色肉汤法准确度、灵敏度高，分别为98．4％和98．6％；金标法特异度高，为98．9％，但漏诊率达到14．7％；乳胶凝集法特异度为97．2％，阴性预期值为97．3％。结论与细菌培养法相比，3种方法筛查GBS的检出率相近。显色肉汤法准确、特异，检测系统独立，可作为孕妇GBS定植筛查和辅助诊断的常规方法。金标法检测速度快，可用于门诊大规模常规筛查。乳胶凝集法特异度较好，成本低，适合基层医院开展。
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B群链球菌快速检测方法研究进展
B群链球菌(group B streptococcus,GBS)又名无乳链球菌,是围生期女性泌尿生殖道感染和新生儿期重症肺炎、败血症和脑膜炎的常见病原菌.新生儿的GBS感染临床进展迅速,具有发病迅速、病死率高的特点,是新生儿的主要死亡原因,已引起世界范围内广大学者的深切关注.细菌培养是检测GBS的标准方法,但此菌营养要求较高,培养鉴定耗时较长(至少2 d)且阳性率较低.如何在感染早期快速、准确、灵敏地检测B群链球菌成为研究的热点,本文重点概述微生物学、免疫学、分子生物学等检验方法的新研究进展.
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痰液中B群链球菌的分离与药敏结果
B群链球菌又称无乳链球菌,是引起新生儿败血症和脑膜炎常见菌,但不作为下呼吸道感染的常见菌[1].通过对100例下呼吸道感染患者的痰液进行细菌分离及药敏试验,在40例患者中分离出无乳链球菌,现报道如下.
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B群链球菌在孕妇及新生儿中的带菌调查及耐药性研究
目的:观察B群链球菌(group B streptococcus,GBS)在孕妇及新生儿中的带菌状况及耐药性,为提高患者的疗效、母婴生活质量提供依据.方法:426例围产期孕妇以及分娩后428例新生儿进行样本采集,之后给予GBS细菌鉴定及药敏试验,记录鉴定及药敏试验结果.结果:426例围产期孕妇GBS检测阳性率为19.01％,明显高于新生儿的1.40％,差异有统计学意义(x2=72.38,P=0.000).GBS对氨苄青霉素以及先锋青霉素药物的敏感性100％,临床可用上述药物对其进行治疗,能够达到较为满意的治疗效果.结论:临床工作中应对围产期孕妇采取GBS检测,若确认感染,则应积极采取治疗措施,避免发生母婴传播现象以及出现早产、晚期流产等情况,提高围产期孕妇与新生儿生活质量.
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B群链球菌多位点序列型及大环内酯类耐药基因相关性分析
目的 对孕妇携带的大环内酯类耐药的B群链球菌(GBS)进行多位点序列分型及大环内酯类耐药基因检测,探讨其多位点序列型与大环内酯类耐药基因的相关性.方法 采用PCR方法检测东莞地区孕妇携带的82株大环内酯类耐药GBS的耐药基因ermB、mefA/E、linB.采用PCR扩增82株大环内酯类耐药GBS的7个管家基因,对其进行DNA测序,并对测序结果进行多位点序列分型(MLST),以eBURSTv3.0分析菌株间的亲缘关系.结果 82株大环内酯类耐药的GBS中,耐药基因ermB、mefA/E和linB的总检出率分别为73.17％、46.34％和7.32％.MLST分型得到CC1、CC12、CC17、CC19共4个克隆群;17个序列型,主要序列型为STl(6.10％)、ST12(7.32％)、ST17(9.76％)、ST19(37.8％)和ST23(14.63％).结论 东莞地区孕妇携带的序列型ST19的GBS检测率高;序列型ST12、ST19、ST23的GBS大环内酯类耐药基因携带率高,其分子构型可能与大环内酯类耐药基因的获得关系密切.
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B群链球菌对红霉素及克林霉素耐药机制研究
目的 研究东莞地区孕产妇携带的GBS对大环内酯类的主要耐药表型及对红霉素、克林霉素的耐药机制.方法 采用D试验筛查51株孕产妇携带的GBS对大环内酯类耐药表型;采用PCR方法检测GBS红霉素耐药基因ermTR、ermB、mefA/E及克林霉素耐药基因linB,进行基因测序及BLAST序列比对分析.结果 51株GBS经D试验筛查,35株为cMLSB耐药表型,7株为M耐药表型,9株为L耐药表型,未检测到iMLSB耐药表型;PCR检测到ermB 40株、mefA/E 23株、linB5株,未检测到erm TR耐药基因;cMLSB耐药表型中37.14％(13/35)GBS同时检出ermB和mefA/E基因.结论 东莞地区孕产妇携带的GBS菌株大环内酯类耐药表型以cMLSB为主;ermB编码的23S rRNA甲基化酶是介导红霉素耐药的主要耐药机制;检测到新型耐药基因linB.东莞地区cMLSB耐药表型高而M耐药表型低,提示克林霉素作为预防和治疗GBS感染的二线药物在该地区可能会受到一定的限制.
