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玻璃化冷冻同种异体气管移植动物模型的建立
如何降低移植气管的抗原性并促进其良好的血管化是当前气管外科领域的热点问题.本研究利用玻璃化冷冻方法保存的气管实施兔同种异体气管移植,观察玻璃化冷冻对气管抗原性的影响,评价移植后免疫排斥反应、再血管化过程和管腔的通畅程度.
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卵母细胞玻璃化冷冻的临床结局分析
目的 探讨卵母细胞玻璃化冷冻后解冻行体外受精-胚胎移植的临床结局.方法 回顾性分析2010年1月至2014年10月北京大学第三医院生殖医学中心68例不孕症患者卵母细胞玻璃化冷冻后解冻行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)的复苏率、2PN受精率、胚胎着床率、流产率和分娩率等临床结局.结果 解冻玻璃化冻存的卵母细胞756枚,复苏率80.69％ (610/756),其中MII卵母细胞519枚,2PN受精率53.56％ (278/519).68例患者中,12例无胚胎形成,占17.65％.56例患者共移植66个周期,其中新鲜胚胎移植51个周期,解冻胚胎移植15个周期.新鲜胚胎移植51个周期的临床妊娠率为54.90％(28/51),活胎分娩率为45.10％ (23/51).解冻胚胎移植15个周期的临床妊娠率为60.00％ (9/15),活胎分娩率为46.67％ (7/15).累积妊娠率为55.88％ (38/68).每解冻一枚卵母细胞获得活胎分娩率为5.03％ (38/756).结论 卵母细胞玻璃化冷冻技术在取卵日不能获得精子的患者中应用,可以获得良好的妊娠结局.
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人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻妊娠结局分析
目的 探讨人卵裂期胚胎和囊胚玻璃化冷冻解冻后复苏效果及妊娠结局.方法 回顾性分析434个卵裂期胚胎(卵裂组)和102个囊胚解冻周期(囊胚组)的临床资料,比较采用玻璃化冷冻解冻后的复苏率及妊娠结局.结果 囊胚组患者的临床妊娠率和胚胎种植率分别为63.73％ (65/102)和45.79％ (87/190),卵裂组分别为42.82％ (185/432)和24.17％ (241/997),两组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05);囊胚组患者的复苏率、流产率和异位妊娠率分别为98.45％ (190/193)、12.31％ (8/65)和0(0/65),卵裂组分别为97.55％ (997/1 022)、13.51％ (25/185)和2.16％ (4/185),两组比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05).卵裂组中,卵裂球完全存活患者的临床妊娠率和胚胎种植率分别为44.62％ (170/381)和25.57％(224/876),非完全存活者分别为29.41％ (15/51)和14.05％ (17/121),两组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 囊胚解冻移植的妊娠结局优于卵裂期胚胎,卵裂期胚胎解冻后胚胎的完整性影响胚胎种植.
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玻璃化冷冻人早期胚胎的效果观察
目的探讨玻璃化冷冻人早期胚胎的临床应用价值.方法采用由5.5 mol/L乙二醇及1.0 mol/L蔗糖制成的冷冻保护液,于0.25 ml冷冻麦管中,冷冻经体外受精-胚胎移植第2天或第3天后剩余的胚胎;对新鲜周期胚胎移植后未妊娠的胚胎,至少3个月或3个月以上施行胚胎复苏,观察胚胎复苏后的临床妊娠效果.结果共行胚胎复苏219例,957个胚胎,胚胎复苏后存活691个,胚胎存活率为72.2%(691/957);移植胚胎178例,临床妊娠35例,临床妊娠率为19.7%(35/178).35例中,分娩16例,流产6例,继续妊娠13例.结论玻璃化冷冻法简便,胚胎存活率高,是一种可用于临床的人早期胚胎冷冻的方法.
