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携蜂毒素基因重组腺病毒对HepG2细胞甲胎蛋白和基质金属蛋白酶-2表达的影响
目的观察以甲胎蛋白转录调控序列(transcription regulatory element of α-fetoprotein, rAFP)驱动蜂毒素基因转录的重组腺病毒对肝癌细胞生物学性状的影响.方法将蜂毒素基因置于rAFP之后,用细菌内高效同源重组法将目的基因重组入腺病毒质粒中,重组质粒在293细胞中进行腺病毒的包装.携有蜂毒素基因的腺病毒感染肝癌细胞后,逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)观察蜂毒素基因的转录;甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定蜂毒素基因转染对肝癌细胞增殖的影响;酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法定量检测甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP);流式细胞术检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotein- ase-2,MMP-2)分子表达情况.结果重组腺病毒载体构建成功,体外转染HepG2肝癌细胞后,蜂毒素基因在rAFP的控制下,可以抑制AFP阳性肝癌细胞的增殖,明显降低其AFP的生成量,但MMP-2分子的表达却是升高的.结论蜂毒素基因转染肝癌细胞后,可改变肿瘤细胞的部分生物学行为,使其表达谱发生改变.
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蛋白酶在EDTA溶解颗粒型胆色素中的作用研究
利用化学分析方法考查了有无蛋白酶存在时EDTA溶解颗粒型胆色素石的溶石效果。发现蛋白酶的加入可使EDTA螯合钙的能力提高6.8倍，EDTA吸收钙的量占总钙的93.7％。
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舍雷肽酶预防胸外科手术后肺不张
目的:探讨胸外科手术后,舍雷肽酶对预防肺不张的作用.方法:119例胸外科手术后的病人,分为2组.常规对照组57例,男性29例,女性28例,年龄45 a±s 7 a(20～69 a).术后用氨唑西林4 g,静脉滴注,qd×7 d;另用0.9%氯化钠注射液5 mL+庆大霉素8万U+地塞米松2 mg雾化吸入,bid×7 d.舍雷肽酶组62例,男性38例,女性24例,年龄46 a±6 a(19～72 a).术后在上述常规治疗外,加舍雷肽酶10 mg,po,tid×7 d.结果:常规对照组术后出现肺不张6例,舍雷肽酶组仅出现1例(P＜0.05).结论:舍雷肽酶预防肺不张效果较好,可作为胸外科手术后辅助治疗药物.
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表皮剥脱毒素A对天疱疮抗原的影响
目的探讨表皮剥脱毒素A(ETA)对体外培养正常人角质形成细胞表面天疱疮抗原的影响及其作用机制.方法人角质形成细胞复层化表达落叶型天疱疮抗原后与ETA作用,分别用寻常型或落叶型天疱疮抗体进行免疫荧光染色,提取培养细胞总蛋白做免疫印迹;测定ETA作用后细胞上清液中IL-1α,IL-6的浓度及其分解酪蛋白的活性.结果 ETA作用前后细胞间落叶型天疱疮抗体着色由强的连续发光转变为弱的断续发光,24 h后恢复,寻常型天疱疮抗体着色无明显变化;免疫印迹检测显示ETA作用后落叶型天疱疮抗原被降解,寻常型天疱疮抗原术受影响.人角质形成细胞与ETA作用后IL-1α分泌受抑制,IL-6的分泌量低于检测水平;ETA作用后细胞上清液分解酪蛋白的活性24 h内逐渐增加,36 h后活性下降.结论 ETA的作用位点在落叶型天疱疮抗原,对寻常型天疱疮抗原无影响;ETA的这种作用具有可逆性,可能通过蛋白酶解作用降解落叶型天疱疮抗原.
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CPP32(Caspase-3)在大肠腺瘤和腺癌中的表达及其与预后的关系
目的探讨大肠腺瘤和大肠癌中CPP32(Caspase-3)的表达及其与预后的关系.方法应用S-P免疫组化技术对15例正常大肠黏膜、39例大肠腺瘤和88例大肠腺癌进行检测.结果 15例正常大肠黏膜、39例大肠腺瘤和88例大肠腺癌中,CPP32阳性表达率分别为88.7%、56.4%和43.8%,三者比较差异有极显著性(x2=10.24,P＜0.01).CPP32表达与组织学分级呈正相关.88例大肠癌中,CPP32阳性表达的术后5年生存率为73.7%,明显高于阴性表达组的34%(x2＝13.61,P＜0.01).结论 CPP32表达的检测有助于大肠癌的诊断及预后的判断.
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用蛋白酶去除胶质在甲状腺肿瘤研究中的应用
在甲状腺肿瘤研究中,常需用免疫组化方法来进行诊断、鉴别诊断以及预后和发病机制方面的探讨.但因大多数甲状腺组织中含有较多的胶质,在作免疫组化时,胶质也着色,使得切片背景较深,尤其是在用免疫组化切片作图像分析时,部分切片无法进行图像分析.使用蛋白酶去除甲状腺组织中的胶质,使切片背景清晰,对比明显,利于结果分析.
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试管婴儿应用蛋白酶人工辅助孵化
试管婴儿技术发展至今,其妊娠率始终徘徊在20%～35%之间,高龄及体外培养可导致胚胎透明带变硬,影响了囊胚的孵出,致使胚胎着床失败[1],这是妊娠率不能提高的原因之一.近几年,许多科研人员尝试了各种人工辅助孵化方法,肯定了该法有改善妊娠率的作用.笔者2001年1～5月对25例为人工辅助孵化组在Day3种植前用蛋白酶对待移植的胚胎进行处理,以期达到辅助孵化的目的,取得一定的效果.
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Caspase-3与男性泌尿生殖系统疾病
半胱天冬蛋白酶(caspase)与凋亡的研究正日益受人们的重视,而caspase-3又是caspase家族中的关键性酶.Caspase-3与男性泌尿生殖系统疾病密切相关.对caspase-3及家族的研究必将在分子水平上进一步揭开凋亡与男性泌尿生殖系统疾病发生的关系.
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血管性血友病因子裂解蛋白酶在肾脏疾病中的意义
血管性血友病因子裂解蛋白酶(vWF-CP)可将大分子量的血管性血友病因子(vWF)多聚体水解成为生理状态下的小分子肽段.vWF-CP活性的改变或vWF对该酶敏感性的改变均可影响vWF多聚体的降解,改变vWF与血小板和内皮下胶原的结合能力.而肾脏疾病如溶血性尿毒症综合征、狼疮性肾炎、肾移植术后等亦有凝血功能的异常.本文就血浆vWF-CP的活性水平在肾脏疾病中的意义作一综述.
关键词： 肾疾病 von Willebrand因子 肽肽水解酶类
