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表皮生长因子对癌细胞Colo26、Hep-2化疗增效作用的研究
目的:通过体外细胞实验观察表皮生长因子(EGF)对化疗药物的增效作用,并探讨EGF对化疗增效的可能机制.方法:选择Colo26、Hep-2为靶细胞,采用MTT比色分析法观察EGF对癌细胞株体外增殖的佳剂量及时间效应.通过免疫细胞化学染色测定细胞核增殖抗原(PCNA)指数,用流式细胞仪做细胞周期分析,初步探讨EGF对癌细胞株化疗敏感性的影响.用免疫细胞化学染色测定癌细胞的EGF受体(EGFR)表达,来初步探讨EGFR是否与EGF化疗增效作用有关.结果:①Colo26癌细胞株:实验组的每个浓度与对照组比较,光吸收值无明显差异(P＞0.05);实验组的24、48、72 h与对照组比较,光吸收值有差异(P＜0.05);实验组的PCNA指数与对照组比较,无差异(P＞0.05);实验组S、G2/M期细胞及细胞增殖指数(PI)与对照组比较,PI减少但无差异(P＞0.05).②Hep-2癌细胞株:实验组的0.01、0.10 ng/ml浓度与对照组比较,有显著差异(P＜0.01),1.00、10.0、100.00浓度有差异(P＜0.05);实验组的24、48、72 h与对照组比较,光吸收值有差异(P＜0.05);实验组的PCNA指数与对照组比较,有显著差异(P＜0.01);实验组S期细胞及PI与对照组比较,PI明显减少(P＜0.01),其中DDP对Hep-2作用尤为突出,而未增加G2/M期细胞阻滞.③Hep-2的EGFR表达阳性细胞率明显高于Colo26,差异显著(P＜0.01).结论:EGF可以提高化疗药物对Colo26、Hep-2细胞株的杀伤作用,其化疗增效作用以EGFR作用为前提,且有一定的剂量和时间效应.
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脂质体阿霉素对人喉癌HEP-2细胞株的影响
[目的]研究脂质体阿霉素对人喉癌HEP-2细胞株的作用特点.[方法]以MTT法分别测定脂质体阿霉素组与游离阿霉素组分别作用于HEP-2细胞株72h后的细胞增殖抑制率并比较两组的半数抑制浓度(IC50);通过流式细胞仪(FCM)检测两组药物分别作用于HEP-2细胞株72h后对其细胞周期的影响:采用荧光分光光度法分别测定脂质体阿霉素和游离阿霉素分别作用于HEP-2细胞株1、3、6h后实验细胞内的药物浓度.[结果]脂质体阿霉素对HEP-2细胞株的IC50是游离阿霉素的1/4倍.脂质体阿霉素组与游离阿霉素组分别采用0.016μg/ ml、0.06μg/ml的浓度作用于HEP-2细胞株72h后,均使HEP-2细胞株停滞于G2/M期.且脂质体阿霉素G2/M期百分率高于游离阿霉素.荧光分光光度法结果显示:脂质体阿霉素组内药物浓度在1、3、6h后均分别大于游离阿霉素组,且6h后脂质体阿霉素作用于HEP-2细胞株内的阿霉素浓度是游离阿霉素的4倍.[结论]与游离阿霉素相比,脂质体阿霉素对人喉癌HFP-2细胞株具有较好的增殖抑制作用,并且阻滞HEP-2细胞株于G2/M,其可能机制是与脂质体阿霉素增加细胞内阿霉素浓度有关.
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睾酮对喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶活性的影响
目的 研究睾酮对人喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶表达活性的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法研究不同浓度睾酮对Hep-2细胞株分裂增殖的影响,用免疫细胞化学检测10-8mol/L睾酮作用48h细胞雄激素受体及端粒酶的表达活性.结果 10-8mol/L睾酮作用48h,人喉癌细胞Hep-2细胞OD值由作用前的0.150±0.008增至0.281±0.010,其他实验浓度组均不能明显促进Hep-2细胞的分裂增殖.睾酮作用前后Hep-2细胞均强表达雄激素受体,表达率分别为95.73%和93.84%,差别无统计学意义.端粒酶表达率由睾酮作用前的52.35%增至89.21%,端粒酶强阳性细胞爬片由2张增至8张,差异有统计学意义.结论 HEP-2细胞株为雄激素敏感型细胞,睾酮可能通过上调端粒酶的表达促进喉癌Hep-2细胞的分裂增殖,这对研究喉癌的激素疗法及开发端粒酶抑制剂有重要的意义.