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玻璃化冷冻对卵母细胞和胚胎DNA甲基化影响的研究进展
低温保存技术是辅助生殖和生育力保存技术的重要组成部分。1983年，第1例人类冷冻胚胎成功移植并获得临床妊娠后，慢速程序化冷冻技术逐渐被用于临床工作，但是冷冻过程中冰晶的形成和渗透压的改变对胚胎造成的不可逆的损伤一直被广泛关注。玻璃化冷冻技术的出现无疑是巨大的进步，其通过快速降温从而抑制细胞内冰晶的形成，减少了渗透压及激冷等对细胞的损伤，提高了卵母细胞复苏后的存活率。由于其冷冻速度快、过程简单、无需昂贵的程序冷冻仪，以及高复苏率、高妊娠率等优势，已逐渐取代传统的慢速程序化冷冻。此外，玻璃化冷冻卵巢也常用于女性恶性肿瘤化疗前，为女性生育力保存问题提供了解决方法。然而，玻璃化冷冻过程引起的卵裂球丢失、卵泡超微结构受损等不可避免地在一定程度上影响了胚胎的发育潜能，但是否对表观遗传学修饰造成影响并没有确切的结论。
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应用胚胎玻璃化冷冻技术获得临床妊娠及分娩一例
患者34岁,因自然流产后9年未孕,于2002年8月来我院就诊.患者平时月经规律,子宫输卵管造影显示双侧输卵管峡部梗阻,基础内分泌水平正常.丈夫36岁,精液分析结果正常.夫妇要求"试管婴儿"助孕.
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玻璃化冷冻胚胎出生小鼠卵巢发育情况及卵巢组织中生长分化因子9的表达
目的 探讨玻璃化冷冻胚胎出生小鼠的卵巢发育情况及卵巢组织中生长分化因子9(GDF-9)的表达.方法 将玻璃化冷冻复苏胚胎(玻璃化冷冻组)和新鲜胚胎(新鲜胚胎组)分别移植入假孕小鼠子宫内,两组出生后的雌性子鼠分别于第3、7、14、21、28、60天处死,取卵巢组织,每组每个时间点各6只子鼠.对卵巢组织采用HE染色观察卵巢发育情况,采用荧光定量逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法检测卵巢组织中生长分化因子9(GDF-9) mRNA和蛋白的表达水平.结果 HE染色结果显示,两组子鼠卵巢发育无明显异常.子鼠出生后第3、7、14、21、28、60天,玻璃化冷冻组子鼠卵巢组织中GDF-9 mRNA表达水平分别为:0.14±0.07、0.42±0.16、1.00±0.24、1.59±0.28、2.05±0.32、2.23±0.21,新鲜胚胎组分别为:0.13±0.06、0.45±0.18、1.00±0.21、1.56±0.26、2.01±0.37、2.26±0.23,两组分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)；玻璃化冷冻组各时间点子鼠卵巢组织中GDF-9蛋白表达水平分别为:0.040±0.030、0.120±0.060、0.170±0.030、0.250±0.040、0.320±0.060、0.330±0.010,新鲜胚胎组分别为:0.030±0.020、0.110±0.040、0.150 ±0.010、0.210±0.020、0.360±0.070、0.350±0.030,两组分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论玻璃化冷冻胚胎出生小鼠的卵巢形态及GDF-9表达无明显变化.
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玻璃化冷冻成熟卵母细胞经解冻精液单精子注射受精并胚胎冻融及移植妊娠成功
编者按冷冻精子及胚胎技术,在国内外生殖医学中心已广泛应用于临床,但卵母细胞冷冻,尤其是快速冷冻,近年来才在国内外开展.冷冻精子、冷冻卵母细胞、冷冻胚胎(即"三冻")技术用于1例患者终成功妊娠并分娩活婴,于2004年为意大利首次报道.本文报道了北京大学第三医院生殖医学中心应用"三冻"技术,成功获得世界第2例、我国第1例"三冻"婴儿,反映了我国目前在辅助生育技术方面的发展,已经达到了国际水平.当然,卵母细胞冷冻技术仍需进一步完善,对出生的婴儿还应随访.同时,应强调必须遵守相应的法规和伦理.
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卵子玻璃化冷冻的临床应用
目的 探讨卵子玻璃化冷冻的临床应用可行性.方法 选择2011年7月至2016年5月,于江苏省苏北人民医院生殖医学中心采用玻璃化冷冻技术保存的卵子,进行卵母细胞胞质内单精子注射(ICSI)的13例患者,共计15个冷冻卵子ICSI周期为研究对象,纳入冷冻卵子组.选择同期于本院生殖医学中心进行新鲜卵子ICSI的252例患者,共计288个新鲜卵子ICSI周期作为对照,纳入新鲜卵子组.回顾性分析2组ICSI周期的临床病例资料,统计学比较2组受试者一般临床资料,受精情况及胚胎质量,以及临床妊娠结局.本研究遵循的程序符合江苏省苏北人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试者知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.结果 ①2组患者的年龄、不孕年限、人体质量指数(BMI)、ICSI卵子数比较,差异均无统计学差异(P＞0.05).②冷冻卵子组中,卵子解冻后复苏存活率为87.1％(108/124).冷冻卵子组卵裂率、优质胚胎率,均较新鲜卵子组显著降低,2组卵裂率与优质胚胎率分别为89.0％比98.2％与35.4％比50.7％,2组比较,差异均有统计学意义(x2=27.274,P＜0.001;x2 =5.871,P=0.016).2组正常受精率、可利用胚胎率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).③2组平均移植胚胎数比较,差异无统计学意义(P=0.822).冷冻卵子组体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期的胚胎种植率、活产率,均显著低于新鲜卵子组IVF-ET周期,并且差异均有统计学意义(x2=5.534,p=o.017;x2=7.005,P=0.011);2组IVF-ET周期的临床妊娠率、自然流产率分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 卵子玻璃化冷冻、解冻后,再进行IVF-ET,可获得一定临床妊娠率,但卵子玻璃化冷冻技术仍会对卵子质量产生影响,进而影响胚胎质量和临床妊娠结局,此技术有待进一步改善.因本研究纳入样本量相对较小,卵子玻璃化冷冻技术保存的有效性,仍有待多中心、大样本、随机对照研究进一步证实.