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孕妇产道B群链球菌感染情况分析
目的:分析孕妇产道B群链球菌感染情况.方法:采用本院门诊和住院孕妇采集阴道分泌物标本分步培养、鉴定.结果:150例待产孕妇检出B群链球菌29株,阳性率为19.3%,D群链球菌9株,阳性率6.0%,草绿色链球菌27株,检出率18.0%.结论:孕妇B群链球菌的检出,对产妇和婴幼儿的医学保健具有重要的临床意义.
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深圳地区人群B群链球菌血清学分布和毒力基因及耐药性分析
目的 了解深圳地区B群链球菌(GBS)血清型分布、毒力基因和耐药性.方法 来自深圳4家医院515例B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)分离株(其中108例侵袭性,112例非侵袭性和295例定植株).所有GBS分离株采用常规血清方法和分子方法进行血清型分型;PCR方法检测GBS分离株的scpB,lmb,hylB,cylE,bac,bca和rib毒力基因;纸片扩散法检测GBS对青霉素、红霉素和四环素的敏感度;青霉素的低抑菌浓度(MICs)用E实验检测.结果 分子分型(8个血清型Ⅰa,Ⅰb,Ⅱ～Ⅵ,Ⅸ)与血清分型相符.结合分子分型与血清学分型,血清型Ⅲ是常见的荚膜型(56.5％),然后依次为Ⅰb(17.5％),Ⅰ a(12.6％),V(7.4％),Ⅱ(2.7％),Ⅵ(1.4％),Ⅳ(1.0％)和Ⅸ(1.0％).在不同的人群中Ⅲ型为主要血清型.除Ⅲ型外,在侵袭性和非侵袭性感染人群中,血清型Ⅰa也较为常见(11.1％和29.5％),Ⅰb在定植人群中较为常见(19.3％).PCR检测毒力基因表明在几乎所有分离株中含cylE,lmb,scpB和hylB基因,在515例分离株中发现rib,bca和bac基因分别为29.1％,14.6％和9.7％.此外,一些毒力基因显著与特定的血清型相关,如rib与血清型Ⅲ,Ⅰa和Ⅰb主要相关;bca和bac与血清型Ⅲ和Ⅰb主要相关.药敏结果显示,GBS对β内酰胺酶100％敏感,对红霉素、克林霉素和四环素的耐药性分别为67.0％,61.9％和86.0％.结论 GBS血清型分布、毒力基因和耐药性的相关性为临床治疗、流行病学研究和疫苗设计方面提供重要依据.
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D试验检测红霉素耐药葡萄球菌和B群链球菌
目的 了解葡萄球菌和B群链球菌对红霉素和克林霉素的耐药性,以及红霉素对克林霉素诱导耐药的发生率.方法 用CLSI标准D试验检测红霉素和克林霉素的耐药性.结果 所有406株葡萄球菌和75株B群链球菌中对红霉素和克林霉素耐药(eMLS)分别为232株(57.1%)和64株(85.3%);对红霉素耐药对克林霉素敏感但D试验阳性(iMLS)的分剐为103株(25.4%)和4株(5.4%);对红霉素耐药对克林霉素敏感但D试验阴性(MS)的分别为71株(17.5%)和7株(9.3%).结论 临床徽生物实验室常规进行D试验检测葡萄球菌和B群链球菌中对红霉素和克林霉素的诱导耐药性,可帮助临床医生正确选用大环内脂类、林可霉素类和链阳菌素B类(MLSB)抗生素.
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农村孕妇B群链球菌筛查及药敏情况分析
目的 对农村孕妇阴道B群链球菌的感染情况以及药敏实验进行分析,给临床诊断及治疗提供帮助.方法 收集865例农村孕妇的阴道分泌物标本,进行B群链球菌培养鉴定和药敏试验,对结果进行统计分析.结果 865例阴道分泌物检出B群链球菌114株,阳性率13.18%(114/865),优势生长35例,占4.05%(35/865).药敏试验结果显示:青霉素、头孢曲松、头孢唑啉、万古霉素100%敏感,红霉素与克林霉素耐药达到80%左右.结论 对于阴道感染B群链球菌的农村孕妇,产科医生应尽早干预并合理选择药物,以保证孕妇及围产儿健康.