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RNAi沉默喉鳞癌Hep-2细胞株VEGF-C mRNA基因表达的实验研究
目的 构建针对喉鳞癌细胞株Hep-2中血管内皮生长因子C(vascular endothelial growthfactor C,VEGF-C)的siRNA表达载体,研究载体介导的RNAi技术对喉鳞癌细胞株Hep-2中VEGF-C mRNA表达的抑制作用.方法 依据siRNA靶序列的设计原则,以VEGF-C为靶基因,同时随机组合出一条对照序列,分别合成2对编码短发卡结构的两条DNA序列,经退火合成互补DNA双链,克隆入siRNA表达载体pSuper-neo中,转化鉴定后进行PCR和DNA序列测定.用脂质体介导转染入喉鳞癌Hep-2细胞株,采用RTPCR方法检测细胞VEGF-C基因mRNA水平的变化.结果 成功构建发卡样VEGF-C siRNA真核表达载体;转染VEGF-C靶向siRNA(pSuper-neo-siV1)的Hep-2细胞,VEGF-C基因的表达水平较无关对照组pSuper-neo-siV2和转染空载体pSuper-neo的对照组显著下降.结论 成功构建载体介导的VEGF-C靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制Hep-2细胞中VEGF-C mRNA表达.
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TPA处理增强喉鳞状细胞癌细胞株 Hep-2细胞的增殖
目的:探讨TPA对体外培养的人喉鳞状细胞癌细胞株HEp-2细胞的作用.方法:应用不同浓度TPA处理体外培养的HEp-2细胞,MTT法检测HEp-2细胞的存活比率.结果:HEp-2细胞经TPA处理后其细胞增殖能力呈现峰型,高峰出现在10 μg/L水平上,此时处理细胞的增殖能力是对照组的1.3～1.4倍.随着TPA浓度的增高,HEp-2细胞的增殖能力逐渐下降.结论:TPA处理可以增强HEp-2细胞的增殖能力.
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ERK1/2-PKM2/P53信号通路在喉癌Hep-2细胞株增殖中的作用
目的:探究ERK 1/2通过PKM2/P53信号通路调节喉癌Hep-2细胞株增殖的潜在机制.方法:采用细胞计数的方法统计经ERK 1/2抑制剂U0126、P53抑制剂PFTα处理后0,24,48 h时Hep-2细胞的细胞密度,实验随机分为空白对照组(Control)、对照组(Vehicle)、处理组(U0126或PFTα).采用转染PKM2-siRNA或PKM2-cDNA的方法在Hep-2细胞株上抑制或过表达PKM2.采用免疫印迹(Western Blot)的方法检测不同处理情况下ERK 1/2、p-ERK 1/2、P53、PKM2的蛋白水平.结果:抑制ERK 1/2的磷酸化可抑制Hep-2细胞生长,抑制P53可阻断抑制ERK 1/2导致的Hep-2细胞生长变缓.同时,抑制ERK 1/2可下调PKM2水平,抑制或过表达PKM2可分别上调或下调P53.过表达PKM2可阻断抑制ERK 1/2引起的Hep-2细胞生长变缓.结论:抑制ERK 1/2的磷酸化可通过下调PKM2水平促进P53表达进而抑制Hep-2细胞生长.
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TRAIL联合化疗药物诱导喉癌HEP-2细胞株凋亡的研究
目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体Tumor necrosis factor related apoptosis-inducingligand,TRAIL)与化疗药物氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)联合使用诱导喉癌HEP-2细胞株凋亡.方法:不同浓度的TRAIL、5-FU、DDP单独及TRAIL与5-FU、DDP联合处理HEP-2细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其细胞毒作用,荧光显微镜下观察并计算凋亡率,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率.结果:HEP-2细胞对低毒性的TRAIL不敏感,对化疗药物相对敏感,TRAIL与低毒性的化疗药物联合作用于细胞后可增强杀伤效应.结论:TRAIL与低毒性的5-Fu、DDP联用表现出高效的杀灭肿瘤细胞作用.