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全胚冷冻周期患者不同冻融胚胎移植次数的临床妊娠结局分析
目的 探讨同一促排卵周期全胚冷冻患者,冻融胚胎移植(FET)次数与临床妊娠率的关系.方法 选择2012年1月至2016年9月在苏北人民医院生殖医学中心实施全胚冷冻后FET的807例患者为研究对象,按照FET累计次数不同,将FET累计1次者纳入A组(n=543),FET累计2次者纳入B组(n=181),FET累计3次者纳入C组(n=63),FET累计4次者纳入D组(n=20).回顾性分析807例患者的一般临床资料、移植周期资料以及累计临床妊娠率、临床妊娠率.结果 ①4组患者的年龄、不孕年限、人体质量指数(BMI)、不孕类型构成比、不同因素全胚冷冻率构成比、基础卵泡刺激素(FSH)水平、基础黄体生成素(LH)水平、基础雌二醇水平、基础睾酮水平、基础窦卵泡数(AFC)、获卵数、减数第2次分裂中期(MⅡ)卵母细胞数、正常受精率、同一取卵周期可移植胚胎数等比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).②各组患者胚胎移植日子宫内膜厚度、移植胚胎数、优质胚胎率及内膜准备方案中人工周期率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).③4组患者累计临床妊娠率分别为64.5％、60.0％、58.7％、60.0％,组间比较,差异无统计学意义(x2=1.67,P=0.64).4组患者临床妊娠率依次为64.5％、36.5％、25.1％、18.8％,组间比较,差异有统计学意义(x2=143.02,P＜0.01).结论 同一促排卵周期增加FET次数,全胚冷冻患者累计临床妊娠率无显著变化.同时首次进行FET未妊娠者,随着FET次数增加,临床妊娠率显著降低.
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囊胚和卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻移植周期的妊娠结果分析
目的:比较囊胚和卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻后移植周期的妊娠结果.方法:回顾分析2014年1月至2014年12月在我院生殖医学中心行玻璃化冷冻解冻移植周期388个患者的妊娠情况,其中囊胚冷冻解冻165个移植周期(A组),卵裂期胚胎冷冻解冻223个移植周期(B组).结果:A组和B组解冻存活率分别98.76％和96.74％,两组间无统计学差异(P＞0.05);临床妊娠率、种植率和单胎率A组(68.48％、57.38％和76.10％)显著高于B组(68.48％、57.38％和59.37％);多胎率、双胎率和三胎率A组(23.01％、22.12％和0.88％)显著低于B组(40.62％、31.25％和9.37％,P＜0.05);A组和B组的流产率分别为5.31％和6.25％,两组间无统计学差异.结论:囊胚和卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻均能获得较高的存活率、临床妊娠率和种植率,且囊胚玻璃化冷冻移植周期提高了临床妊娠率及种植率,同时降低了多胎率的发生.