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快速鉴定B群链球菌及检测其耐药性方法的建立和初步应用
目的 建立快速鉴定B群链球菌(group BStreptococcus,GBS)的同时检测其对克林霉素、红霉素耐药基因的多重PCR方法,并初步应用.方法 建立多重PCR方法,同时扩增以下4个基因位点:GBS编码CAMP因子的基因cfd、大环类脂类耐药基因ermB和mefA/E、克林霉素耐药基因linB.对该方法的引物质量浓度、Taq酶量和退火温度进行优化,确定多重PCR适反应体系及低检测限;将该方法用于91株GBS临床菌株的鉴定及其耐药性的检测,并评价其与常规PCR方法结果的一致性.结果多重PCR的适反应体系,总量25 μL:多重PCR mix212.5 μL、多重PCR mix1 Taq酶0.23 μL、linB-F和linB-R引物0.4μmol/L、mefA/E-F和mefA/E-R引物0.2μmol/L、ermB-F和ermB-R引物0.12 μmol/L、cfd-F和cfb-R引物0.08 μmol/L、DNA 10 ～100 ng、不足量补入无菌去离子水.扩增程序为:94℃预变性60 s;94℃变性30 s、53℃退火90 s、72℃延伸30 s,共30个循环;72℃延伸10 min.低检测限为20 pg/μL.多重PCR方法与常规PCR方法检测91株GBS临床菌株,cfd基因结果一致率为100％,ermB、mefA/E和linB基因的Kappa值分别为0.938、0.956和0.935.结论 建立的以GBScfb、ermB、mefA/E和linB基因为检测位点的多重PCR方法,可在鉴定GBS的同时检测其对克林霉素、红霉素的耐药性.
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B群溶血性链球菌性脑膜炎8例临床分析
目的 探讨B群溶血性链球菌(GBS)性脑膜炎的临床特点.方法 选取2009-2012年广东省妇幼保健院新生儿重症监护病房收治的GBS脑膜炎病例,回顾性分析其围生期因素、临床表现、辅助检查、治疗和预后.结果 研究期间共收治8例GBS脑膜炎患儿,发病日龄均>7天,主要表现为发热、抽搐、反应差,实验室检查炎症指标血白细胞(WBC)<4×109/L或>20×109/L 6例,超敏C反应蛋白(Hs-CRP)、降钙素原(PCT)等均不同程度增高,血小板变化不大,脑脊液呈典型化脓性脑膜炎改变,脑脊液培养GBS阳性8例,血培养GBS阳性4例,头颅CT证实脑积水4例.结论 GBS脑膜炎多为迟发性感染,临床表现与其他病原菌脑膜炎相似,脑脊液WBC明显增高,易复发,建议应用抗生素至少3周以上.
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怀化地区孕晚期B族链球菌区域及民族带菌情况差异的分析
目的:对怀化地区孕晚期B族链球菌感染率进行调查,分析怀化地区区域及民族B族链球菌感染率的差异,为B族链球菌感染的防治及将GBS检测纳入怀化地区孕妇常规检查的必要性.方法:收集到2015年1月—2016年12月在怀化市第一人民医院住院的孕28—41周孕妇2085例,其中少数民族652例,取孕妇的生殖道和直肠分泌物,采用实时荧光定量PCR技术对B族链球菌进行检测,统计区域及民族B族链球菌感染率.结果:本研究中,对2085例晚期孕妇(28～41周)调查显汉族晚期孕妇带菌率为12.63％,少数民族晚期孕妇带菌率为16.56％;城区居住的孕妇GBS阳性率10.6％,非城区居住孕妇携带率17.53％;城区居住少数民族者的孕妇GBS阳性率9.45％,非城区居住居少数民族者孕妇携带率19.73％.结论:怀化地区非城区居住及少数民族晚期孕妇B族链球菌感染率高的原因可能与怀化地区为边远山区,少数民族居民平时本人及性伴侣卫生习惯、生活习惯及饮食习惯等有关系需要我们投入更多的研究探索导致该现象的原因.
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围产期B群链球菌的显色平板筛查方法
目的:评价B群链球菌(GBS)显色平板在孕产妇围产期中筛查GBS的敏感性、特异性和选择性能.方法:收集孕35-37周后的孕妇肛门/阴道拭子标本共2040例,分别直接接种GBS显色平板上,记录筛查结果.以筛查出的GBS总阳性数为参考,评价显色平板筛查GBS的敏感性和特异性.结果:B群链球菌显色平板对GBS的筛查具有敏感性和特异性.结论:B群链球菌显色平板对国产期孕妇GBS有良好的筛查率,判断方法直观简便,快捷,灵敏度高特异性好,对非目标菌群有良好的抑制作用,适于在工作中进行推广应用.