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siRNA抑制Cyclophilin A基因对喉鳞癌细胞Hep-2增殖和转移的影响
目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制亲环素A(cyclopilin A,CypA)的表达对喉癌细胞株Hep-2增殖和侵袭迁移的影响及相关机制.方法:实验分为3组:化学合成的靶向CypA的siRNA转染喉癌细胞Hep-2(CypA siRNA组),转染阴性对照NC siRNA的细胞(NC siRNA组)和对照组(control组).运用real-time PCR(RT-PCR)检测CypA及CD147mRNA的表达,Western blot检测CypA、CD147的蛋白表达.MTT法检测CypA对细胞生长曲线的影响;平板克隆形成实验检测CypA在喉癌细胞增殖中的作用;Transwell法检测CypA在喉癌细胞侵袭迁移中的作用.结果:CypA siRNA转染后的喉癌细胞株Hep-2中CypA、CD147的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P=0.000).CypA siRNA转染后的Hep-2细胞生长缓慢,克隆形成被抑制,control组克隆数为(235.00±23.90)、NC siRNA组为(240.67±10.07)、CypA siRNA组为(129.33±14.22)(F=40.460,P=0.000);转染后Hep-2细胞的迁移(F=497.124,P=0.000)、侵袭(F=129.787,P=0.000)能力明显降低.结论:CypA表达下调后可抑制喉癌细胞株Hep-2的增殖和侵袭迁移能力,其机制可能与抑制CD147的表达有关.
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靶向FAK的siRNA对喉癌细胞增殖及侵袭能力的抑制作用
目的 运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断喉癌Hep-2细胞株中FAK基因的表达,探讨FAK基因沉默后对Hep-2细胞株产生的影响.方法 针对FAK基因,构建2条干扰重组质粒FAK-pGenesil-CH1和FAK-pGen-esil-CH2,1条阴性对照重组质粒FAK-pGenesil-HK;在脂质体的介导下转染喉癌Hep-2细胞株,用RT-PCR和Westem blot分析FAK mRNA及蛋白的表达;MTT法、流式细胞技术及体外侵袭实验测定十扰重组质粒对Hep-2细胞株的增殖、侵袭能力的影响.结果 重组质粒能有效地阻断Hep-2细胞株中FAK基因在mRNA和蛋白水平上的表达(P<0.05);重组质粒转染Hep-2细胞后,细胞增殖抑制率分别为58.34%、52.78%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);干扰组G0~G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少(P<0.05);FAK-pGenesil-CH1、FAK-pGenesil-CH2作用Hep-2细胞株48 h后,Hep-2细胞穿过Matrigel膜的个数分别为(56.0±6.7)、(51.0±5,1),与阴性对照组(152.0 ±9.4)、正常对照组(139.0 ±8.1)比较有统计学差异(P<0.05).结论 干扰重组质粒能有效地抑制转染Hep-2细胞株的FAK mRNA及蛋白的表达,并能抑制Hep-2细胞株的增殖及侵袭能力.
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TRAIL联合5氟尿嘧啶诱导喉癌细胞株的凋亡
目的 探讨TRAIL与化疗药物5氟尿嘧啶(5-Fu)单独和联合对喉癌HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度的TRAIt、5-FU单独及联合作用于HEP-2细胞株,MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率,荧光显微镜下观察细胞形态,Western blot法检测c-FLIP、NF-κB蛋白的表达.结果 TRAIL与5-Fu联合作用于HEP-2细胞株时,其抑制率、凋亡率较单独作用时高,c-FuP、NF-κB蛋白的表达水平低于单独作用时的表达水平.结论 TRAIL与5-Fu联合作用有协同诱导 HEP-2细胞株凋亡的作用,可能机制为下凋c-FLIP、NF-κB蛋白的表达水平.
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抗肿瘤药物与TRAIL联用对喉癌HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响
目的 探讨化疗药物顺铂(DDP)、5氟尿嘧啶(5-Fu)单独及与TRAIL联合对HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响.方法 MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率.结果 TRAIL与5-Fu、DDP联合作用于HEP-2细胞株时,其抑制率、凋亡率高于单独作用时的抑制率和凋亡率.结论 TRAIL与5-Fu、DDP联合作用有协同抑制HEP-2细胞株增殖、诱导HEP-2细胞株凋亡的作用.
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紫珠果实提取成分对Hep-2细胞株的抑制作用
紫珠属马鞭草科植物,为民间草药.经贵阳医学院中草药教研室鉴定.文献报道紫珠叶中含黄铜、缩合鞣质、中性树脂、糖类、羟基化合物及镁、钙、铁盐[1],临床常用于止血、止痛、散瘀消肿[2].2000年3月,我们利用MTT法[3]测定了紫珠果实提取成分对Hep-2细胞株的抑制作用,结果显示所试样品在较高浓度(100mg/L)下对Hep-2细胞株具有很强的抑制作用,为紫珠进一步的药用研究提供了信息.