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玻璃化冻融卵裂期胚胎体外培养时间对妊娠结局的影响
目的:研究人卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏后的体外培养时间对妊娠结局的影响.方法:回顾性分析2016年1月1日至2016年11月30日在我中心进行冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)治疗的患者492个周期.根据胚胎解冻后是否过夜培养分为两组,A组为解冻后过夜培养组,共270个周期;B组为解冻当日移植组,共222个周期.根据过夜培养后胚胎是否生长,将A组继续分为三个亚组,A1组:全部胚胎均生长,共161例:A2组:部分胚胎生长,共89例;A3组:无胚胎生长,共20例.比较各组患者年龄、内膜厚度、移植胚胎数、胚胎复苏率、临床妊娠率及胚胎着床率.结果:A组与B组在患者年龄、内膜厚度、胚胎复苏率、移植胚胎个数、临床妊娠率和胚胎着床率等方面均无统计学差异(P＞0.05).A1、A2、A3三组之间在患者年龄、内膜厚度、移植胚胎数及临床妊娠率等方面均无统计学差异(P＞0.05),但是A1组的胚胎复苏率(92.99％)显著高于A3组(83.64％)(P＜0.05),A1组的胚胎着床率(28.12％)分别显著高于A2组(19.53％)和A3组(13.04％)(P＜0.05).结论:胚胎复苏后是否过夜培养并不影响妊娠结局,但是过夜培养后继续生长的胚胎具有更高的着床率.
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海藻糖在人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻中初步应用
目的:探讨海藻糖在人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的临床应用价值.方法:回顾性分析2014年1月至2015年12月在我院生殖中心行卵母细胞玻璃化冷冻的8例患者,解冻后行卵胞浆内单精子显微注射,记录存活、受精、卵裂及妊娠情况.结果:8例患者共解冻52枚胚胎,存活43枚,存活率82.69％,受精率67.44％,卵裂率89.66％;1例患者取消移植,7个移植周期获得临床妊娠3例,其中胚停1例,活产l例,继续妊娠1例.结论:海藻糖在人类成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的临床应用可获得较好的临床结局.
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单囊胚冻融周期中囊胚冷冻时期及冻融后囊胚再次扩张程度对临床结局的影响
目的：分析比较第5天（Day 5）、第6天（Day 6）的冻融单囊胚移植对妊娠结局的影响，探讨不同发育天数囊胚对冻融后胚胎的发育潜能和临床结局的影响，以及囊胚解冻后的扩张程度对临床结局的影响。方法：回顾性分析2012年10月至2014年10月在我院生殖中心行冻融单囊胚移植的患者211例，根据冷冻时间不同分为 Day 5冷冻组（n ＝113）和 Day 6冷冻组（n ＝98），比较两组患者的临床妊娠率，胚胎种植率和早期流产率。根据囊胚解冻后2小时囊腔的扩张程度分为：部分扩张组（n ＝54）、完全扩张组（n ＝105）、孵出组（n ＝52），比较三组患者的临床妊娠率，胚胎种植率，早期流产率。结果：Day 5冷冻组的临床妊娠率（63.72％）和种植率（63.72％）均显著高于 Day 6冷冻组（46.94％，46.94％）（P ＜0.05），Day 5冷冻组的流产率（13.89％）低于 Day 6冷冻组（17.39％）；冻融后部分扩张组的临床妊娠率（40.74％）和种植率（40.74％）均显著低于完全扩张组和孵出组的临床妊娠率（60.95％、61.54％）和种植率（60.95％、61.54％），三组的流产率依次递减但无统计学差异分别为（18.18％、15.63％、12.50％）。结论：Day 5囊胚较 Day 6囊胚具有更好的发育潜能，解冻后可获得更好的妊娠结局；冻融后囊胚腔的扩张程度越好，其发育潜能越高，显著改善妊娠结局。
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卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻后继续培养至囊胚的妊娠结局分析
目的 了解卵裂期胚胎玻璃化冷冻解冻后行囊胚培养的妊娠结果.方法 回顾性分析2013年5月-2013年9月在郑州大学第二附属医院生殖中心行玻璃化冷冻解冻后移植的患者共202周期的妊娠情况;其中卵裂期胚胎冷冻解冻后移植者136周期,卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养后移植者66周期.结果 卵裂期胚胎冻融移植者136周期,均有胚胎可移植,获得妊娠45周期,妊娠率为33.08％(45/136)、着床率为17.35％(55/317),早期流产率为17.78％ (8/45);卵裂期胚胎解冻后行囊胚培养者66周期212个胚胎,其中43个周期共形成囊胚87个,囊胚形成率为41.03％ (87/212)、获得妊娠22周期,妊娠率为51.16％(22/43)、着床率为32.94％(28/85)、早期流产率14.29％(3/22).囊胚期移植者的着床率及临床妊娠率显著高于卵裂期移植者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 卵裂期胚胎解冻后培养至囊胚能获得较高的着床率和妊娠率.
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不同玻璃化冷冻方法对家兔卵巢组织形态学c-kit和Ki67表达的影响
目的 探讨佳的玻璃化冷冻方案.方法 12只家兔随机分配到新鲜组(A)、麦管组(B)、微滴组(C)及SSV组(D)后行组织形态学分析及免疫组化检测.结果 A组始基卵泡的形态正常率为91.97%,与之相比,冷冻组B-D组冻融后始基细胞形态正常率分别是69.88%、71.22%、81.06%.较对照组明显下降,有显著性差异(P<0.05);D组中始基卵泡形态正常率高,与B、C组相比差异有显著性(P<0.05);B、C组比较,差异无显著性(P>0.05);各冷冻组合并后始基卵泡的形态正常率为74.03%,初级卵泡形态正常率为64.66%.比较有统计学差异(P<0.05);免疫组化显示:冷冻组复苏后卵巢组织中始基和次级卵泡中c-kitR和Ki67的阳性表达率分别是63.07%、67.11%、66.67%及72.77%、75.46%、75.14%,与对照组(68.23%及77.83%)相比,均无统计学意义(P>0.05).结论 3种玻璃化冷冻方法对卵巢皮质中各级卵泡及其结构均造成一定程度的损害,使各级卵泡的形态正常率明显下降,卵巢间质细胞连接变得疏松;SSV法明显优于其他两种玻璃化冷冻方法.较适合卵巢组织中始基卵泡的保存;冻存卵巢组织对初级卵泡的影响大于始基卵泡.三种玻璃化冷冻方法对家兔卵巢组织c-kit和Ki67的表达均无明显影响;三种冷冻复苏方法均能较好的保存家兔卵巢组织中卵泡生长发育的启动、增殖活性.
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乙二醇玻璃化冷冻液二步法对长爪沙鼠2-细胞胚胎的冷冻保存
目的 评价用乙二醇玻璃化冷冻液二步法对长爪沙鼠2-细胞胚胎冷冻保存的效果.方法 通过超排卵处理后与雄鼠交配获得长爪沙鼠2-细胞胚胎,胚胎在冷冻液EFS20中平衡3 min,然后移入冷冻液EFS40中平衡1 min,之后将细胞冻存管直接浸入液氮中保存.采用二步法复苏胚胎,复苏后移入改良的胚胎培养液(mKSOM)中体外培养.结果 采用该方法冷冻的胚胎复苏后胚胎回收率为86.73％,存活率为82.94％,复苏后存活的胚胎中约1/3胚胎可以在体外发育到囊胚.结论 乙二醇玻璃化冷冻液适于冷冻保存长爪沙鼠2-细胞胚胎.
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Smad2基因敲除小鼠冷冻胚胎库的建立
目的 建立Smad2基因敲除小鼠胚胎库.方法 利用OPS法对Smad2基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻保存,并比较不同杂交组合小鼠的超数排卵数、解冻胚胎的复苏率及发育率.结果 两组不同杂交组合(Smad2+/-♂×Smad2+/-♀和Smad2+/-♂×Smad2+/-♀)小鼠平均超排卵数分别为14.13枚和24.60枚;复苏率分别为90.16%和91.67%;囊胚发育率分别为73.08%和77.05%.这些结果表明Smad2基因敲除杂合子母鼠的超排数量明显低于野生型母鼠的超排数量,而二者胚胎解冻后的复苏率和囊胚发育率没有显著差异.因此我们主要通过对野生型小鼠超数排卵,然后与Smad2基因敲除杂合子雄鼠交配的方法获取胚胎,进行玻璃化冷冻保存,现已冻存胚胎1256枚.结论 成功建立了Smad2基因敲除小鼠胚胎库.
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小鼠不同杂交组合胚胎玻璃化冷冻的研究
通过小鼠胚胎的毒性试验,确定对胚胎无毒性或毒性小的冷冻保护剂的种类、适宜浓度,以便达到提高冷冻解冻后的胚胎存活率的目的.用小鼠不同杂交组合胚胎进行玻璃化冷冻和解冻后,经体外培养观察胚胎的存活率和囊胚孵化率,确定了佳的杂交组合.
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Lats基因敲除小鼠胚胎玻璃化冷冻的研究
用冷冻麦管、细胞冷冻管分别采用一步法和二步法对Lats基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻,胚胎解冻后,囊胚发育率分别为90%、90.1%、89.2%和91.4%;移植后着床率分别为:50.0%、47.1%、43.4%和46.5%,差异不显著;并且与对照组相比差异也不显著.因此,玻璃化冷冻可以作为Lats鼠保种方法之一.
关键词： Lats基因敲除小鼠 胚胎 玻璃化冷冻
